Name: Karakterisering van extracellulaire blaasjes uit biologische vloeistoffen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Leer een gestroomlijnde methode voor de karakterisering van extracellulaire blaasjes uit menselijke traanvloeistof met een tetraspanine-chip. Deze aanpak reduceert verwerkingstijd en ondersteunt niet-invasieve biomarkeronderzoek voor oculaire gezondheid.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>ChipWasher 100</td><td>NanoView</td><td>EV-CW100</td><td>Incubeert, wast, spoelt en droogt de tetraspanine chips. Dit huidige model is niet langer beschikbaar. Prijs op het moment van aankoop: $9,995.00&nbsp;</td></tr><tr><td>ExoView Analyzer software</td><td>NanoView</td><td>N/A</td><td>Analyseert de chipinformatie en produceert excel-bestanden voor verdere analyse. Niet langer beschikbaar.</td></tr><tr><td>ExoView R100</td><td>NanoView</td><td>EV-R100</td><td>Wordt gebruikt om de tetraspanine chips te scannen bij 3 golflengten. Dit huidige model is niet langer beschikbaar. Prijs op het moment van aankoop:&nbsp; $110,000.00</td></tr><tr><td>ExoView Scanner software</td><td>NanoView</td><td>N/A</td><td>Scant de chips op 3 verschillende golflengten. Niet langer beschikbaar.</td></tr><tr><td>Human Tetraspanin Kits</td><td>Unchained Labs</td><td>EV-TETRA-C</td><td>Bevat 8 tetraspanine chips, Incubatie Oplossing, Blocking Oplossing, CD63 antilichaam, CD81 antilichaam, CD9 antilichaam, Oplossing A, Oplossing B, USB en plaatdeksel.</td></tr></tbody></table>

karakterisering van extracellulaire blaasjes uit biologische vloeistoffen

Characterizing Extracellular Vesicles from Biological Fluids

Karakterisering van extracellulaire blaasjes uit biologische vloeistoffen

Extracellular vesicles (EVs) are structures that are produced from cells and participate in intercellular communication by transporting biomolecules from ...

Extracellulaire vesicles dienen als biomarkers voor ziekten en weerspiegelen fysiologische toestanden. Onze aanpak maakt rijke data-extractie mogelijk uit kleine traanvolumes, waardoor EV-onderzoek in biologische vloeistoffen wordt geavanceerd. Belangrijke experimentele uitdagingen omvatten het verkrijgen van voldoende extracellulaire vesicleconcentraties uit kleine monsters, het minimaliseren van monsterverlies tijdens isolatie, en het optimaliseren van analyse om chipsaturatie of zwakke signaaldetectie te voorkomen.Dit protocol omzeilt isolatie-stappen, vermindert verwerkingstijd, en maakt extracellulaire vesicles analyse mogelijk van kleine monstervolumes, waardoor het ideaal is voor beperkte biologische monsters, zoals tranen. Niet-invasieve biomarkers zijn cruciaal voor vroege detectie en beheer van corneastoornissen. Extracellulaire vesicle biomarkers maken ziektemonitoring, gepersonaliseerde behandelingen, betere patiëntnaleving, en verbeterde kwaliteit van leven mogelijk.Ons lab was pionier in de analyse van extracellulaire vesicles in traanmonsters van KC-subjects, waarbij unieke tEV-signaturen werden geïdentificeerd. Dit baant de weg voor toekomstige diagnostiek en EV-gerichte therapeutische doelen. Om te beginnen, zet de biologische monsters en een tetraspanin chip op de werkruimte.Pipet 70 microliter van menselijke biologische monsters die voorgemengd zijn met oplossing B van een menselijke tetraspanin kit op een chip. Plaats de film op een chipwasplaat om monsterverdamping te voorkomen. Na 16 uur, plaats de plaat in de chipwasser.Vergrendel het op zijn plaats en sluit het deksel. Druk op de CW-TETRA v0 optie op de chipwasser. Terwijl de chips worden gewassen, bereid 300 microliter blokkeringsoplossing per chip voor.Voeg 0,6 microliter van elk antilichaam per chip toe aan de blokkeringsoplossing. Vortex de blokkeringsoplossing met het antilichaamcocktail om een grondige menging te garanderen. Wanneer het chipwassen voltooid is, voeg 250 microliter van de blokkeringsoplossing met het antilichaamcocktail toe bovenop elke chip.Sluit vervolgens het deksel en druk op Doorgaan. Wanneer de chipwasser tjilpt, verwijder de chipwasplaat. Verplaats de chips omhoog over de oprit.Plaats de plaat terug in de chipwasser, zorg ervoor dat deze veilig op zijn plaats vergrendelt. Sluit het deksel en druk op Doorgaan. Om te beginnen, zet een nanodeeltjesanalysator aan.Start het scansoftwareprogramma op het bureaublad verbonden met de nanodeeltjesanalysator. Selecteer de chipmap om elke tetraspanin chip te kiezen en lokaliseer deze in Chipspositie op de chuck. Klik op de drie vierkanten onder Chipspositie om de fluorescentie aan te zetten.De vierkanten worden geel, blauw en rood. Druk op het chuckdeksel en trek het om het te verwijderen. Bevestig vervolgens de monstergeladen tetraspanin chips stevig op de chuck.Lign de pinnen van het chuckdeksel met de gaten en druk naar beneden. Schuif het deksel om het op zijn plaats te vergrendelen. Plaats vervolgens de chuck op het stadium en vergrendel deze op zijn plaats.Klik vervolgens op Chips scannen vanuit de softwareinterface, klik vervolgens op OK. Zodra het stadium volledig in de machine beweegt, sluit de deur. Wanneer de scan voltooid is, open de deur om het stadium uit te werpen en controleer de resultaten. Als de scans succesvol waren, gooi de chips weg.Plaats de volgende set chips op de chuck. Of keer de lege chuck terug naar het stadium. Verlaat de software en zet de machine uit wanneer je klaar bent.Optimale fluorescentieniveaus van extracellulaire vesicles werden waargenomen in de CD63, CD81 en CD9 kanalen, terwijl het MIgG controlekanaal zwart bleef, wat de controlespecificiteit bevestigt. CD81 was verminderd voor biologische vloeistoffen. Geen fluorescentie in CD63, CD81 en CD9 kanalen is indicatief voor een afwezigheid van extracellulaire vesicles.Oversaturatie van fluorescentie was duidelijk, waardoor het moeilijk werd om zinvolle gegevens te onderscheiden vanwege overmatige labeling, met name in CD63, CD81 en CD9 kanalen.

characterizing-extracellular-vesicles-from-biological-fluids

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Extracellulaire vesicules in bloed zijn voorgesteld als nieuwe biomarkers voor verschillende ziekten. Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van grote plasmamembraan-afgeleide microvesicles uit perifere bloedmonsters en hun daaropvolgende analyse door conventionele flowcytometrie en Western Blotting.

Isolatie en karakterisering van microvesicles uit perifeer bloed

In dit protocol beschrijven we de complete workflow voor snelle isolatie van extracellulaire blaasjes uit menselijk bloed en karakterisering van specifieke markers door fluorescentie-gebaseerde analyse van het nanoparticle-tracking. De gepresenteerde resultaten geven een hoge graad van reproduceerbaarheid en kunnen worden aangepast aan de cel cultuur supernatant.

Snelle fluorescentie gebaseerde karakterisering van één extracellulaire blaasjes in menselijk bloed met Nanoparticle-tracking analyse

Het protocol wordt een reproduceerbare methode ontworpen voor gebruik met cel cultuur supernatant voor het opsporen van oppervlakte epitopes op kleine extracellulaire blaasjes (EV) beschreven. Het maakt gebruik van specifieke EV immunoprecipitation met parels in combinatie met de antilichamen die surface antigeen CD9 herkent, CD63, en CD81. De methode is geoptimaliseerd voor downstream stroom cytometry analyse.

Cytometrische analyse van extracellulaire blaasjes van cel-geconditioneerd Media stromen

Hier bieden we een gedetailleerd protocol om te isoleren van kleine extracellulaire blaasjes (EVs) hele weefsel, met inbegrip van hersenen en tumor exemplaren. Deze methode biedt een reproduceerbare techniek om EVs extract van solide weefsel voor verder stroomafwaarts analyses.

Winning van extracellulaire blaasjes uit hele weefsel

Het onderhavige rapport belicht chronologische eisen voor extracellulaire vesicle (EV) isolatie van microglia of bloedmacrofagen. Microglia-afgeleide EV's werden geëvalueerd als regelgevers van de neurite uitgroei, terwijl bloed macrofaag-afgeleide EV's werden bestudeerd in de controle van C6 glioom cel invasie in in vitro testen. Het doel is om deze EV-functies als immuunbemiddelaars in specifieke micro-omgevingen beter te begrijpen.

Karakterisering van immuuncel-afgeleide extracellulaire vesicles en het bestuderen van functionele impact op celmilieu

Het protocol hier toont aan dat extracellulaire blaasjes adequaat kunnen worden gescheiden van geconditioneerde celkweekmedia met behulp van grootte-uitsluitingschromatografie.

Grootte-uitsluitingschromatografie voor het scheiden van extracellulaire blaasjes van geconditioneerde celkweekmedia

Het huidige protocol beschrijft een methode om extracellulaire blaasjes uit het perifere bloed en vaste weefsels te extraheren met daaropvolgende profilering van oppervlakteantigenen en eiwitladingen.

Isolatie en analyse van traceerbare en gefunctionaliseerde extracellulaire blaasjes uit het plasma en vaste weefsels

De nieuwste generatie EV-karakteriseringstools is in staat om één EV-analyse over meerdere parameters tegelijk uit te voeren. Nano-flow cytometrie meet alle biologische deeltjes groter dan 45 nm zonder labeling en identificeert specifieke kenmerken van subpopulaties door een verscheidenheid aan fluorescerende etiketteringstechnieken.

Single Extracellular Vesicle Transmembrane Protein Characterization door Nano-Flow Cytometry

Dit artikel beschrijft een methodologie voor de isolatie, karakterisering en kwantificering van humane plasma-afgeleide extracellulaire blaasjes (EV) en presenteert een workflow voor labelvrije analyse van het EV-proteoom met behulp van vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS).

Isolatie, karakterisering en proteomische analyse van plasma-afgeleide extracellulaire blaasjes voor de ontdekking van cardiovasculaire biomarkers

Dit protocol geeft een gedetailleerde beschrijving van het sorteren van extracellulaire blaasjes (EV's) die vrijkomen door mesenchymale stromale cellen. Het richt zich met name op de instelling van het instrument en de optimalisatie van de sorteeromstandigheden. Het doel is om extracellulaire blaasjes te sorteren met behoud van hun kenmerken.

Een succesvolle sortering instellen voor extracellulaire isolatie van blaasjes

Leer een gestroomlijnde methode voor de karakterisering van extracellulaire blaasjes uit menselijke traanvloeistof met een tetraspanine-chip. Deze aanpak reduceert verwerkingstijd en ondersteunt niet-invasieve biomarkeronderzoek voor oculaire gezondheid.

Karakterisering van extracellulaire blaasjes uit biologische vloeistoffen

Meer video's verkennen