Name: Gevalideerde immunochemische test voor uitgebreide bepaling van de humane epidermale groeifactorreceptor 2 die vrijkomt uit en gebonden is aan cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Leer een gevalideerde sandwich ELISA voor nauwkeurige kwantificatie van HER2-eiwit in celgebonden en vrijgekomen vormen uit in vitro gekweekte cellen en patiëntmonsters.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Subbiah, V., Kurzrock, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Debunking+the+delusion+that+precision+oncology+is+an+illusion%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Debunking the delusion that precision oncology is an illusion.</a> Oncologist. 22 (8), 881-882 (2017).</li>
<li>Swain, S. M., Shastry, M., Hamilton, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+HER2positive+breast+cancer%3A+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting HER2positive breast cancer: advances and future directions.</a> Nat Rev Drug Discov. 22 (2), 101-126 (2023).</li>
<li>McLemore, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+testing+in+breast+cancers%3A+comparison+of+assays+and+interpretation+using+ASCO%2FCAP+2013+and+2018+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">HER2 testing in breast cancers: comparison of assays and interpretation using ASCO/CAP 2013 and 2018 guidelines.</a> Breast Cancer Res Treat. 187 (1), 95-104 (2021).</li>
<li>Iqbal, N., Iqbal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+epidermal+growth+factor+receptor+2+%28HER2%29+in+cancers%3A+overexpression+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Int%22%5BJournal%5D)">Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) in cancers: overexpression and therapeutic implications.</a> Mol Biol Int. 2014, 852748(2014).</li>
<li>Tsé, C., Gauchez, A. S., Jacot, W., Lamy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+shedding+and+serum+HER2+extracellular+domain%3A+biology+and+clinical+utility+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Rev%22%5BJournal%5D)">HER2 shedding and serum HER2 extracellular domain: biology and clinical utility in breast cancer.</a> Cancer Treat Rev. 38 (2), 133-142 (2012).</li>
<li>Reix, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+study+to+assess+the+clinical+utility+of+serum+HER2+extracellular+domain+in+breast+cancer+with+HER2+overexpression%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">A prospective study to assess the clinical utility of serum HER2 extracellular domain in breast cancer with HER2 overexpression.</a> Breast Cancer Res Treat. 160 (2), 249-259 (2016).</li>
<li>Di Gioia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+HER2+supports+HER2testing+in+tissue+at+the+time+of+primary+diagnosis+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Serum HER2 supports HER2testing in tissue at the time of primary diagnosis of breast cancer.</a> Clin Chim Acta. 430, 86-91 (2014).</li>
<li>Carney, W. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+circulating+levels+of+the+HER2%2Fneu+oncoprotein+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Breast+Cancer%22%5BJournal%5D)">Monitoring the circulating levels of the HER2/neu oncoprotein in breast cancer.</a> Clin Breast Cancer. 5 (2), 105-116 (2004).</li>
<li>Azar, F. P., Fatemeh, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+serum+human+epidermal+growth+factor+receptor+2+%28HER2%29%2Fneu+testing+in+breast+cancer+patients+to+maximize+detection+of+HER2%2Fneupositive+patients+and+susceptibility+to+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Value of serum human epidermal growth factor receptor 2 (HER2)/neu testing in breast cancer patients to maximize detection of HER2/neupositive patients and susceptibility to trastuzumab.</a> Clin Biochem. 44 (13), (2011).</li>
<li>Pandey, I., Misra, V., Pandey, A., Verma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+HER2%2Fneu+in+gastric+adenocarcinoma+and+its+correlation+with+serum+HER2%2Fneu+level+and+Ecadherin+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Pathol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Expression of HER2/neu in gastric adenocarcinoma and its correlation with serum HER2/neu level and Ecadherin expression.</a> Indian J Pathol Microbiol. 65 (1), 35-41 (2022).</li>
<li>Agnon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELISA+assay+employing+epitopespecific+monoclonal+antibodies+to+quantify+circulating+HER2+with+potential+application+in+monitoring+cancer+patients+undergoing+therapy+with+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">ELISA assay employing epitopespecific monoclonal antibodies to quantify circulating HER2 with potential application in monitoring cancer patients undergoing therapy with trastuzumab.</a> Sci Rep. 10 (1), 3016(2020).</li>
<li>Antos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unique+monoclonal+antibodies+and+immunochemical+assay+for+comprehensive+determination+of+the+cellbound+and+soluble+HER2+in+different+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">The unique monoclonal antibodies and immunochemical assay for comprehensive determination of the cellbound and soluble HER2 in different biological samples.</a> Sci Rep. 14 (1), 3978(2024).</li>
<li>Andreasson, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+immunoassay+method+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">A practical guide to immunoassay method validation.</a> Front Neurol. 6, 179(2015).</li>
<li>Perrier, A., Gligorov, J., Lefèvre, G., Boissan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+domain+of+HER2+in+serum+as+a+biomarker+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">The extracellular domain of HER2 in serum as a biomarker of breast cancer.</a> Lab Invest. 98 (6), 696-707 (2018).</li>
<li>Van Gorkom, T., van Arkel, G. H. J., Voet, W., Thijsen, S. F. T., Kremer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+the+edge+effect+in+a+commercial+enzymelinked+immunosorbent+assay+for+the+diagnosis+of+Lyme+neuroborreliosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Consequences of the edge effect in a commercial enzymelinked immunosorbent assay for the diagnosis of Lyme neuroborreliosis.</a> J Clin Microbiol. 59 (8), e0328020(2021).</li>
<li>Sadok, I., Rachwał, K., Staniszewska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+quantification+of+selected+kynurenines+analyzed+by+liquid+chromatographymass+spectrometry+in+medium+collected+from+cancer+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Simultaneous quantification of selected kynurenines analyzed by liquid chromatographymass spectrometry in medium collected from cancer cell cultures.</a> J Vis Exp. 159, e61031(2020).</li>
<li>Giordani, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+changing+patterns+in+HER2+addiction+by+liquid+biopsy+in+advanced+breast+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring changing patterns in HER2 addiction by liquid biopsy in advanced breast cancer patients.</a> J Exp Clin Cancer Res. 43 (1), 182(2024).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+monitoring+HER2+expression+in+breast+cancer+during+trastuzumab+therapy+with+a+peptide+probe+99mTcHYNICH10F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Nucl+Med+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Imaging and monitoring HER2 expression in breast cancer during trastuzumab therapy with a peptide probe 99mTcHYNICH10F.</a> Eur J Nucl Med Mol Imaging. 47 (11), 2613-2623 (2020).</li>
<li>NinioMany, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR125a+induces+HER2+expression+and+sensitivity+to+trastuzumab+in+triplenegative+breast+cancer+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">miR125a induces HER2 expression and sensitivity to trastuzumab in triplenegative breast cancer lines.</a> Front Oncol. 10, 191(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Biotin labeling kit-NH2</td><td>Abnova</td><td>KA0003</td><td></td></tr><tr><td>Blotting Grade, powdered milk, low in fat</td><td>Roth</td><td>T145.1</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting Slides for TC10/TC20 cell Counter, Dual-Chamber</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Plates</td><td>Biologix</td><td>07-6012</td><td></td></tr><tr><td>Cell Scrapers</td><td>Biologix</td><td>70-1250</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Ohaus</td><td>30130868</td><td></td></tr><tr><td>Class II Biological Safety Cabinet - Telstar Bio II Advance 6</td><td>Telstar</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Clear Flat-Bottom 96-Well Plates</td><td>Thermo Fisher</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Culture Safe CO2 Incubators - Touch 190S</td><td>Leec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM - high glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0822</td><td></td></tr><tr><td>ELISA plate reader</td><td>BioTek</td><td>800TSUVI</td><td></td></tr><tr><td>FBS Standard, fetal bovine serum</td><td>PAN Biotech</td><td>P30-19375</td><td></td></tr><tr><td>Forced circulation laboratory dryer</td><td>BINDER</td><td>9090-0018</td><td></td></tr><tr><td>HRP-Avidin</td><td>Thermo Fisher</td><td>43-4423</td><td></td></tr><tr><td>Human Her2 / ErbB2 Protein, Fc Tag, premium grade</td><td>AcroBIOSYSTEMS</td><td>HER2-H5253</td><td></td></tr><tr><td>Immunowash Microplate Washer</td><td>Bio-Rad</td><td>170-7009</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (clone 70.21.73.67)</td><td>SDS Optic</td><td>BIO-ABH-2</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (clone 70.27.58)</td><td>SDS Optic</td><td>BIO-ABH-1</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 Cell line</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>POCH</td><td>810530115</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>POCH</td><td>BA0981118</td><td></td></tr><tr><td>Protease Inhibitor Cocktail</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Fair PBS</td><td>Roth</td><td>1111.2</td><td></td></tr><tr><td>SK-BR-3 [SKBR3] Cell line</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td></td></tr><tr><td>SK-OV-3 [SKOV-3; SKOV3] Cell line</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td></td></tr><tr><td>Stop solution 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210900</td><td></td></tr><tr><td>TC20 Automated Cell Counter</td><td>Bio-rad</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>TMB substrate 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210902</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Ohaus</td><td>30392117</td><td></td></tr><tr><td>Wave motion shaker</td><td>Ohaus</td><td>30391968</td><td></td></tr></tbody></table>

gevalideerde immunochemische test voor uitgebreide bepaling van de humane epidermale groeifactorreceptor 2 die vrijkomt uit en gebonden is aan cellen

Validated Immunochemical Assay for Comprehensive Determination of the Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Released from and Bound to Cells

Gevalideerde immunochemische test voor uitgebreide bepaling van de humane epidermale groeifactorreceptor 2 die vrijkomt uit en gebonden is aan cellen

Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is a well-established cancer marker. It became a very successful diagnostic and therapeutic target, ...

validated-immunochemical-assay-for-comprehensive-determination-human

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Het chromium afgifte assay, een gemeenschappelijke test voor het detecteren cytotoxische T-celactiviteit, heeft verschillende beperkingen. Gebruikmakende van antigeen-specifieke CD8 + T-cellen en humane borsttumor lijn, SKBR3, in dit artikel is een impedantie-gebaseerde aanpak onderzocht kan detecteren celdoding.

Het bepalen van optimale cytotoxische activiteit van de mens Her2neu Specifieke CD8 T cellen door vergelijking van de Cr51 afgifte test aan de xCELLigence System

In de afgelopen jaren zijn levende celgebaseerde proeven met succes gebruikt om antilichamen tegen oppervlak en conformationele antigenen. Hier beschrijven we een werkwijze met hoge doorvoer flowcytometrie waardoor de analyse van grote patiëntencohorten. Detectie van nieuwe antilichamen verbetert diagnose en behandeling van immuun-gemedieerde aandoeningen.

High-throughput flowcytometrie-Cell gebaseerde test voor opsporing van antilichamen tegen N-methyl-D-aspartaat receptor of dopamine-2 receptor in het menselijk serum

Dit protocol beschrijft het labelen van epidermale groeifactorreceptor (EGFR) op COS7 fibroblastcellen, en daaropvolgend correlatief licht- en elektronenmicroscopie van hele cellen in gehydrateerde toestand. Het label bevatte fluorescente kwantumdots. Het protocol kan worden gebruikt om de stoichiometrie van EGFR op het niveau van enkele moleculen te bestuderen.

Het bestuderen van de stoichiometrie van de epidermale groeifactor receptor in intacte cellen met Correlatieve Microscopy

We beschrijven een eenvoudige celgebaseerde bioassay voor het detecteren, kwantificeren en volgen van de activiteit van leden van de vasculaire endotheliale groeifactor familie van liganden. De test maakt gebruik van chimère receptoren tot expressie gebracht in een factor-afhankelijke cellijn die een semi-kwantitatieve of kwantitatieve beoordeling van receptorbinding en verknoping verschaffen door het ligand.

Een eenvoudige bioassays voor de beoordeling van de vasculaire endotheliale groeifactoren

Capillaire elektrisch gericht is een antilichaam gebaseerde, ultrasensitive, hoge doorvoer techniek, waardoor gedetailleerde karakterisering van eiwitten en hun isoforms van extreem kleine biologische monsters. Het volgende beschrijft een protocol voor de detectie en kwantificering van specifieke proteïnen en hun isoforms in een geautomatiseerd en gerobotiseerd wijze.

Zeer gevoelige en kwantitatieve detectie van eiwitten en hun Isoforms door capillaire elektrisch gericht methode

Antilichamen die zich aan target receptoren van het celoppervlak binden kunnen verlenen bevleesdheid en clustering wijzigingen. Deze dynamische veranderingen hebben gevolgen voor het karakteriseren van Geneesmiddelenontwikkeling in de doelcellen. Dit protocol maakt gebruik van de confocal microscopie en afbeelding correlatie spectroscopie via ImageJ/FIJI te kwantificeren van de omvang van de receptor clustering op het celoppervlak.

Confocale microscopie onthult cel oppervlakte Receptor aggregatie via afbeelding correlatie spectroscopie

Hier presenteren we een cel-gebaseerde stroom cytometry methode voor het detecteren van neutraliserende antilichamen of andere factoren die met de cellulaire opname van enzym vervangende therapieën in een menselijke matrix, zoals cerebrale spinal fluid (CSF) of menselijk serum interfereren.

Opsporing van antilichamen die de cellulaire opname van enzym vervangende therapieën met een test van cel-gebaseerde neutraliseren

We beschrijven een kwantitatieve real-time in vitro cytolysis assay systeem om de potentie van chimere antigeen receptor T-cellen gericht op vloeibare en solide tumorcellen te evalueren. Dit protocol kan worden uitgebreid om andere immuuneffector cellen te beoordelen, evenals combinatie behandelingen.

Een real-time potentie test voor Chimerische antigeen receptor T-cellen gericht op vaste en hematologische kankercellen

Een noodzakelijke stap in de ontwikkeling van aptameren tegen kanker is om de binding aan het doelwit te testen. We demonstreren een flowcytometrische test om deze binding te bestuderen, waarbij we het belang benadrukken van het opnemen van een negatieve controle aptamer en kankercellen die positief of negatief zijn voor dat specifieke eiwit.

Een flowcytometrie-gebaseerde celoppervlakeiwitbindingstest voor het beoordelen van selectiviteit en specificiteit van een antikanker aptamer

Hier presenteren we een protocol voor een antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit (ADCC) assay met behulp van een ADCC-bioassaykit. Deze methode biedt een waardevol hulpmiddel voor het ophelderen van het ADCC-mechanisme en het evalueren van het therapeutisch potentieel van antilichamen in kankerimmunotherapie.

Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay

Leer een gevalideerde sandwich ELISA voor nauwkeurige kwantificatie van HER2-eiwit in celgebonden en vrijgekomen vormen uit in vitro gekweekte cellen en patiëntmonsters.

Gevalideerde immunochemische test voor uitgebreide bepaling van de humane epidermale groeifactorreceptor 2 die vrijkomt uit en gebonden is aan cellen (Video) | JoVE Journal

Gevalideerde immunochemische test voor uitgebreide bepaling van de humane epidermale groeifactorreceptor 2 die vrijkomt uit en gebonden is aan cellen

Meer video's verkennen