Name: Een eenvoudige en snelle methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en primaire alvleesklier-acinaire cellen van muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Leer een eenvoudige methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en acinaire cellen uit de alvleesklier van muizen. Deze techniek levert circa 120 eilandjes en 1,6-1,95 miljoen cellen per muis met hoge levensvatbaarheid voor diabetesonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 μm filter</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Filter de voorbereide collagenase P oplossing</td></tr><tr><td>0,25 M Calciumchloride (Steriele)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>Calcium-afhankelijke signaalroute voor activering van insulinesecretie</td></tr><tr><td>1 ml spuit</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Gebruikt voor perfusie van collagenase P in pancreasweefsel.</td></tr><tr><td>1,25% tribromoethanoloplossing</td><td>Beijing Yosida Biotechnology Co., Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anesthesie</td></tr><tr><td>1,5 mL centrifugeerbuis</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Verzamel de celsupernatant voor centrifugatie en opslag.</td></tr><tr><td>1x Hank&rsquo;s gebalanceerde zout oplossing</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Bereid de collagenase P oplossing en spoel het pancreasweefsel</td></tr><tr><td>12-wells celcultuurplaat</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Houdt het pancreasweefsel en het geëxtraheerde acinar van cultuur</td></tr><tr><td>15 mL centrifugeerbuis</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Oplossingen bewaren tijdens het experiment</td></tr><tr><td>24-wells celcultuurplaat</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Cultureer de geëxtraheerde eilandjes</td></tr><tr><td>40-mesh sierflens</td><td>Weidan Instruments</td><td>N/A</td><td>Filter pancreasweefsel</td></tr><tr><td>5 mL Pasteur pipette</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Pipetteren van vloeistoffen en fysiek verstoring van pancreasweefsel</td></tr><tr><td>50 mL centrifugeerbuis</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Oplossingen bewaren tijdens het experiment, het bevatten van weefsels, en centrifugeren</td></tr><tr><td>60 mm celcultuur schotels</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Container voor het bewaren van kweekmedium bevattend eilandjes voor gemakkelijk plukken</td></tr><tr><td>75% Ethanol oplossing</td><td>HYNAUT</td><td>N/A</td><td>Doordrenk de muizen voor desinfectie.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>N/A</td><td>Genereer afbeeldingen.</td></tr><tr><td>Beckman Allegra X-12/X-12R Centrifuge</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Centrifuge</td></tr><tr><td>Bovine serum albumine (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Behoud de normale fysiologische functie van eilandjes en gebruik (het/dit) om glucose oplossingen van verschillende concentraties te bereiden.</td></tr><tr><td>C57BL/6J muizen, SPF-klasse, 6&ndash;8 weken oud, met een gewicht van 18&ndash;25 g</td><td>Laboratory Animal Center of Naval Medical University&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calcein/PI Cel Levensvatbaarheid en Cytotoxiciteit Assay Kit</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Detecteer cel levensvatbaarheid en cytotoxiciteit van dierlijke cellen op basis van Calcein-AM (Calcein AM) en Propidium jodide (PI) dubbele fluorescentiekleuring van levende en dode cellen tegelijkertijd.</td></tr><tr><td>Calciumchloride (watervrij)</td><td>Sangon Biotech</td><td>10043-52-4</td><td>Bereid de collagenase P oplossing</td></tr><tr><td>Cel zeef (100 μm)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Filteren van acinar cellen</td></tr><tr><td>Collagenase P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Verteer pancreasweefsel</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose oplossing (20%, Steriele)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Stimuleren van insulinesecretie uit eilandjes.</td></tr><tr><td>DMEM basis (1x) (Dulbecco&rsquo;s gemodificeerd arend medium)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Cultureer acinar cellen</td></tr><tr><td>Foetaal bovien serum (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Bereid het kweekmedium</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PREMIUM steriele oplossing</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>dichtheidsgradiënt medium voor dichtheidsgradiënt stratificatie</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Genereer afbeeldingen en voer statistische analyse uit.</td></tr><tr><td>HEPES oplossing (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Bereid de collagenase P oplossing</td></tr><tr><td>Hoge snelheid/gekoelde centrifuge</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Centrifuge</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institutes of Health Laboratory for Optical and Computational Instrumentation(LOCI)</td><td>N/A</td><td>Analyseer cel fluorescentie beelden en bereken cel levensvatbaarheid.</td></tr><tr><td>Omgekeerde biologische microscoop</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td>Observeer de celmorfologie en selecteer de eilandjes.</td></tr><tr><td>Omgekeerde fluorescentiemicroscoop</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Observeer de cellulaire fluorescente signalen en leg fluorescente beelden vast.</td></tr><tr><td>Krebs-Ringer bicarbonate HEPES buffer</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Behoud de normale fysiologische functie van eilandjes en gebruik (het/dit) om glucose oplossingen van verschillende concentraties te bereiden.</td></tr><tr><td>Muis INS (Insuline) ELISA Kit</td><td>Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Detecteer de insulinesecretie niveau van eilandjes.</td></tr><tr><td>Oogheelkundig tang (10 cm, gebogen met haak)</td><td>Qingyi Medical Devices</td><td>N/A</td><td>Assisteren bij de dissectie</td></tr><tr><td>Oogheelkundig tang (10 cm, recht met tand)</td><td>Qingyi Medical Devices</td><td>N/A</td><td>Assisteren bij de dissectie en plotselinge scheiding van pancreasweefsel en de extractie van pancreasweefsel</td></tr><tr><td>Penicilline streptomycine oplossing</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Bereid het kweekmedium om besmetting te voorkomen</td></tr><tr><td>RPMI-1640 medium,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Beëindig de collagenase P spijsverteringsoplossing en cultureer de eilandjes</td></tr><tr><td>Trypsine remmer van Glycine max (soja)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Bereid de collagenase P oplossing</td></tr><tr><td>Chirurgische schaar (10 cm, recht-punt)</td><td>Qingyi Medical Devices</td><td>N/A</td><td>Assistentie bij anatomie en het snijden van pancreasweefsel in kleine stukken</td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>OAICLAB</td><td>OW-HF</td><td>Behoud de verteringstemperatuur.</td></tr><tr><td>&alpha;-amylase en &beta;-amylase activiteitstest kit</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Detecteer de niveaus van amylase gesecreteerd door acinar cellen onder verschillende omstandigheden</td></tr>

een eenvoudige en snelle methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en primaire alvleesklier-acinaire cellen van muizen

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Een eenvoudige en snelle methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en primaire alvleesklier-acinaire cellen van muizen

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

a-simple-rapid-method-for-simultaneous-isolation-primary-islets

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een gedetailleerde beschrijving van muis eilandje isolatie wordt beschreven door de techniek van in situ pancreas ductaal infusen en perfusie van een combinatie van gezuiverd collagenase en neutrale protease.

Muis Islet van Langerhans Isolatie met behulp van een combinatie van Gezuiverde Collagenase en neutraal protease

This video describes the technique used for isolating pancreatic acinar cells--exocrine cells--containing a variety of digestive enzymes. Primary acinar cells are useful in the ex vivo study of acinar-to-ductal metaplasia (ADM)--an early event in developing pancreatic cancer.

Primary Acinar Cell Isolation: A Method to Isolate Acinar Cells from Mouse Pancreas

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other important biological functions. This protocol explains a method for isolating pancreatic islets by first perfusing collagenase via Ampulla of Vater to digest the exocrine pancreatic tissue and a simplified density gradient centrifugation to purify the islets from mice.

Pancreatic Islets Isolation through Collagenase Perfusion: An Enzymatic Method to Isolate Pancreatic Islet Cells

Het testen in vitro β-celfunctie met geïsoleerde eilandjes van Langerhans muis is een belangrijke component in de studie van diabetes pathofysiologie en therapie. Terwijl veel downstream applicaties beschikbaar zijn, dit protocol beschrijft specifiek de meting van intracellulaire cyclische adenosine monofosfaat (cAMP) als een essentiële parameter bepalen van β-cel functie.

Een methode voor muis eilandjes van Langerhans Isolatie en intracellulaire cAMP Bepaling

In deze publicatie beschrijven we een snelle en gemakkelijke werkwijze voor het isoleren en kweken van primaire acinaire cellen van de pancreas muizen. Deze methode vormt een waardevolle benadering van de fysiologie van verse primaire normale / getransformeerde exocriene pancreas cellen te bestuderen.

Isolatie en Cultuur van de Muis Primaire Pancreatic Acinaire Cells

We presenteren hier een protocol voor de isolatie van eilandjes uit het muismodel van type 2 diabetes, Leprdb en details van een live-cel assay voor het meten van insulinesecretie uit intacte eilandjes dat gebruikmaakt van 2 foton microscopie.

LepR<sup&gt; Db</sup&gt; Mouse Model van Type 2 Diabetes: eilandjes van Langerhans Isolatie en live-cell 2-Photon Imaging van intacte Eilandjes

We beschrijven een protocol hierin voor het isoleren van intacte eilandjes van neonatale muizen. Pancreata werden gedeeltelijk gedigereerd met collagenase, gevolgd door wassen en handmatige oogst. 20-80 eilandje clusters verkrijgbaar per pancreas van pasgeboren muizen, die geschikt zijn voor verschillende eilandje studies.

Effectieve Isolatie van Functionele eilandjes van neonatale muis alvleesklier

Dit eilandje isolatie protocol beschreef een roman route van Collagenase injectie om het exocriene weefsel te verteren en een vereenvoudigde gradiënt procedure om de eilandjes van muizen te zuiveren. Het gaat om enzymatische spijsvertering, gradiënt scheiding/zuivering en eilandje hand-picking. Succesvolle isolatie kan 250 – 350 hoge kwaliteit en volledig functionele eilandjes per muis opleveren.

Een eenvoudig hoog rendement protocol voor isolatie van de alvleesklier eiland van muizen

Hier presenteren we een protocol om te isoleren van de alvleesklier eilandjecellen muis voor het screenen van de ROS inducties door de xenobiotica teneinde de potentiële diabetogenic xenobiotische chemische stoffen.

Een lymfkliertest alvleesklier Islet cel-gebaseerde Screening voor Diabetogenic milieu chemische stoffen

Hier presenteren we een protocol voorbeeld vorming en kwantificeren van de calcium dynamica in heterogene celpopulaties, zoals de eiland cellen van de alvleesklier. Fluorescerende verslaggevers worden geleverd in de perifere laag van cellen binnen het eilandje, die vervolgens wordt geïmmobiliseerd en imaged, en per-cel analyse van de dynamiek van de intensiteit van de fluorescentie wordt uitgevoerd.

Imaging calcium dynamica in subpopulaties van muizen pancreatic eilandje cellen

Dit protocol beschrijft een gestandaardiseerde methode voor chirurgische oogst, enzymatische vertering en dichtheidsgradiëntzuivering van Lewis rat-pancreaseilandjes, waardoor hoogopbrengst- en hoogzuiverheidspreparaten mogelijk zijn voor direct gebruik in transplantatie- of in vitrostudies .

Isolatie en zuivering van het pancreaseiland door Lewisratten met behulp van enzymatische vertering en dichtheidsgradiëntscheiding

Leer een eenvoudige methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en acinaire cellen uit de alvleesklier van muizen. Deze techniek levert circa 120 eilandjes en 1,6-1,95 miljoen cellen per muis met hoge levensvatbaarheid voor diabetesonderzoek.

Een eenvoudige en snelle methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en primaire alvleesklier-acinaire cellen van muizen (Video) | JoVE Journal

Een eenvoudige en snelle methode voor gelijktijdige isolatie van primaire eilandjes en primaire alvleesklier-acinaire cellen van muizen

Meer video's verkennen