Name: Superresolutie beeldvorming en gedeeld beheer: een protocol voor confocale microscopie met multiplexdetectie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Leer superresolutiebeeldvorming met confocale microscopie en multiplexdetectie voor celbiologisch onderzoek. Dit protocol maakt hoge resolutie (~120 nm) toegankelijk voor vaste en levende cellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prakash, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+in+super-resolution+microscopy+-+definition%2C+trade-offs+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Resolution in super-resolution microscopy - definition, trade-offs and perspectives.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 25, 677-682 (2024).</li>
<li>Schermelleh, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopy+demystified%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopy demystified.</a> Nat Cell Biol. 21, 72-84 (2019).</li>
<li>Bond, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+advances+in+super-resolution+microscopy+to+study+cellular+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Technological advances in super-resolution microscopy to study cellular processes.</a> Mol Cell. 82, 315-332 (2022).</li>
<li>Huff, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+new+2D+super-resolution+mode+for+ZEISS+Airyscan%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">The new 2D super-resolution mode for ZEISS Airyscan.</a> Nat Methods. 14, 1223(2017).</li>
<li>Wu, X., Hammer, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ZEISS+Airyscan%3A+Optimizing+Usage+for+Fast+Gentle%2C+Super-Resolution+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">ZEISS Airyscan: Optimizing Usage for Fast Gentle, Super-Resolution Imaging.</a> Methods Mol Biol. 2304, 111-130 (2021).</li>
<li>Yin, W., Liu, S. S., Zhao, Q. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+strategy+for+fast+super-resolution+imaging+parameters+based+on+LSM+900%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimization strategy for fast super-resolution imaging parameters based on LSM 900.</a> Chin J Cell Biol. 47, 1644-1655 (2025).</li>
<li>Moore, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+cables+and+comet+tails+organize+mitochondrial+networks+in+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Actin cables and comet tails organize mitochondrial networks in mitosis.</a> Nature. 591, 659-664 (2021).</li>
<li>Ranjan, R., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+live+cell+imaging+of+subcellular+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Super-resolution live cell imaging of subcellular structures.</a> J Vis Exp. (167), e61563(2021).</li>
<li>Harmer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airyscan+super+resolution+microscopy+to+study+trypanosomatid+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Airyscan super resolution microscopy to study trypanosomatid cell biology.</a> Methods Mol Biol. 2116, 449-461 (2020).</li>
<li>Lin, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+functions+and+management+of+laser+scanning+confocal+microscopy+LSM880+with+Airyscan%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chin+Electron+Microsc+Soc%22%5BJournal%5D)">Advanced functions and management of laser scanning confocal microscopy LSM880 with Airyscan.</a> J Chin Electron Microsc Soc. 38, 271-275 (2019).</li>
<li>Li, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+imaging+characteristics+and+applications+of+LSCM880+with+Airyscan+and+spinning+disk+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Innov+Appl%22%5BJournal%5D)">Comparative study on imaging characteristics and applications of LSCM880 with Airyscan and spinning disk confocal microscopy.</a> Technol Innov Appl. 32, 4-8 (2020).</li>
<li>Huff, J., Bergter, A., Luebbers, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+mode+for+the+LSM+9+series+with+Airyscan+2%3A+fast+and+gentle+confocal+super-resolution+in+large+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplex mode for the LSM 9 series with Airyscan 2: fast and gentle confocal super-resolution in large volumes.</a> Nat Methods. 16, 1159-1163 (2019).</li>
<li>Chen, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+Vasohibin+1+speeds+contraction+and+relaxation+in+failing+human+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Depletion of Vasohibin 1 speeds contraction and relaxation in failing human cardiomyocytes.</a> Circ Res. 127, 14-27 (2020).</li>
<li>Sandin, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+simultaneous+laser+scanning+confocal+and+atomic+force+microscopy+%28conpokal%29+on+live+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Near simultaneous laser scanning confocal and atomic force microscopy (conpokal) on live cells.</a> J Vis Exp. (162), e61433(2020).</li>
<li>Castagnini, D., Palma, K., Jara Wilde, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+Imaging+of+Proteus+mirabilis+biofilm+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Super-resolution Imaging of Proteus mirabilis biofilm by expansion microscopy.</a> J Vis Exp. (221), e67932(2025).</li>
<li>Wolf, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+live-cell+super-resolution+imaging+of+mitochondrial+cristae+and+quantification+of+submitochondrial+membrane+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Method for live-cell super-resolution imaging of mitochondrial cristae and quantification of submitochondrial membrane potentials.</a> Methods Cell Biol. 155, 545-555 (2020).</li>
<li>Wu, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+perylene+carboximide+fluorophores+for+live-cell+super-resolution+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Near-infrared perylene carboximide fluorophores for live-cell super-resolution imaging.</a> J Am Chem Soc. 146, 7135-7139 (2024).</li>
<li>Pfanzelter, J., Mostowy, S., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septins+suppress+the+release+of+vaccinia+virus+from+infected+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Septins suppress the release of vaccinia virus from infected cells.</a> J Cell Biol. 217, 2911-2929 (2018).</li>
<li>Kolossov, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airyscan+super-resolution+microscopy+of+mitochondrial+morphology+and+dynamics+in+living+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Airyscan super-resolution microscopy of mitochondrial morphology and dynamics in living tumor cells.</a> Microsc Res Tech. 81, 115-128 (2018).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+macrophages+monitor+and+remove+particles+from+urine+to+prevent+tubule+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Renal macrophages monitor and remove particles from urine to prevent tubule obstruction.</a> Immunity. 57, 106-123 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&nbsp;COS7 cellen</td><td>ATCC (of vergelijkbaar)</td><td>CRL-1651</td><td>Afrikaanse groene aapje nier fibroblast cellijn. Gebruikt voor de bereiding van vaste cel monsters voor multicolor super-resolutie beeldvorming&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp;Ezel anti-muis IgG, Alexa Fluor 568-conjugaat</td><td>Invitrogen (of vergelijkbaar)</td><td>A10037</td><td>Secundaire antilichaam voor microtubuluskleuring. Gebruikt bij een verdunning van 1:500</td></tr><tr><td>&nbsp;Dulbecco&lsquo;s aangepast arendsmiddel (DMEM), hoge glucose</td><td>Gibco (of vergelijkbaar)</td><td>11965092</td><td>Standaard kweekmedium voor COS7 cellen, aangevuld met 10% FBS.</td></tr><tr><td>&nbsp;Foetaal bovien serum (FBS), hitte-inactiveerd</td><td>Gibco (of vergelijkbaar)</td><td>10082147</td><td>Serumsupplement gebruikt bij 10% (v/v) in alle celkweekmedia.</td></tr><tr><td>&nbsp;Glazen bodem beeldvormingsschaal (35 mm, &micro;-Schaal, #1.5 polymeer deksel, 0,17 mm dikte)</td><td>ibidi (of vergelijkbaar)</td><td>81156</td><td>Substraat voor celbeplating en beeldvorming. Cruciaal voor compatibiliteit met hoog-NA olie-immersie objectieven.</td></tr><tr><td>&nbsp;Beeldverwerking &amp; analysesoftware (ZEN modules)</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>ZEN 3.5 (blauw)</td><td>Gebruikt voor 3D reconstructie, super-resolutie verwerking (bijv. Airyscan Processing), PSF meting en SNR analyse.</td></tr><tr><td>&nbsp;ImageJ / Fiji</td><td>Open Source</td><td>N/A</td><td>Gebruikt voor aanvullende 3D reconstructie, het genereren van orthogonale weergaven en algemene beeldanalyse.</td></tr><tr><td>&nbsp;Immersie-olie (brekingsindex = 1.518)</td><td>Carl Zeiss (of vergelijkbaar)</td><td>444960-0000-000</td><td>Voor gebruik met olie-immersie objectieven (bijv. 63x/1.4 NA).</td></tr><tr><td>&nbsp;Laser-scanning confocale microscoop systeem met multiplex array detector (bijv. ZEISS LSM 900 met Airyscan 2)</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>LSM 900 (Airyscan 2)</td><td>De primaire beeldvormingsplatform gebruikt voor alle confocale en super-resolutie modi beschreven in het protocol.</td></tr><tr><td>&nbsp;Minimum Essentieel Medium (MEM) met Earle&lsquo;s Salts</td><td>Gibco (of vergelijkbaar)</td><td>11095080</td><td>Standaard kweekmedium voor Hep3B cellen, aangevuld met 10% FBS.</td></tr><tr><td>&nbsp;Muis anti-&alpha;-tubuline monoklonaal antilichaam (Clone DM1A)</td><td>Sigma-Aldrich (of vergelijkbaar)</td><td>T6199</td><td>Primair antilichaam voor het labelen van microtubuli. Gebruikt bij een verdunning van 1:500</td></tr><tr><td>&nbsp;Paraformaldehyde (PFA), 4% in PBS</td><td>&nbsp;Jinpan&nbsp;(of vergelijkbaar)</td><td>TBS5083</td><td>Fixatief voor cellen. Gebruik bij kamertemperatuur gedurende 15 min. Omgaan met passende voorzorgsmaatregelen.</td></tr><tr><td>&nbsp;Fenolroodleuvingsmedium</td><td>Gibco (of vergelijkbaar)</td><td>21063029</td><td>Laag-autofluorescentie medium gebruikt voor live-celbeeldvorming. Vooraf geëquilibreerd met 5% CO2 bij 37&deg;C voor gebruik.</td></tr><tr><td>&nbsp;Fosfaat-gebufferd zout (PBS), 1X, pH 7.4</td><td>CellWorld (of vergelijkbaar)</td><td>C0162-311</td><td>Gebruikt als was- en verdunningsbuffer gedurende het hele protocol.</td></tr><tr><td>&nbsp;ProLong goud antifade-mountant</td><td>Invitrogen (of vergelijkbaar)</td><td>P36930</td><td>Verharde montage medium voor het behoud van fluorescentie in gefixeerde monsters.</td></tr><tr><td>&nbsp;Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich (of vergelijkbaar)</td><td>T8787</td><td>Gebruikt bij 0,1% (v/v) voor celpermeabilisatie</td></tr><tr><td>&nbsp;Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich (of vergelijkbaar)</td><td>P9416</td><td>Gebruikt bij 0,05% (v/v) in PBS (PBST) voor wasstappen na antilichaam incubaties.</td></tr><tr><td>Bovien serum albumine (BSA), Fractie V</td><td>Sigma-Aldrich (of vergelijkbaar)</td><td>A7906</td><td>Gebruikt bij 1% (w/v) in PBS voor blokkering en als component van antilichaam verdunningsbuffer.</td></tr><tr><td>DAPI (4&lsquo;6-diamidino-2-fenylindol)</td><td>Sigma-Aldrich (of vergelijkbaar)</td><td>D9542</td><td>Kern counterstain. Gebruikt bij een eindconcentratie van 1 &micro;g/mL.</td></tr><tr><td>Ezel anti-konijn IgG, Alexa Fluor 488-conjugaat</td><td>Invitrogen (of vergelijkbaar)</td><td>A21206</td><td>Secundaire antilichaam voor mitochondriale kleuring. Gebruikt bij een verdunning van 1:500</td></tr><tr><td>Fluorescente microspheren (Kooltjes), 100 nm diameter</td><td>Invitrogen (bijv. TetraSpeck&trade;) of vergelijkbaar</td><td>T7279</td><td>Gebruikt voor empirische meting van de puntverspreidingsfunctie (PSF) en resolutie van het systeem.</td></tr><tr><td>Hep3B cellen die stabiel EGFP-mitochondria tot expressie brengen</td><td>IMMOCELL</td><td>IM-H367</td><td>Menselijke hepatoma cellijn gemodificeerd om stabiel EGFP tot expressie te brengen gericht op de mitochondriale matrix. Gebruikt voor live-cel time-lapse beeldvorming.</td></tr><tr><td>HEPES bufferoplossing, 1 M</td><td>Gibco (of vergelijkbaar)</td><td>15630080</td><td>Gebruikt bij een eindconcentratie van 25 mM in beeldvormingsmedium voor pH stabilisatie tijdens live beeldvorming buiten een CO2 incubator.</td></tr><tr><td>Hoog-precisie dekglaas (#1.5, 0,17 mm dikte)</td><td>Marienfeld (of vergelijkbaar)</td><td>107052</td><td>Gebruikt voor het monteren van gefixeerde monsters.</td></tr><tr><td>Microscoop bedieningssoftware (bijv. ZEN blauwe editie)</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>ZEN 3.5 (blauw)</td><td>Gebruikt voor systeem controle, beeldverwerving en basisverwerking.</td></tr><tr><td>Objectieflens: Plan-apochromat 63x/1.40 NA Olie DIC</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>421462-9900-000</td><td>Primair objectief gebruikt voor hoog-resolutie beeldvorming.</td></tr><tr><td>Konijn anti-TOMM20 polyklonaal antilichaam</td><td>Abcam (of vergelijkbaar)</td><td>ab186735</td><td>Primair antilichaam voor het labelen

superresolutie beeldvorming en gedeeld beheer: een protocol voor confocale microscopie met multiplexdetectie

Super-Resolution Imaging and Shared Management: A Protocol for Confocal Microscopy with Multiplex Detection

Superresolutie beeldvorming en gedeeld beheer: een protocol voor confocale microscopie met multiplexdetectie

Super-resolution microscopy (SRM) overcomes the diffraction limit of conventional light microscopy, enabling nanoscale visualization of subcellular ...

super-resolution-imaging-shared-management-protocol-for-confocal

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Neisseria meningitidis (Nm), een gram negatieve mens-specifieke respiratoire pathogeen, kan binden aan menselijke α-actinine. Hier presenteren wij een protocol voor de visualisatie van colocalisation van de bacterie met de intracellulaire α-actinine na bacteriële binnenkomst in menselijke hersenen microvasculaire endotheelcellen (HBMECs).

Visualisatie en kwantificering van intracellulaire interacties van Neisseria meningitidis En Human α-actinine door Confocale Imaging

We demonstreren het gebruik van fluorescentie foto activerings lokalisatie microscopie (FPALM) om gelijktijdig meerdere soorten fluorescerend gelabelde moleculen binnen cellen af te beelden. De beschreven technieken leveren de lokalisatie op van duizenden tot honderdduizenden individueel fluorescent gelabelde eiwitten, met een precisie van tientallen nanometer binnen enkele cellen.

Gelijktijdige Multicolor beeldvorming van biologische structuren met fluorescentie Fotoactivatie Lokalisatie Microscopie

We tonen een methode aan om meerdere molecuelen te identificeren binnen heterogene nano-structuren bij nauwkeurige molecuul nauwkeurigheid, met behulp van sequentiële binding en elutie van fluorescent gelabelde antilichamen.

Zeer Multiplexed, Superresolutie Imaging van T-cellen Met behulp van madSTORM

Hier presenteren we een praktische gids voor het bouwen van een geïntegreerde microscopie-systeem, dat wordt samengevoegd conventionele epi-belichting fluorescerende imaging, single-molecuul detectie gebaseerde Super resolutie beeldvorming en Multi-Color single-molecuul detectie, met inbegrip van single-molecuul fluorescentie resonantie energieoverdracht imaging, in één set-up op een kostenefficiënte manier.

Uitvoeren van meerdere Imaging modi met één fluorescentie Microscoop

Dit protocol laat zien hoe je microscopie met superresolutie gebruiken om eiwitcolokalisatie te bestuderen in primaire neuronale culturen.

Super-Resolution Imaging to Study Co-Localization of Proteins and Synaptic Markers in Primary Neurons

Het keldermembraan is essentieel voor weefsel- en orgaanmorfogenese tijdens de ontwikkeling. Om de mechanismen die leiden tot de juiste plaatsing van deze structuur beter te begrijpen, beschrijft het gepresenteerde protocol methoden om de intracellulaire handel en secretie van keldermembraaneiwitten in epitheelcellen te visualiseren en te karakteriseren met behulp van confocale en superresolutiemicroscopie.

Confocale en superresolutie beeldvorming van gepolariseerde intracellulaire handel en secretie van keldermembraaneiwitten tijdens Drosophila Oogenesis

Dit manuscript beschrijft het ontwerp en de werking van een microtensiometer / confocale microscoop om gelijktijdige metingen van interfaciale spanning en oppervlaktedilatationale reologie uit te voeren terwijl de interfaciale morfologie wordt gevisualiseerd. Dit biedt de real-time constructie van structuur-eigenschap relaties van interfaces die belangrijk zijn in technologie en fysiologie.

Microtensiometer voor confocale microscopie visualisatie van dynamische interfaces

Multiplexed barcoding beeldanalyse heeft onlangs de karakterisering van de tumormicro-omgeving verbeterd, waardoor uitgebreide studies van celsamenstelling, functionele toestand en cel-celinteracties mogelijk zijn. Hierin beschrijven we een kleurings- en beeldvormingsprotocol met behulp van de barcodering van oligonucleotide-geconjugeerde antilichamen en cyclusbeeldvorming, waardoor het gebruik van een hoogdimensionale beeldanalysetechniek mogelijk is.

Multiplexed Barcoding beeldanalyse voor immunoprofiling en ruimtelijke kartering in de eencellige analyse van paraffineweefselmonsters

Spectral Iterative Bleaching Extend Multiplexity (IBEX) bouwt voort op de basis IBEX-techniek door heparineblokkering toe te voegen om niet-specifieke binding te minimaliseren en gebruik te maken van spectrale detectie met computationele ontmenging om autofluorescentie te onderdrukken. Deze aanpak versnelt de beeldacquisitie en vermindert tegelijkertijd achtergrondbronnen, waardoor robuuste multi-ronde, high-parameter ruimtelijke proteomische analyses mogelijk zijn.

High-plex beeldvorming met behulp van spectrale confocale microscopie om niet-specifieke weefselfluorescentie te minimaliseren

Dit protocol beschrijft de procedure voor het uitvoeren van diepe, whole-cell single-molecule localization microscopy (SMLM) met behulp van een draaiende schijf confocale microscoop met optische fotonherplaatsing, waardoor DNA-PAINT-beeldvorming mogelijk is zonder de noodzaak van aangepaste optica of complexe verlichting.

Superresolutiebeeldvorming van hele cellen via DNA-PAINT op een draaiende schijf confocaal met optische fotonhertoewijzing

Leer superresolutiebeeldvorming met confocale microscopie en multiplexdetectie voor celbiologisch onderzoek. Dit protocol maakt hoge resolutie (~120 nm) toegankelijk voor vaste en levende cellen.

Superresolutie beeldvorming en gedeeld beheer: een protocol voor confocale microscopie met multiplexdetectie

Meer video's verkennen