Name: Een snelle techniek voor de visualisatie van Live Geïmmobiliseerd gistcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Leer een snelle techniek voor de visualisatie van levende geïmmobiliseerde gistcellen met fluorescentie-reporters. Deze methode maakt observatie van epigenetische veranderingen tijdens celdeling mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen graag Pete Houston en Eugenia Xu bedanken voor hun hulp.

<ol><li> Geïmmobiliseerde cellen voor tijdsverloop epifluorescentie microscopie. Houdt u er rekening mee dat dit protocol alleen zinvol is als de objectieve lenzen van je microscoop onder de microscoop podium. </li><li> Plaats cellen op de gewenste concentratie in vloeibare media op een lange dekglaasje (ongeveer 24x50mm) </li><li> Snijd een agar blok van de gewenste grootte van een synthetische media plaat (deze hebben een lagere autofluorescentie) en plaats over de cellen. Plaats de zijde van de agar blok niet afgehandeld door pincet in contact met de cellen. </li><li> Voor kortere cursussen (maximaal 3 uur), deze setup is voldoende. Als cellen bewegen als gevisualiseerd op de microscoop, volume verlagen van cellen of verhoging gebied van de agar te blokkeren. </li><li> Voor langere tijd cursussen, plaats een druppel verse vloeibare media op de top van de agar te blokkeren, en plaats een glasplaatje op de top van de agar te blokkeren. Deze dia vermindert verdamping door de bovenkant van de agar te blokkeren. Indien gewenst, kan de randen van de agar blok in contact met het dekglas worden afgedicht met vaseline om verder te verminderen vocht. Ik heb gebruik gemaakt van deze set-up voor films tot 9 uur lang, met de cellen te delen op wild-type tarieven. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

De auteurs hebben niets te melden.

Dit is een snelle techniek die gistcellen immobiliseert terwijl nog het toestaan ​​groei. We hebben gevolgd gist groei tot tien uur, met de gist het weergeven van wild-type divisie tarieven gedurende het experiment. Merk op dat deze opstelling het objectief te zijn onder de microscoop podium nodig heeft.

een snelle techniek voor de visualisatie van live geïmmobiliseerd gistcellen

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

We presenteren hier een eenvoudige, snelle, en uiterst flexibele techniek voor de immobilisatie en visualisatie van groeiende gist cellen door epifluorescentie microscopie. De techniek is ook geschikt voor het visualiseren van statische gist populaties, of tijd cursussen experimenten tot tien uur lang. Mijn microscopie onderzoekt epigenetische overerving bij de stille paring loci in S. cerevisiae. Er zijn twee stille paring loci, HML en HMR, die normaal niet worden weergegeven als ze zijn verpakt in heterochromatine. In de sir1 mutant achtergrond zwijgen op te leggen is verzwakt zodanig dat elke locus of kan worden in de uitdrukkelijke of zwijgen epigenetische toestand, dus in de bevolking als geheel is een mix van cellen van verschillende epigenetische staten voor zowel HML en HMR. Mijn microscopie toonde aan dat er geen verband tussen de epigenetische toestand van HML en HMR in een individuele cel. sir1 cellen stochastisch switch epigenetische staten, tot oprichting van zwijgen op een eerder uitgesproken locus of het uiten van een eerder zwijgen locus. Mijn tijd uiteraard microscopie gevolgd individuele sir1 cellen en hun nakomelingen om de frequentie van elk van de vier mogelijke epigenetische schakelaars, en daarmee de stabiliteit van elk van de epigenetische staten in sir1 cellen score. Zie ook Xu et al.., Mol. Cel 2006.

Een snelle techniek voor de visualisatie van de groeiende geïmmobiliseerde gistcellen, hier toegepast op de TL-verslaggevers bij de stille paring loci HML en HMR

Een snelle techniek voor de visualisatie van Live Geïmmobiliseerd gistcellen

Wij presenteren hier een eenvoudige, snelle en uiterst flexibele techniek voor de immobilisatie en visualisatie van groeiende gistcellen middels epifluorescentie ...

Het doel van het experiment is om een populatie van providing sir one-cellen onder de microscoop te kunnen volgen, zodat kan worden waargenomen hoe de epigenetische toestanden veranderen en hoe vaak deze epigenetische toestanden veranderen bij elke opeenvolgende celdeling. Neem een lang dekglas, neem ongeveer 7 µL cellen, plaats deze op het lange dekglas en gebruik een synthetische mediumplaat. Gebruik een scheermesje om inkepingen in de agar te maken. Neem vervolgens een agarblokje, til dit op en plaats het over de cellen.Oké, voor kortlopende experimenten van maximaal drie uur is dit op zichzelf voldoende. De cellen worden geïmmobiliseerd voor langlopende experimenten; ik voeg vloeibaar medium toe aan de bovenkant van het agarpad en plaats vervolgens een glazen dekglas over het geheel.Het medium zal fungeren als een soort verzegeling tussen de twee. Het dekglas dient uitsluitend om verdamping vanaf de bovenzijde van het agarlblok te voorkomen. Met deze opstelling blijft het agarlblok vochtig en zullen de cellen tot wel acht, in ieder geval tot acht uur, blijven delen.

a-rapid-technique-for-visualization-live-immobilized-yeast

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Gendeletie en eiwit overexpressie zijn gemeenschappelijke methoden voor het bestuderen van functies van eiwitten. In dit artikel beschrijven we een protocol voor de analyse van fenotype ontwikkeling als een functie van de proteïne concentratie op de bevolking en de single-cell niveau...

Analyse van de ontwikkeling van een morfologische fenotype als een functie van de eiwitconcentratie in gist

Een methode voor het inbedden gistkolonies waardoor snijden voor licht-en elektronenmicroscopie. Dit protocol maakt de bepaling van de verdeling van gesporuleerde cellen en pseudohyfale cellen in kolonies die een nieuwe tool in de richting van het begrijpen van de organisatie van de celtypen in een schimmel gemeenschap.

Gist Colony integratiemethode

Een robuuste benadering van de levering van organellen monitor aan op de zure lumen van de gist vacuole voor afbraak en recycling wordt beschreven. De methode is gebaseerd op de specifieke etikettering van target organellen met een genetisch gecodeerd dual-emissie fluorescentie pH-biosensor, en visualisatie van individuele cellen met behulp van fluorescentie microscopie.

Een fluorescentie microscopie Assay voor de bewaking Mitophagy in de Gist Saccharomyces cerevisiae

Kwantitatieve Live Cell Fluorescentie-microscopie analyse van Fission Yeast

We presenteren een eenvoudig protocol voor fluorescentie microscopie films van groeiende gistcellen, en een GUI-gebaseerde software pakket om eencellige tijdreeks gegevens te extraheren verkrijgen. De analyse omvat geautomatiseerde afstamming en verdeeldheid tijd opdracht geïntegreerd met visuele inspectie en handmatige curatie van bijgehouden gegevens.

Het verwerven Fluorescentie Time-lapse films van Budding gist en analyseren van Single-cell Dynamics behulp enten

Er wordt een methode gepresenteerd voor het oppervlaktespreiden van chromosomen uit knoppende gist. Deze methode is afgeleid van een methode die eerder werd beschreven door Loidl en Klein. Bovendien demonstreren we een procedure voor immunokleuring van gespreide chromosomen.

Surface Het verspreiden en Immunokleuring van Gist Chromosomen

We bieden een reproduceerbare basismethode voor de langetermijnmicroscopie van de seksuele levenscyclus van splijtingsgist. Met kleine aanpassingen zoals beschreven, stelt het gepresenteerde protocol onderzoekers in staat zich te concentreren op verschillende stappen van het reproductieproces.

Microscopie van Fission Yeast Sexual Lifecycle

Dit protocol beschrijft de analyse van fluorescently gelabelde intracellulaire compartimenten in ontluikende gist met behulp van Multi-Color 4D (time-lapse 3D) confocale microscopie. De beeldvormings parameters worden gekozen om adequate signalen vast te leggen en foto schade te beperken. Met aangepaste ImageJ-plug-ins kunnen gelabelde structuren worden bijgehouden en kwantitatief worden geanalyseerd.

4D microscopie van gist

Hier presenteren we live-celbeeldvorming die een niet-toxische microscopie methode is die onderzoekers in staat stelt om eiwit gedrag en nucleaire dynamiek in levende splijting gistcellen te bestuderen tijdens mitose en meiosis.

Onderzoek van de kern dynamiek van de mitotische en Meiotische splijtstof gist door fluorescentie-Live-cel microscopie

Vitale fluorescerende kleurstoffen zijn essentiële hulpmiddelen voor Live-celbeeldvormings analyses in moderne schimmel celbiologie. Dit papier Details de toepassing van gevestigde en minder bekende fluorescerende kleurstoffen voor het volgen van plasma membraan dynamiek, Endo-/exocytose en celwand morfogenese in filamenteuze schimmels.

Toepassing van selectieve fluorescerende kleurstoffen voor membraan-en celwand voor het beeldvorming van filamenteuze schimmels in levende cellen

Leer een snelle techniek voor de visualisatie van levende geïmmobiliseerde gistcellen met fluorescentie-reporters. Deze methode maakt observatie van epigenetische veranderingen tijdens celdeling mogelijk.

Een snelle techniek voor de visualisatie van Live Geïmmobiliseerd gistcellen

Meer video's verkennen