Name: Wieloparametryczny system peryfuzji wysp trzustkowych w mikroprzepływowym urządzeniu peryfuzyjnym (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Poznaj mikroprzepływowy system peryfuzji wysp trzustkowych do dynamicznej oceny sekrecji insuliny z jednoczesnym obrazowaniem wapnia i potencjału mitochondrialnego. Ta metoda umożliwia badanie fizjologii komórek wyspowych w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca ta była wspierana przez międzynarodowe stypendium AAUW dla Adeoli Adewoli, NIH/NCRR (U42RR023245) dla Jose Oberholzera oraz The Chicago Diabetes Project.

A. Mikrowytwarzanie trójwarstwowego urządzenia do perifuzji mikrofluidycznej
Protokół główny dla dołków dolnych (dołki o głębokości 150 μm)
<ol>
 <li>W razie potrzeby oczyścić wafer za pomocą żyletki. Przemyć acetonem, metanolem oraz IPA. Przeprowadzić obróbkę plazmową przy mocy 50 Watts przez 30 s.</li>
 <li>Nanieść SU8-10 metodą spin-coatingu przy 20 rpm. [Krok 1: 500 rpm, 10 s, 10 rpm/s, Krok 2: 200 rpm, 30 s, 30 rpm/s]. [UWAGA: po naniesieniu SU8 nie trzymać wafera pęsetą]</li>
 <li>Wykonać wstępne wygrzewanie (soft bake) wafera w temperaturze 65 °C przez 20 min oraz w 95 °C przez 50 min. </li>
 <li>Naświetlić wafer światłem UV przez odpowiednią maskę. Dawka dla wysokości 150 μm wynosi 650 mJ/cm2.</li>
 <li>Wykonać wygrzewanie po naświetlaniu (post exposure bake) wafera w temperaturze 65 °C przez 1 min oraz w 95 °C przez 12 min. </li>
 <li>Wywołać wafer w wywoływaczu do SU8 przez 15 min.</li>
</ol>
Główny protokół mikrokanałów (studnie o głębokości 50 μm)
<ol>
 <li>W razie potrzeby oczyścić wafer za pomocą żyletki. Oczyścić acetonem, metanolem oraz IPA. Przeprowadzić obróbkę plazmową przy mocy 50 W przez 30 s.</li>
 <li>Nanieść SU8-2150 metodą spin-coatingu przy 100 rpm. [Krok 1: 50 rpm, 10 s, 10 rpm/s, Krok 2: 100 rpm, 30 s, 300 rpm/s].</li>
 <li>Wstępnie wypiec (soft bake) wafer w temperaturze 65 °C przez 15 min oraz w 95 °C przez 2 h i 30 min.</li>
 <li>Wafer poddać naświetlaniu światłem UV przez wybraną maskę. Dawka ekspozycji dla wysokości 650 μm wynosi 685 mJ/cm2.</li>
 <li>Wypiec wafer po naświetlaniu (post exposure bake) w temperaturze 65 °C przez 5 min oraz w 95 °C przez 35 min.</li>
 <li>Wywołać wafer w developerze SU8 przez 20-30 min.</li>
</ol>
Przygotowanie roztworu PDMS
<ol>
 <li>Roztwór polidimetylosiloksanu (PDMS) przygotowuje się poprzez dokładne wymieszanie 10 części elastomeru silikonowego z 1 częścią czynnika sieciującego ze standardowego zestawu Sylgard 184.</li>
 <li>Pęcherzyki powietrza powstałe w roztworze PDMS podczas procesu mieszania usuwa się za pomocą desykatora próżniowego.</li>
 <li>Odgazowany roztwór PDMS powoli dozuje się na matryce SU8 oraz do pustej szalki Petriego w celu przygotowania trzeciej warstwy.</li>
 <li>Temperaturę płyty grzejnej ustawia się na 75 °C i utwardza PDMS w tej temperaturze przez 2 hrs.</li>
 <li>Wloty, wyloty i studzienki wymiany wycina się za pomocą dziurkacza o odpowiedniej średnicy.</li>
 <li>Warstwy łączy się ze sobą na szkiełku przedmiotowym (rozmiar 0.1 mm) przy użyciu ręcznego urządzenia plazmowego.</li>
</ol>
B. Układ eksperymentalny
<ol>
 <li>Przepuść 70% etanol przez mikrourządzenie w celu sterylizacji. Przepłucz urządzenie wodą DI, aby usunąć etanol. Przelej 50 ml 0,5% BSA przez urządzenie, aby zapobiec nieswoistej adsorpcji insuliny do ścianek mikrokanałów.</li>
 <li>Gradient wzrostowy stężenia glukozy oraz inne powiązane gradienty generowane przez oprogramowanie LabView, które komunikuje się z pompami strzykawkowymi, są testowane w celu upewnienia się, że gradienty są stabilne.</li>
 <li>Od 25 do 30 wysepek trzustkowych myszy inkubowano z 5 μM Fura-2/AM (wskaźnik wapnia, Molecular probes, CA) i 2,5 μM Rodaminy 123 (Rh123, wskaźnik potencjału mitochondrialnego, Sigma, MO) przez 30 min w 37 °C w buforze Krebsa-Ringera (KRB) zawierającym 2 mM glukozy.</li>
 <li>Wysepki trzustkowe myszy są ostrożnie wprowadzane pipetą do mikroprzepływowego urządzenia do perifuzji przez port wlotowy.</li>
 <li>Sieć mikroprzepływową konfiguruje się następnie poprzez podłączenie wlotu do pomp strzykawkowych za pomocą rurek Tygon i łącznika w kształcie litery Y oraz wylotu do kolektora frakcji. Urządzenie spoczywa na stoliku grzewczym (37 °C) mikroskopu, a rurki wlotowe są podgrzewane na płytce grzejnej, aby utrzymać temperaturę komory i roztworu na poziomie 37 °C.</li>
 <li>Bezpośrednio po konfiguracji wysepki trzustkowe myszy są poddawane perifuzji buforem KRB zawierającym 2 mM glukozy przez 10 min, a następnie gradientowi glukozy (2 mM – 25 mM) przez 25 min.</li>
 <li>Obrazy time-lapse są zbierane i analizowane co 15 s za pomocą oprogramowania SimplePCI. Perifuzat jest również zbierany co minutę za pomocą kolektora frakcji w celu analizy wydzielania insuliny przy użyciu zestawu ELISA.</li>
</ol>
Reprezentatywne wyniki
Wyspy mysie poddano perfuzji z liniowym gradientem glukozy w zakresie 2-25 mM. Jak pokazano na Rysunku 1, napływ wapnia i sekrecja insuliny zostają zainicjowane po około 13 minutach perfuzji, co odpowiada stężeniu 6 mM glukozy. Zmiany potencjałów mitochondrialnych są widoczne wcześniej, zgodnie z przewidywaniami, około 1 minuty. Dane te wykazują zalety zastosowania tej sieci mikroprzepływowej do charakteryzacji fizjologii wysp.
<img src="/files/ftp_upload/1649/1649fig1.jpg" alt="Wapń, mitochondria, poziomy insuliny w czasie; wykres do analizy odpowiedzi komórkowej." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Reakcje fizjologiczne na stymulację komórek wysepek trzustkowych.

<ol><li>Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+device+for+multimodal+characterization+of+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets.</a> Lab Chip. 9, 97-106 (2009).</li>
</ol>

Tradycyjne systemy perfuzji wysp (w skali makro i mikro) posiadają pewne ograniczenia, w tym złożoność konfiguracji i konstrukcji, wysokie wymagania techniczne oraz trudność w tworzeniu w systemie gradientów chemicznych zdefiniowanych przez użytkownika. Opisany tutaj mikrofluidyczny system perfuzji pokonuje te ograniczenia dzięki prostej geometrii konstrukcji i wykonania. Co ważniejsze, system ten może zostać zintegrowany z metodą obrazowania fluorescencyjnego, co stanowi unikalne narzędzie do badania fizjologii wysp. Sy...

<table><tbody><tr><td>Strzykawki 60ml</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Barwnik fluorescencyjny Fura-2</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Barwnik fluorescencyjny Rhodamine123</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glukoza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Swojczy Albuminy Wołowej</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silikonowe rurki 30&quot;</td><td>Cole-Parmer</td><td></td><td>1/16 x 1/8in</td></tr><tr><td>Probówki Eppendorf 1,5ml</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konektory Y</td><td>Cole-Parmer</td><td></td><td>1/16&amp;#8221; &amp;amp; 4mm</td></tr><tr><td>Konektory do strzykawek</td><td>Cole-Parmer</td><td></td><td>żeński korek luer 1/16&amp;#8221;</td></tr><tr><td>Konektory proste</td><td>Cole-Parmer</td><td></td><td>1/16&amp;#8221;</td></tr><tr><td>Konektor kątowy</td><td>Cole-Parmer</td><td></td><td>1/16&amp;#8221;</td></tr><tr><td>Pompa strzykawkową Havard</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Urządzenie do perifuzji</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Płyta grzejna</td><td>PMC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termometr</td><td>Omega Engineering, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kolektor frakcji</td><td>Gibson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetator</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Odwrócony mikroskop epifluorescencyjny</td><td>Olympus Corporation</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>Kamera CCD (Charge-coupled device)</td><td>QImaging</td><td></td><td>Retiga-SRV, Fast 1394</td></tr></tbody></table>

wieloparametryczny system perfuzji wysepek w mikroprzepływowym urządzeniu perfuzyjnym

A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device

Opracowano mikrofluidyczne urządzenie do perifuzji wysepek w celu oceny dynamicznego wydzielania insuliny przez wiele wysepek oraz jednoczesnego obrazowania fluorescencyjnego napływu jonów wapnia i zmian potencjału mitochondrialnego. Urządzenie składa się z trzech warstw: pierwsza warstwa zawiera matrycę mikroskalowych studni (średnica 500 $\mu$m i głębokość 150 $\mu$m), które pomagają unieruchomić wysepki podczas ekspozycji na przepływ i maksymalizują powierzchnię wystawioną na działanie czynników; druga warstwa zawiera okrągłą komorę perifuzyjną (głębokość 3 mm, średnica 7 mm); a trzecia warstwa zawiera kanał wlotowy-mieszający, który rozszerza się przed wtryskiem do komory perifuzyjnej (szerokość 2 mm, długość 19 mm i wysokość 500 $\mu$m) w celu optymalizacji efektywności mieszania przed wprowadzeniem do komory perifuzyjnej. Wykazano również możliwość tworzenia w mikrofluidycznej sieci perifuzyjnej różnych gradientów glukozy, w tym liniowych, dzwonowatych i prostokątnych.

Opracowano mikrofluidyczne urządzenie do perifuzji wysepek trzustkowych w celu oceny dynamicznego wydzielania insuliny przez wiele wysepek oraz jednoczesnego obrazowania fluorescencyjnego napływu jonów wapnia i zmian potencjału mitochondrialnego.

Wieloparametryczny system perfuzji wysepek w mikroprzepływowym urządzeniu perfuzyjnym

Opracowano mikrofluidyczne urządzenie do perfuzji wysepek, służące do oceny dynamicznego wydzielania insuliny przez wiele wysepek oraz jednoczesnej fluorescencji...

W niniejszej prezentacji przedstawimy oparty na mikroprzepływach system perfuzji wysepek, służący do jednoczesnego pomiaru dynamicznego wydzielania insuliny, napływu wapnia oraz zmian potencjału mitochondrialnego w wysepkach trzustkowych w odpowiedzi na sekretagogi insuliny. System perfuzji składa się z trójwarstwowego urządzenia mikroprzepływowego, pomp strzykawkowych i kolektora frakcji insuliny. Napływ wapnia oraz potencjały mitochondrialne indukowane przez sekretagogi są obrazowane przy użyciu zestawu z mikroskopem fluorescencyjnym.Cześć, nazywam się Ola i jestem pracownikiem laboratorium dr. Val Holter w Katedrze Chirurgii Transplantacyjnej na Uniwersytecie Illinois w Chicago. Cześć, jestem Don Lee, również z laboratorium dr Holter. Cześć, nazywam się Tricia Hart, również z laboratorium dr Holter.Dzisiaj zaprezentujemy procedurę jednoczesnego obrazowania powiek z wykorzystaniem liniowego gradientu glukozy. Procedurę tę zastosowaliśmy w naszym laboratorium do badania obrazowania i funkcji powiek. Zapraszamy do rozpoczęcia.Urządzenie mikrofluidyczne wykorzystane w tej procedurze składa się z trzech warstw utwardzonego PDMS, wytworzonych za pomocą standardowej fotolitografii. Pierwsza warstwa, wykonana z silikonowego wzorca, zawiera wgłębienia urządzenia mikrofluidycznego o głębokości 150 micrometers i średnicy 500 micrometers, które mają za zadanie stabilnie utrzymać oczka w miejscu. Druga warstwa posiada kanały o wysokości 500 micrometers i szerokości two millimeters.Środkowa część kanału jest rozszerzona, aby rozproszyć przepływ w celu lepszej wymiany roztworu. Wewnątrz urządzenia, w studzience wymiany, wykonuje się otwór o wysokości 3 mm i szerokości 7 mm na środku warstwy. Trzecia warstwa to gruba płyta z PDMS. Aby przygotować tę warstwę, należy wykonać małe otwory po obu stronach, które będą odpowiadać wlotowi i wylotowi kanału.W przypadku drugiej warstwy, po wygenerowaniu wszystkich trzech warstw, pierwszą warstwę przywiązuje się do szkiełka przedmiotowego tak, aby studzienki były skierowane do góry. Następnie drugą warstwę przywiązuje się do pierwszej warstwy z odstępami między kanałami skierowanymi do góry. Na koniec trzecią warstwę przywiązuje się do drugiej warstwy.Po połączeniu warstw urządzenie jest gotowe do wykorzystania w eksperymentach. Używając strzykawki o pojemności 10 ml wypełnionej 70% etanolem i podłączonej do portu wlotowego urządzenia za pomocą drenu Tygon, należy wysterylizować urządzenie mikroprzepływowe, przepuszczając etanol przez kanały urządzenia. Następnie, korzystając z tej samej konfiguracji, należy przepuścić wodę dejonizowaną, aby wypłukać etanol.Po sterylizacji urządzenia należy umieścić je na podgrzewanym stoliku mikroskopu za pomocą rurek tigon, a pompy strzykawkowe zawierające roztwory wysokiego i niskiego stężenia glukozy podłączyć do łącznika Y. Następnie należy podłączyć je do wlotu urządzenia mikroprzepływowego. Wylot urządzenia mikroprzepływowego należy podłączyć do kolektora frakcji.Upewnij się, że przewody spoczywają na płytce grzewczej ustawionej na 37 degrees Celsius. Bardzo ważne jest utrzymanie roztworów w temperaturze fizjologicznej przez cały czas trwania eksperymentu. Następnie użyj programu LabVIEW, aby zainicjować gradient glukozy, który będzie perfundowany przez sieć mikroprzepływową podczas eksperymentu.Oprogramowanie to zmienia szybkość przepływu dwóch roztworów glukozy. Poprzez sterowanie pompami strzykawkowymi można tutaj tworzyć różne profile gradientu glukozy: liniowe, dzwonowate oraz prostokątne. W eksperymencie tym przedstawiono porównanie z obliczonymi wartościami oczekiwanymi; zostanie zastosowany liniowy gradient glukozy od 2 mM do 25 mM przy zmiennej szybkości przepływu obu roztworów glukozy wynoszącej 0,01 ml/min oraz stałej szybkości przepływu 0,25 ml/min wlewanych do urządzenia po zmieszaniu roztworów.Po wybraniu odpowiedniego profilu gradientu należy sprawdzić jego stabilność. Najpierw uruchom system gradientowy. Następnie uruchom zbieracz frakcji i zbierz osiem frakcji po 1 mL do probówek typu Eppendorf.Następnie, używając glukometru, zmierz stężenie glukozy w każdej probówce, wpisując dane do programu Excel. Przeanalizuj wyniki uzyskane z glukometru. Następnie zastąp strzykawkę z wysokim stężeniem glukozy strzykawką zawierającą 0,5% BSA w buforze Krebs-Ringer i przepłucz urządzenie 50 mililitrami roztworu z prędkością 1 ml/min.Zapobiegnie to niespecyficznej adsorpcji insuliny do ścianek mikrokanałów, co zapewni dokładność późniejszych pomiarów poziomu wydzielanej insuliny po perfuzji z BSA. Zastąp ją roztworem wysokiego stężenia glukozy. Zawieś 25 do 30 ręcznie wybranych wycinków oka myszy w buforze Krebsa-Ringera z 2 mM glukozą, zawierającym barwnik wskaźnikowy dla wapnia fira 2:00 AM oraz barwnik wskaźnikowy potencjału mitochondrialnego rumine 1 2 3, i inkubuj przez 30 minut w temperaturze 37 °C.Po inkubacji odłącz urządzenie od systemu perfuzyjnego i ostrożnie wprowadź wysepek do urządzenia mikroprzepływowego, wkładając końcówkę pipety zawierającej wysepki do portu wlotowego i powoli dozując wysepek. Po załadowaniu ponownie podłącz urządzenie do systemu perfuzyjnego, uważając, aby nie wprowadzić pęcherzyków powietrza. Następnie uruchom pompę strzykawkową, aby rozpocząć perfuzję wysepków roztworem KRB zawierającym 2 mM glukozy.Ten etap służy do wypłukania nadmiaru barwnika z pożywki oraz wyznaczenia zestawów filtrów wzbudzenia i emisji oraz czasów ekspozycji, które będą stosowane podczas eksperymentu. Następnie należy ustawić kolektor frakcji tak, aby pobierał próbki w odstępach jednominutowych, jednocześnie traktując oczka roztworem o niskiej zawartości glukozy. Użyj narzędzia wyznaczania obszaru zainteresowania (ROI) w oprogramowaniu do obrazowania PCI, aby zdefiniować obszary lub oczka, które mają zostać zobrazowane.Następnie zakreśl obszar tła, który zostanie odjęty po 10-minutowym płukaniu komórek, uruchom kolektor frakcji gradientu glukozy i rozpocznij obrazowanie time-lapse. Po 30 minutach wyłącz oprogramowanie oraz pompę strzykawkową z wysokim stężeniem glukozy. Kontynuuj perfuzję z niskim stężeniem glukozy, aby wypłukać efekt działania wysokiego stężenia glukozy.Po 10 minutach zatrzymać przepływ niskiego stężenia glukozy, wyłączając pompę strzykawkową. Po perfuzji wyeksportować dane do programu Excel w celu analizy. Ilość insuliny wydzielonej do perfuzatu można oznaczyć za pomocą testu ELISA dla wysp trzustkowych myszy.Przeperfumowano liniowym gradientem glukozy od 2 do 25 milimolarnych, jak pokazano tutaj. Napływ wapnia i sekrecja insuliny zostają wywołane po około 13 minutach perfuzji, co odpowiada stężeniu glukozy 6 milimoli. Zmiany potencjałów mitochondrialnych są widoczne wcześniej, zgodnie z oczekiwaniami, około 11 minuty.Te dane wykazują zalety wykorzystania tej sieci mikroprzepływowej do charakteryzacji fizjologii oczek. Właśnie pokazaliśmy, jak używać naszego urządzenia do mikroprzepływowej perfuzji równoległej w badaniach fizjologii oczek. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby upewnić się, że w urządzeniu nie ma pęcherzyków powietrza, ponieważ mogłyby one spowodować przemieszczenie się oczek podczas eksperymentu.Ponadto przepływ można dostosować do 1 ml na minutę bez zakłócania oczek. To wszystko. Dziękujemy za oglądanie i powodzenia w eksperymencie.

a-multi-parametric-islet-perifusion-system-within-microfluidic

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

System wieloparametrowej perfuzji wysp w urządzeniu do perfuzji mikrofluidalnej

Prezentujemy protokoły wytwarzania i automatyzacji macierzy mikrozaworów opartych na elastomerowym polidimetylosiloksanie (PDMS), które nie wymagają dodatkowej energii do zamknięcia i charakteryzują się precyzyjnymi objętościami zdefiniowanymi fotolitograficznie. Przedstawiono równoległy mieszalnik o objętości subnanolitrowej oraz zintegrowany mikrofluidyczny system perfuzyjny.

Chip mikrofluidyczny sterowany macierzami elastomerowych mikrozaworów

Prezentujemy sposób wykonania prostego urządzenia mikroprzepływowego, które można zintegrować ze standardowymi zestawami do elektrofizjologii, aby w kontrolowany sposób eksponować mikroskalowe powierzchnie skrawka mózgu na działanie różnych neuroprzekaźników.

Stymulacja skrawków mózgu z wykorzystaniem sieci mikrofluidycznej i standardowej komory perfuzyjnej

Opisano metodę hodowli monowarstwy komórek śródbłonka na całej wewnętrznej powierzchni 3D urządzenia mikrofluidycznego z kanałami o rozmiarze mikro-naczyniowym (&lt;30 μm). Ten model mikro-naczyniowy in vitro umożliwia badanie interakcji biofizycznych między komórkami krwi, komórkami śródbłonka a czynnikami rozpuszczalnymi w chorobach hematologicznych.

Endotelializowane układy mikrofluidyczne do badania oddziaływań naczyniowych w chorobach hematologicznych

Źródło: Vanegas, M. I., et al. System mikroiniekcji do skojarzonego wlewu leków i elektrofizjologii. J. Vis. Exp. (2019 rok)Ten film przedstawia urządzenie mikroprzepływowe oparte na mikroelektrodach, które dostarcza roztwór leku przez rurkę kapilarną, wykorzystując roztwór markera na bazie oleju do precyzyjnego śledzenia objętości i umożliwiając jednoczesny zapis neuronowy i wlew leku.

System mikroiniekcji mikroprzepływowej do skojarzonego infuzji leków i elektrofizjologii

Mikroprzepływowa kontrola tlenu zapewnia więcej niż tylko wygodę i szybkość w porównaniu z komorami hipoksyjnymi do eksperymentów biologicznych. Zwłaszcza, gdy jest wdrażany poprzez dyfuzję przez membranę, tlen mikroprzepływowy może zapewnić jednoczesną modulację fazy ciekłej i gazowej na poziomie mikroskali. Technika ta umożliwia dynamiczne eksperymenty wieloparametryczne, które mają kluczowe znaczenie dla badania patofizjologii wysp trzustkowych.

Ilościowa i czasowa kontrola mikrośrodowiska tlenu na poziomie pojedynczej wyspy trzustkowej

Opisano proces wytwarzania wielowarstwowego, mikroprzepływowego urządzenia opartego na PDMS, które umożliwia przeprowadzanie reakcji transkrypcji i translacji in vitro (IVTT) przez dłuższy czas. Ponadto zapewniony jest kompleksowy przegląd sprzętu i oprogramowania wymaganego do automatyzacji i utrzymania tych reakcji przez dłuższy czas.

Wielowarstwowa platforma mikroprzepływowa do prowadzenia przedłużonej ekspresji genów bez komórek

Ten artykuł przedstawia metodę budowy i obsługi taniego, wielokanałowego systemu hodowli komórek perfuzyjnych do pomiaru dynamiki wydzielania i szybkości wchłaniania substancji rozpuszczonych w procesach komórkowych. System może również wystawiać komórki na działanie dynamicznych profili bodźców.

Wielostrumieniowy bioreaktor perfuzyjny zintegrowany z frakcjonowaniem wylotowym w celu dynamicznej hodowli komórek

Ten protokół opisuje metodę synchronicznego pozyskiwania i korejestracji wewnątrzkomórkowych zdarzeń sygnalizacyjnych oraz wydzielania insuliny i glukagonu przez pierwotne ludzkie pseudowyspy za pomocą adenowirusowego dostarczania cyklicznego biosensora monofosforanu adenozyny (cAMP), detektora różnic cAMP in situ (cADDis) oraz systemu mikroperyfuzji.

Ludzki system pseudowysp do synchronicznej oceny dynamiki biosensorów fluorescencyjnych i profili wydzielania hormonów

Analiza żywej tkanki w czasie rzeczywistym dostarcza ważnych danych funkcjonalnych i mechanistycznych. W tym artykule opisano protokoły i zmienne krytyczne w celu zapewnienia dokładnego i powtarzalnego generowania danych przez nowatorski i niewymagający pompowania wielokanałowy system fluidyki, który utrzymuje i ocenia szeroką gamę modeli tkanek i komórek.

Utrzymanie i ocena różnych typów tkanek i komórek oka przy użyciu nowatorskiego systemu płynów bez pompy

Ten protokół opisuje rekonfigurowalną platformę hodowli komórkowych opartą na membranie, która integruje format otwartej studni z możliwościami przepływu płynów. Platforma ta jest kompatybilna ze standardowymi protokołami i umożliwia odwracalne przejścia między trybem hodowli w studni otwartej a mikroprzepływowym, dostosowując się do potrzeb zarówno laboratoriów inżynieryjnych, jak i biologicznych.

Przekształcanie statycznych modeli tkanek barierowych w dynamiczne systemy mikrofizjologiczne

Prezentacja dwuwarstwowego urządzenia opartego na polidimetylosiloksanie (PDMS) do produkcji bibliotek kombinatorycznych w emulsjach (korkach) typu woda w oleju jest przedstawiona. Niezbędny sprzęt i oprogramowanie wymagane do automatyzacji produkcji zatyczek jest szczegółowo opisane w protokole, a także pokazano produkcję ilościowej biblioteki zatyczek fluorescencyjnych.

Dwuwarstwowe urządzenie mikroprzepływowe do kombinatorycznej produkcji korków

Poznaj mikroprzepływowy system peryfuzji wysp trzustkowych do dynamicznej oceny sekrecji insuliny z jednoczesnym obrazowaniem wapnia i potencjału mitochondrialnego. Ta metoda umożliwia badanie fizjologii komórek wyspowych w czasie rzeczywistym.

Wieloparametryczny system perfuzji wysepek w mikroprzepływowym urządzeniu perfuzyjnym

Przeglądaj więcej filmów