Test unikania danio pręgowanego i thigmotaxsji: wysokoprzepustowa metoda badania zachowania larw w odpowiedzi na awersyjny bodziec wzrokowy

- Na początek umieść pięć larw w każdym pasie sześciopasmowej płytki agarozowej. Dodaj więcej wody jajecznej, ale nie przepełniaj pasów. Woda jajeczna zawiera błękit metylenowy, który zapobiega rozwojowi pleśni. Pozwól larwom zaaklimatyzować się przez co najmniej 10 minut, aby zmniejszyć ich stres.

Teraz umieść płytkę studzienki w komorze obrazowania nad ekranem laptopa. Ustaw ostrość aparatu na płytce studzienki. Całkowicie napełnij pas wodą jajeczną

Następnie nagraj zachowanie larw umieszczonych na pustym tle, wykonując zdjęcia poklatkowe. Wyświetl ruchomy czerwony pasek na ekranie laptopa i zrób poklatkowe zdjęcia larw w odpowiedzi na poruszający się czerwony pasek.

Czerwony kształt jest postrzegany jako zagrożenie, bodziec awersyjny i powoduje stres u larw. W odpowiedzi unikają baru i wykazują pozytywną tigmotaksję. Dodatnia tigmotaksja to reakcja ryby na bodziec szukający kontaktu ze ścianą i pływający na krawędzi pasa.

W przykładowym protokole przeanalizujemy unikanie i reakcje tigmotaktyczne larw danio pręgowanego leczonych związkami farmaceutycznymi lub toksynami środowiskowymi.

- Aby rozpocząć przechwytywanie obrazu, ostrożnie przenieś larwy z szalki Petriego na pas agarozy, aby zmniejszyć stres larw. Na każdym torze można umieścić do 20 larw, ale zwykle używa się pięciu larw na pas, aby ułatwić jak najdokładniejsze śledzenie prędkości pływania i zmniejszyć liczbę larw potrzebnych na eksperyment.

Napełnij pasy wodą jajeczną z lub bez farmaceutyków lub toksyn, w zależności od eksperymentu. Nie należy wypełniać pasów do końca, dopóki nie zostaną umieszczone w szafkach obrazowych, aby zapobiec przepełnieniu. Odczekaj 10 minut, aby larwy się zaaklimatyzowały. Po okresie aklimatyzacji umieść cztery płytki ręcznie bezpośrednio na ekranie laptopa.

W tym czasie pasy ruchu można uzupełnić wodą jajeczną lub obróbką chemiczną, tak aby znajdowały się na poziomie górnej części pasa, aby wyeliminować cienie na krawędziach pasów na obrazach.

Zaprogramuj komputer do fotografii poklatkowej, robiąc zdjęcia co sześć sekund, co daje w sumie 300 zdjęć na eksperyment. Ustaw aparat na niższą rozdzielczość, aby obrazować z prędkością wideo. Podczas gdy niższa rozdzielczość ogranicza nagrania do pojedynczej płytki wielodołkowej, nagrania wideo są odpowiednie do obrazowania szybkich wydarzeń pływackich.

Użyj prezentacji PowerPoint jako bodźca awersyjnego dla larw. W tej demonstracji program PowerPoint rozpoczyna się od pustego białego tła przez 15 minut, po którym następuje 15 minut ruchomego czerwonego paska w górnej połowie płyty. Aby uniknąć parowania cieczy w obrębie pasów agarozy, należy utrzymać maksymalny czas obrazowania poniżej jednej godziny.