JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:33 min. • April 30th, 2023
- MikroRNA lub miRNA to małe niekodujące RNA, które regulują ekspresję genów poprzez degradację mRNA lub blokowanie ich translacji do funkcjonalnych białek. Krążące miRNA są potencjalnymi biomarkerami raka i można je wyodrębnić z płynów ustrojowych, takich jak osocze. Na początek wymieszaj osocze z roztworem denaturującym, który jednocześnie homogenizuje próbkę i hamuje rybonukleazy rozkładające RNA.
Potraktować kwaśnym fenolem-chloroformem i odwirować w celu rozdzielenia próbki na dwie fazy, dolną fazę organiczną zawierającą DNA i białka oraz górną fazę wodną zawierającą RNA. Odzyskaj fazę wodną. Dodaj absolutny etanol, aby wytrącić RNA z roztworu.
Doprowadzić stężenie etanolu w próbce do 25%, aby ustalić warunki początkowe sprzyjające separacji dużych ilości RNA. Przenieś mieszaninę do wstępnie zmontowanego wkładu filtracyjnego i odwirówki. Duże RNA selektywnie unieruchamiają się na filtrze, podczas gdy mniejsze miRNA gromadzą się w filtracie.
Następnie zwiększ stężenie etanolu do 55%, aby sprzyjać izolacji miRNA. Przenieś filtrat do nowego wkładu filtracyjnego i odwiruj w celu wychwycenia miRNA. Umieścić wkład w probówce zbiorczej i dodać odpowiedni bufor elucyjny. Odwirować w c
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych