Eksperymentalny mysi model czerniaka z przerzutami: platforma do badania potencjału przerzutowego komórek czerniaka w płucach

- Eksperymentalne modele przerzutów pomagają ocenić potencjał komórek nowotworowych do wynaczynienia i proliferacji w określonych miejscach po wstrzyknięciu donaczyniowym. Na początek należy przygotować jednokomórkową zawiesinę komórek czerniaka w pożądanym stężeniu przy użyciu odpowiedniej pożywki. Zawiesinę należy załadować do strzykawki.

Następnie unieruchom, unieruchamiaj mysz w komorze i zabezpiecz ją tak, aby jej ogon był dostępny. Obróć mysz o 90 stopni, aby wyświetlić jej żyłę boczną. Użyj lampy grzewczej, aby zwiększyć temperaturę otoczenia, aby rozszerzyć żyłę ogonową. Teraz wbij igłę w kierunku dystalnego końca ogona i wstrzyknij przygotowaną zawiesinę komórek czerniaka do rozszerzonej żyły.

Wstrzyknięte przerzutowe komórki nowotworowe migrują przez układ krążenia. W końcu niektóre z tych komórek wynaczyniają się z krążenia do odległych narządów, takich jak płuca. Te komórki nowotworowe przystosowują się do nowego mikrośrodowiska, aby namnażać się i tworzyć eksperymentalne ogniska przerzutowe.

W poniższym protokole zademonstrujemy wstrzyknięcie komórek czerniaka B16-BL6 do żyły ogonowej do modelu mysiego w celu zbadania ich potencjału przerzutowego.

- Po przygotowaniu wszystkich zawiesin komórek B16-BL6 wybierz mysz. Trzymając go za ogon, poprowadź zwierzę tyłem do przodu, do krępowania. Gdy tułów myszy znajdzie się w komorze głównej, a jej ogon na zewnątrz aparatu, przystąp do ciągnięcia zwierzęcia w kierunku końca krępowania.

Następnie włóż tłok ograniczający i kontynuuj naciskanie tłoka, aż mysz zostanie zabezpieczona. Gdy zwierzę znajdzie się na miejscu, obróć mysz o 90 stopni tak, aby jedna z bocznych żył ogonowych była skierowana do góry. Następnie użyj wacika nasączonego alkoholem, aby energicznie oczyścić stronę ogona myszy, w której żyła jest najbardziej widoczna.

Aby przygotować się do wstrzyknięcia, najpierw należy zebrać 300 mikrolitrów z 0,5 miliona komórek na mililitr zawiesiny do strzykawki. Następnie wysuń bąbelki ze strzykawki, odwracając ją, przesuwając na bok i naciskając tłok. Po usunięciu pęcherzyków należy wyrzucić hodowlę komórkową, aby uzyskać ostateczną objętość 250 mikrolitrów w strzykawce.

Kontynuuj rozciąganie ogona myszy ręką niedominującą. Przytrzymaj go tak, aby palec wskazujący uniósł bliższy koniec ogona, a kciuk wcisnął dystalną część. Ręką dominującą wbij igłę do żyły w kierunku dystalnego końca ogona, pod niewielkim kątem w dół. Następnie włóż igłę dalej, dostosowując ją tak, aby pasowała do kąta żyły ogonowej.

Po wprowadzeniu igły, około 1 centymetr do żyły ogonowej, rozpocząć naciskanie tłoka, trzymając strzykawkę stabilnie. Zatamować krwawienie, przytrzymując gazę przy miejscu wejścia. Po wyrzuceniu zawiesiny komórkowej należy wyjąć igłę z żyły i wyrzucić ją. Następnie wyjmij tłok z ogranicznika i umieść mysz w klatce odbiorczej.