Name: Iniekcja dokomorowa in utero i elektroporacja zarodków myszy E15 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: Naucz się techniki iniekcji dokomorowych in utero i elektroporacji zarodków myszy E15. Ta metoda umożliwia wprowadzanie DNA plazmidowego do komórek nerwowych w trakcie rozwoju mózgu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

wewnątrzkomorowe wstrzyknięcie i elektroporacja in utero embrionów myszy w 15. dniu rozwoju (e15)

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In utero in-vivo iniekcja i elektroporacja embrionalnej nowokory myszy stanowią potężne narzędzie do manipulacji poszczególnymi komórkami progenitorowymi wyścielającymi ściany komór bocznych. Technika ta jest obecnie powszechnie wykorzystywana do badania procesów uczestniczących w kortykogenezie poprzez nadekspresję lub wyciszanie genów oraz obserwację ich wpływu na proliferację, migrację i różnicowanie komórkowe. W porównaniu z tradycyjnymi strategiami nokautu, elektroporacja in utero zapewnia szybki sposób manipulacji populacją komórek w określonym oknie czasowym. W niniejszym protokole wideo przedstawiamy metodologię eksperymentalną obejmującą przygotowanie myszy do operacji, odsłonięcie rogów macicy poprzez laparotomię, wstrzykiwanie DNA do komór bocznych rozwijającego się zarodka, elektroporację DNA do progenitorów wyścielających ścianę boczną oraz opiekę nad zwierzętami po zabiegu. Nasze laboratorium stosuje ten protokół w przypadku operacji na myszach w dniach embrionalnych E13-E16, jednak najczęściej jest on przeprowadzany w dniu E15, co zaprezentowano w tym filmie.

Wewnątrzkomorowe wstrzyknięcie i elektroporacja in utero embrionów myszy w 15. dniu rozwoju (E15)

In-utero in-vivo iniekcja i elektroporacja zarodkowego neokortyksu myszy stanowią potężne narzędzie do manipulacji pojedynczymi komórkami progenitorowymi ...

Cześć, jestem William Tis z laboratorium Krete. Dzisiaj wraz z zespołem zaprezentujemy wam wykonywanie wlewów dopłaciowych u embrionów myszy w 15. dniu rozwoju (E 15). Cześć, nazywam się Laura Elias.Dzisiaj pokażę Państwu, jak przygotować pipety do mikroiniekcji oraz jak napełnić pipety do iniekcji dokomorowych i elektroporacji, które będziemy przeprowadzać. Nazywam się David Castaneda i będę pomagać w iniekcjach in vivo in utero embrionów myszy. Będziemy wstrzykiwać plazmidowe DNA do komory bocznej rozwijających się embrionów myszy.Celujemy w korę CE tych embrionów, aby uzyskać ekspresję różnych cząsteczek w komórkach glejowych, które w późniejszym etapie rozwoju przekształcą się w neurony. Przy wykonywaniu tych zastrzyków wewnątrzmacicznych należy użyć kilku ważnych narzędzi, które teraz zaprezentuję. Używamy pęsety typu freer oraz kilku pęset pomocniczych.Jedna, jedna para z ząbkowaniem oraz druga para z małym ząbkiem na końcówce. Używamy kleszczyków hemostatycznych. To są nożyczki.Następnie używamy tych dwóch zszywek. Ta większa służy do pracy ze szczurami, a ta mniejsza do pracy z myszami.Używa zszywek rozmiaru siedem, a tutaj używane są zszywki rozmiaru dziewięć, które są po

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e15-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Wstrzyknięcie do komory wewnątrzmacmicowej i elektroporacja zarodków mysich w 15. dniu ciąży

Wewnątrzmaciczna iniekcja in vivo oraz elektroporacja nowokory embrionalnego szczura stanowią potężne narzędzie do manipulacji pojedynczymi komórkami progenitorowymi...

Wewnątrzkomorowe wstrzykiwanie i elektroporacja in utero embrionów szczura w 16. dniu rozwoju (E16)

In utero operacje przeżycia u myszy umożliwiają molekularną manipulację ekspresją genów podczas rozwoju. W niniejszej pracy opisujemy wykorzystanie obrazowania ultradźwiękowego o wysokiej częstotliwości do prowadzenia iniekcji wektorów retrowirusowych do mózgu myszy w 9,5 dniu embrionalnym (E).

Mikroiniekcja do przedniego mózgu myszy in utero w dniu E9.5 pod kontrolą ultradźwięków

In utero elektroporacja umożliwia szybkie dostarczanie genów w sposób kontrolowany przestrzennie i czasowo do rozwijającego się ośrodkowego układu nerwowego (OUN). W niniejszej pracy opisujemy wysoce adaptowalny protokół elektroporacji in utero, który może być wykorzystany do dostarczania konstruktów ekspresyjnych do wielu embrionalnych domen OUN, w tym do telencefalonu, diencefalonu i siatkówki.

Efektywne dostarczanie genów do wielu obszarów OUN z wykorzystaniem elektroporacji in utero

Opisano metodę transferu genów do rozwijającego się mózgu myszy z wykorzystaniem unikalnej metody chirurgicznej oraz specjalnego kształtu elektrod. Ta wyjątkowa technika umożliwia czasową i przestrzenną transfekcję plazmidowego DNA, co pomoże wielu neuronaukowcom w badaniu rozwoju mózgu.

Elektroporacja myszy in utero: kontrolowana spatiotemporalna transfekcja genów

Kontrola ekspansji somatycznych komórek macierzystych jest głównym czynnikiem utrudniającym ich badanie oraz zastosowanie w terapii. W niniejszym opracowaniu opisujemy system czasowej kontroli ekspansji neuronalnych komórek macierzystych podczas rozwoju oraz w wieku dorosłym, który może zostać wykorzystany do zwiększenia liczby neuronów generowanych w mózgu myszy.

Ekspansja embrionalnych i dorosłych komórek macierzystych układu nerwowego poprzez elektroporację in utero lub stereotaksycyjne wstrzyknięcie wirusowe

Ten film demonstruje dostarczanie plazmidowego DNA do komórek neuronalnych móżdżku mysich zarodków za pomocą elektroporacji in utero. Metoda ta jest przydatna do zrozumienia funkcji genów in vivo w prawidłowym rozwoju mózgu oraz zmian w ekspresji genów komórek neuronalnych podczas progresji guza.

Dostarczanie genów oparte na elektroporacji in utero: technika wstrzykiwania plazmidowego DNA do embrionalnych komórek móżdżku mysich zarodków

Pomimo funkcjonalnego i medycznego znaczenia podwzgórza, rzadko próbowano genetycznej manipulacji jego rozwojem in utero. Przedstawiamy szczegółową procedurę elektroporacji in utero do podwzgórza myszy i pokazujemy reprezentatywne wyniki całkowitej i częściowej (regionalnej) transfekcji podwzgórza.

Manipulacja genetyczna myszy rozwijającej podwzgórze poprzez elektroporację in utero

Ten protokół opisuje szczegółowo, jak specyficznie transfekować różne regiony w ośrodkowym układzie nerwowym C57BL/6 za pomocą elektroporacji in utero. W tym protokole zawarte są szczegółowe instrukcje dotyczące transfekcji regionów, które rozwijają się w korę, hipokamp, wzgórze, podwzgórze, jądro przegrody bocznej i prążkowie.

Kora mózgowa, hipokamp, wzgórze, podwzgórze, jądro przegrody bocznej i jądro prążkowia specyficzne dla macicy elektroporacja u myszy C57BL/6

Podwójna elektroporacja w macicy pozwala na celowanie w populacje komórek, które są przestrzennie i czasowo oddzielone. Technika ta jest przydatna do wizualizacji interakcji między tymi populacjami komórek przy użyciu białek fluorescencyjnych w normalnych warunkach, ale także po eksperymentach funkcjonalnych w celu zakłócenia interesujących genów.

Podwójna elektroporacja in utero w celu ukierunkowania na czasowo i przestrzennie oddzielone populacje komórek

W tym protokole opisujemy, jak wstrzyknąć lentiwirusowi do mysiej jamy owodniowej w E7.5, prowadząc do jednolitej transdukcji całej płytki nerwowej, przy minimalnym szkodliwym wpływie na przeżycie lub rozwój embrionalny.

Celowanie w mysią płytkę nerwową za pomocą nanoiniekcji in utero (NEPTUNE) w 7. dniu embrionalnym

Naucz się techniki iniekcji dokomorowych in utero i elektroporacji zarodków myszy E15. Ta metoda umożliwia wprowadzanie DNA plazmidowego do komórek nerwowych w trakcie rozwoju mózgu.

Wewnątrzkomorowe wstrzyknięcie i elektroporacja in utero embrionów myszy w 15. dniu rozwoju (E15)

Przeglądaj więcej filmów