Wizualizacja stresu oksydacyjnego wywołanego przez patogeny u C. elegans za pomocą SKN-1 oznaczonego GFP

Zacznij od dwóch płytek zawierających robaki C. elegans , które wyrażają zielone fluorescencyjne białko oznaczone SKN-1, czynnikiem transkrypcyjnym zlokalizowanym w cytoplazmie jelitowej. Te robaki zawierają także granulki lipofucyny jelitowej, które wykazują autofluorescencję.

Jedna płytka jest zasiewana bakteriami niepatogennymi jako grupą kontrolną, druga z bakteriami patogennymi jako grupą testową.

W grupie testowej nadtlenek wodoru produkowany przez patogen wywołuje stres oksydacyjny, wywołując translokację SKN-1 do jąder jelit.

W grupie kontrolnej większość SKN-1 pozostaje rozproszona w cytoplazmie.

Każdą płytkę przemyj buforem i przełóż robaki do rurek.

Wirówkuj, aby oddzielić robaki i usunąć bufor.

Dodaj podłoże zawierające azyd sodu, aby je znieczulić.

Zamontuj robaki na agarozowych podkładkach, załóż pokrywki i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym. Użyj autofluorescencji, aby zwizualizować granice jądrowe.

Silny sygnał jądrowy SKN-1 w teście, w porównaniu do rozproszonego sygnału cytoplazmatycznego w kontroli, wskazuje na relokalizację jądra i potwierdza stres oksydacyjny wywołany przez patogen.

Za pomocą pipety dodaj około 100 larw L4 do każdej płytki THY z nasieniem strepto