Wstrzyknięcie do ściany pęcherza myszy
July 12th, 2011
Wstrzyknięcie do ściany pęcherza moczowego myszy jest użytecznym podejściem do ortotopowego badania komórek macierzystych pęcherza moczowego i biologii raka. Tę delikatną metodę mikrochirurgiczną można opanować dzięki starannej technice i praktyce.
Ogólnym celem tej procedury jest wprowadzenie komórek do określonych obszarów ściany pęcherza moczowego. Osiąga się to poprzez wykonanie najpierw nacięcia brzucha w celu odsłonięcia pęcherza. Kolejnym krokiem zabiegu jest wprowadzenie skosu igły do środka budynku.
Ostatnim krokiem procedury jest naciśnięcie tłoka strzykawki w celu wstrzyknięcia interesujących komórek do ściany pęcherza moczowego. Udana implantacja komórek charakteryzuje się dobrze zlokalizowanym pęcherzykiem, z którego nie wycieka płyn i pozostaje stabilny rozmiar. Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak przezcewkowe inokulacje myszy komórkami, jest to, że umożliwia skierowanie miejsca, w którym komórki zagnieżdżą się w pęcherzu moczowym.
Wizualna demonstracja mięśnia li ma kluczowe znaczenie, ponieważ pobyt we wstrzyknięciu jest trudny do nauczenia. Znajomość prawidłowego kąta i pozycji wprowadzenia igły do pęcherza moczowego jest niezbędna do sukcesu techniki. Wybierz tutaj wiek, płeć i szczep myszy w zależności od potrzeb eksperymentu.
Myszy w wieku od ośmiu do 12 tygodni są używane do rozpoczęcia czyszczenia powierzchni stołu operacyjnego wodą z mydłem. Następnie przetrzyj powierzchnię stołu chirurgicznego chusteczkami bocznymi lub chusteczkami antyseptycznymi. Narzędzia chirurgiczne przed zabiegiem należy wysterylizować w autoklawie.
Przetrzyj narzędzia 70% etanolem tuż przed użyciem i ponownie wysterylizuj sterylizatorem z gorącymi kulkami między poszczególnymi operacjami. Wyczyść 100-mikrolitrową strzykawkę Hamiltona przymocowaną do igły o rozmiarze 30 przez wielokrotne zasysanie alkoholu absolutnego, a następnie wysterylizowaną solą fizjologiczną buforowaną fosforanem. Umieść znieczulone zwierzę w pozycji leżącej na ciepłej podkładce, aby pomóc utrzymać normalną temperaturę ciała.
Utrzymuj odpowiedni poziom znieczulenia, umieszczając pysk zwierzęcia w dyszy zawierającej odparowaną izofluor. Następnie usuń włosy ze skóry brzucha za pomocą maszynki do strzyżenia. Użyj jednorazowej sterylnej serwety chirurgicznej, aby przykryć odbyt, aby zapobiec zanieczyszczeniu kału podczas operacji.
Umieść drugą serwetę chirurgiczną na dolnej części brzucha i odsłoń okno chirurgiczne. Wysterylizuj miejsce operowane wielokrotnym nakładaniem betadyny i alkoholu za pomocą mikroskopu preparacyjnego w celu powiększenia. Wykonaj nacięcie dolnej linii środkowej brzucha nożyczkami.
Użyj delikatnego nacisku na brzuch, aby odsłonić pęcherz. Ponieważ pęcherz moczowy jest zwykle częściowo lub całkowicie pełny, nacisk na brzuch preferencyjnie odepchnie inne narządy i pozwoli pęcherzowi wyłonić się z nacięcia. Jeśli pęcherz jest pełny, delikatnie uciskaj kopułę w dół, aby ją częściowo rozprężyć.
Napełnij sterylną strzykawkę Hamilton 50 mikrolitrami roztworu próbki. Wprowadzić końcówkę igły skosem skierowanym do góry w ścianę pęcherza moczowego i wstrzyknąć roztwór próbki. Udane wstrzyknięcie charakteryzuje się dobrze zlokalizowanym pęcherzykiem, z którego nie wycieka płyn i utrzymuje stabilny rozmiar.
Po wstrzyknięciu należy zamknąć nacięcie klipsami do ran. Pozwól mistrzowi zregenerować się na podkładce rozgrzewającej Jeden mistrz. Tę technikę można wykonać w ciągu 10 do 15 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo.
Sukces można potwierdzić poprzez analizę histologiczną pęcherza moczowego w kolejnych punktach czasowych po wstrzyknięciu.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Przegląd
Ten artykuł omawia mikrochirurgiczną technikę wstrzyknięcia komórek do ściany pęcherza mysiego, ułatwiającą badania nad komórkami macierzystymi pęcherza i biologią raka. Ta metoda pozwala na precyzyjne umiejscowienie implantacji komórek, co jest znaczącą przewagą nad tradycyjnymi technikami.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauki
- Biologia komórki
- Badania nad rakiem
Tło
- Zrozumienie biologii pęcherza jest kluczowe dla postępów w badaniach nad rakiem.
- Obecne metody implantacji komórek mają ograniczenia w precyzji.
- Ta technika ma na celu poprawę lokalizowania wstrzykniętych komórek.
- Umiejętności mikrochirurgiczne są niezbędne do pomyślnego zastosowania.
Cel badania
- Wprowadzanie komórek do określonych obszarów ściany pęcherza.
- Poprawa badań nad komórkami macierzystymi pęcherza i biologią raka.
- Dostarczenie niezawodnej metody implantacji komórek.
Stosowane metody
- Narcięcie brzucha w celu ekspozycji pęcherza.
- Wszczepienie igły do wstrzyknięcia komórek.
- Wstrzyknięcie komórek za pomocą strzykawki.
- Monitorowanie stabilnego tworzenia się bąbli, aby potwierdzić pomyślne wszczepienie.
Główne wyniki
- Pomyślne wszczepienie jest wskazane przez zlokalizowany, stabilny bąbel.
- Ta metoda pozwala na ukierunkowane umiejscowienie komórek w pęcherzu.
- Wykazuje zalety w porównaniu z technikami inokulacji przezcewkowej.
- Stanowi podstawę dla przyszłych badań nad biologią pęcherza.
Wnioski
- Technika mikrochirurgiczna jest skuteczna w przypadku wstrzykiwań do pęcherza.
- Otwiera nowe kierunki badań nad komórkami macierzystymi pęcherza i rakiem.
- Dbawcza technika i praktyka są niezbędne do sukcesu.
Często zadawane pytania
Executive Industry Relevance
Mouse bladder wall injection enables precise orthotopic modeling of bladder biology, supporting mechanistic studies in stem cell, smooth muscle, and cancer research. This technique enhances predictive confidence in disease-relevant systems by allowing targeted cell delivery and localized tissue interrogation. Its reproducibility and anatomical specificity position it as a critical tool for early discovery and preclinical model development in urologic disease pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables direct interrogation of bladder-specific pathways and cell populations in vivo.
- Supports functional target validation by permitting controlled cell implantation and monitoring.
- Facilitates mechanistic de-risking through spatially defined experimental manipulation.
Screening & Assay Development
- Prepares validated in vivo models for downstream screening of therapeutic candidates.
- Standardizes cell delivery and anatomical targeting, improving reproducibility across studies.
- Generates quantitative outputs such as localized bleb formation and histological confirmation.
Translational & Preclinical Research
- Establishes disease-relevant models for translational biomarker discovery and validation.
- Enables continuity from discovery-stage findings to preclinical efficacy and safety studies.
- Supports risk-adjusted advancement by providing robust in vivo data on cell behavior and tissue response.
Pipeline & Workflow Integration
This microsurgical injection method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis-driven in vivo studies and supporting lead identification in bladder disease research.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification in bladder tissue.
- Screening: Provides a reproducible platform for evaluating candidate cell lines or interventions.
- Analytics: Delivers measurable endpoints such as bleb stability and histological outcomes for comparative analysis.
- Translational Research: Aligns with biomarker and disease model development for preclinical validation.
- Enterprise Reuse: Offers a standardized, reusable protocol for diverse bladder-focused research programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in bladder research.
- Operational Value: Promotes standardization, reproducibility, and scalability across studies.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision-making and capital efficiency by enabling robust in vivo validation.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of bladder-targeted programs.
Implementation Considerations
- Requires microsurgical expertise and anatomical proficiency for consistent results.
- Demands access to sterilized surgical instruments and anesthesia infrastructure.
- Necessitates cross-team standardization of injection parameters and animal selection.
- Adaptable to various mouse strains and experimental cell types as dictated by study goals.
- Success is contingent on precise technique and confirmation via histological analysis.
