Zliczanie ludzkich nerwowych komórek macierzystych

Teraz pokażę wam, jak liczyć ludzkie komórki neuroprekursorowe i policzycie swoje komórki, gdy chcecie je umieścić w chemii immunologicznej lub gdy chcecie wykonać transfekcję za pomocą maszyny do pomiaru czynnika jądrowego. Używam hemocytometru z kontrastem fazowym, który ma siatkę krawędzi, a także używamy barwnika o nazwie trip i blue. A barwnik jest przydatny, ponieważ może rozróżniać żywe i martwe komórki.

Martwe lub umierające komórki pobierają ten barwnik i stają się niebieskie. Kiedy spojrzysz na komórki w hemo, cytometrze i żywych komórkach są w stanie wykluczyć ten barwnik i one, one, one, nie wydają się niebieskie. W ten sposób możesz określić żywotność swoich komórek, aby przygotować roztwór tripu i niebieskiego i pożywki.

Zamierzam dodać 20 mikrolitrów pułapki i niebieskiego roztworu do tej 0,5 mililitrowej rurki epi. A potem dodam 25 mikrolitrów pożywki. W ten sposób w tej chwili mam 45 mikrolitrów niebieskiej patelni pułapki i roztworu pożywki, więc kiedy dodam pięć mikrolitrów zawiesiny komórek, będę miał rozcieńczenie od jednego do 10.

A więc teraz dodam pięć mikrolitrów zawiesiny komórkowej. Najpierw upewnię się, że komórki są dobrze zawieszone przez wirowanie palcami. Więc teraz chcę się upewnić, że to rozwiązanie jest dobrze wymieszane.

Więc zamierzam kilka razy położyć łóżko w górę i w dół. I na koniec zamierzam załadować około 12 mikrolitrów tej zawiesiny komórkowej do hemocytometru. Ma dwa porty i możesz, możesz użyć jednego z nich.

Więc wszystko, co musisz zrobić, to wprowadzić roztwór do tego portu, a płyn zostanie zassany przez działanie kapilarne. A teraz jestem gotów do liczenia. Oto spojrzenie na hemocytometr przy 10 x, a tutaj mamy kwadrant, który zawiera 16 kwadratów.

I jak widać, możemy tu zaobserwować żywe i martwe komórki. Tutaj mamy żywe komórki, takie jak ta i ta i ta. Mamy też kilka martwych komórek, takich jak ta.

Jeśli zauważysz, martwa komórka wydaje się ciemnoniebieska, podczas gdy żywe komórki mają wokół siebie coś w rodzaju gradu. Więc teraz zamierzam policzyć wszystkie żywe komórki. Przejdę więc od lewej do prawej i od góry do dołu.

1, 2, 3, 4, 5, 6, 33, 1 32, 33, 34, 3 5, 3 6. Mamy więc w sumie trzy sześciokomórkowe w tym kwadrancie. Więc kiedy widzę komórki, które znajdują się na granicy kwadrantu, na przykład wzdłuż tej linii tutaj, aby być spójnym, liczę komórki, które znajdują się po lewej stronie i na górnej granicy.

I konsekwentnie liczę komórki na tych granicach dla wszystkich kwadrantów na hemocytometrze. Więc teraz obliczymy, ile komórek mamy na mikrolitr. Aby to zrobić, wezmę średnią komórek na kwadrant, która wynosi 38 i pomnożę przez 10, co jest współczynnikiem determinowanym przez wymiary komory.

I zamierzamy również pomnożyć przez 10, co jest naszym współczynnikiem rozcieńczenia w tym przypadku. A na końcu otrzymamy liczbę komórek na mikrolitr. Tak więc w tym przypadku mamy 3 800 ogniw na mikrolitr.

A ponieważ zawiesiliśmy naszą paletę komórek w 500 mikrolitrach roztworu, możesz obliczyć, ile masz w sumie komórek. I wszystko jest gotowe.