Kwantyfikacja oparta na nanocząstkach sprzężonych z przeciwciałami przy użyciu mikroskopii ciemnego pola: procedura wychwytywania i ilościowego oznaczania określonych egzosomów z płynów ustrojowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:43 min. • April 30th, 2023
Egzosomy to małe, zamknięte w błonie struktury, które są wydzielane przez komórki do przestrzeni zewnątrzkomórkowej. Egzosomy są obficie obecne w biopłynach.
Aby zidentyfikować i wychwycić określone egzosomy z płynów ustrojowych, zacznij od wykonania wielodołkowego testu immunologicznego. Ten szkiełko jest funkcjonalizowany białkami, które działają jak antygeny i wiążą się ze specyficznymi przeciwciałami.
Uzupełnić szkiełko pożądanym roztworem przeciwciała pierwszorzędowego i inkubować. Przeciwciała te wiążą się z wstępnie pokrytymi antygenami na powierzchni szkiełka.
Odessać pozostały roztwór, aby usunąć wszelkie niezwiązane przeciwciała. Teraz dodaj bufor blokujący, który blokuje wolne antygeny, zapobiegając w ten sposób niespecyficznemu wiązaniu egzosomów.
Następnie usuń bufor blokujący, załaduj egzosomy zawierające zawiesinę surowicy na szkiełko i inkubuj. Pozwala to na wyłączne wiązanie egzosomów specyficznych dla celu z wychwyconymi przeciwciałami pierwotnymi.
Następnie załaduj zawiesinę przeciwciał drugorzędowych sprzężonych z nanocząstkami złota na powierzchnię szkiełka. Przeciwciała te przyłączają się do wstępnie związanych egzosomów i tworzą kompleks wykrywający.
Na konie
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych