Wysokosprawna chromatografia cieczowa z odwróconymi fazami: solidna metoda oznaczania ilościowego znakowanych fluorescencyjnie i derywatyzowanych kwasów sjalowych wyizolowanych z wątroby myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:31 min. • July 8th, 2025
Kwasy sjalowe, takie jak kwas N-acetyloneuraminowy i kwas N-glikolyloneuraminowy, są ujemnie naładowanymi ugrupowaniami węglowodanowymi znajdującymi się na dystalnych końcach łańcuchów oligosacharydowych na powierzchni komórek ssaków.
Aby określić ilościowo względne ilości tych kwasów sjalowych w tkance wątroby myszy za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami lub RP-HPLC, najpierw należy potraktować izolowaną mieszaninę kwasu sjalowego środkiem do derywatyzacji. Czynnik derywatyzacyjny oddziałuje z grupami funkcyjnymi kwasów sjalowych, tworząc stabilne, fluorescencyjne pochodne kwasu sjalowego.
Zamontuj kolumnę RP-HPLC podłączoną do detektora fluorescencji. Kolumna składa się z porowatej fazy stacjonarnej na bazie krzemionki połączonej z niepolarnymi, hydrofobowymi ligandami łańcuchów alkilowych w celu ułatwienia selektywnych oddziaływań z pochodnymi kwasu sjalowego podczas przebiegu chromatograficznego.
Zrównoważyć kolumnę za pomocą wodnej polarnej fazy ruchomej zawierającej niskie stężenia acetonitrylu, mniej polarnego rozpuszczalnika organicznego, w celu optymalnego kondycjonowania kolumny.
Załaduj derywatyzowaną mieszaninę kwasu sjalowego do kolumny.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych