Metoda analizy oparta na teście ELISA do analizy interakcji między białkami przynęty i ofiary

Fizyczna interakcja między dwoma partnerami białkowymi moduluje dalsze mechanizmy biologiczne.

Aby wykryć interakcje białko-białko za pomocą testu immunoenzymatycznego ELISA, należy pobrać wielodołkową płytkę do testu immunologicznego. Dodać bufor otoczkowy zawierający jedno z oddziałujących białek ― białko przynęty ― i inkubować. Białka przynęty są adsorbowane na powierzchni studni poprzez niespecyficzne oddziaływania hydrofobowe.

Wyrzucić zużyty roztwór i umyć płytkę buforem w celu usunięcia niezwiązanych białek. Dodaj roztwór blokujący i inkubuj, pozwalając cząsteczkom środka blokującego roztworu zablokować niespecyficzne miejsca wiązania na powierzchni studzienki.

Dodaj oddziałującego partnera białkowego - białko ofiary - oznaczone resztami histydyny w celu łatwej kwantyfikacji. Inkubuj, pozwalając białku ofiary na specyficzne związanie się ze swoim interaktywnym partnerem - przynętą. Dodaj roztwór przeciwciał antyhistydynowych sprzężonych z enzymami peroksydazy chrzanowej, które wiążą się z ofiarą, tworząc kompleks przynęta-ofiara-przeciwciało.

Odpipetować roztwór zawierający substrat enzymu i nadtlenek wodoru i rozpocząć inkubację.

Enzym peroksydazy chrzanowej wykorzystuje na