Interferencyjna mikroskopia refleksyjna do bezznacznikowej wizualizacji dynamiki mikrotubul
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 6:36 min. • July 8th, 2025
Mikroskopia interferencyjna odbiciowa umożliwia obrazowanie mikrotubul, które dynamicznie rosną i kurczą się.
Przymocuj paski parafiny do jednego szkiełka nakrywkowego i umieść nieco mniejsze szkiełko nakrywkowe na wierzchu. Podgrzej, aby stopić parafinę, tworząc szczelny kanał. Odpipetować przez kanał roztwór zawierający przeciwciała. Przeciwciała przyczepiają się do powierzchni szkiełka nakrywkowego. Dodaj roztwór blokujący, blokując regiony niezwiązane z przeciwciałami i zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu białek.
Umieść szkiełko nakrywkowe na stoliku mikroskopu. Ustawić podgrzewacz próbki na temperaturę ułatwiającą wzrost mikrotubul.
Nasiona mikrotubul pipetowych stabilizowane niehydrolizowalnym trifosforanem guanozyny, GTP, analogiem. Nasiona wiążą się ze szkiełkiem nakrywkowym pokrytym przeciwciałami. Dodaj bufor zawierający nieznakowaną tubulinę, GTP i środki redukujące.
W optymalnej temperaturze i warunkach buforowych nasiona działają jako miejsca zarodkowania, umożliwiając nieznakowane wiązanie tubuliny i wzrost mikrotubul.
Rozpocznij obrazowanie. Padające światło skupia się przez przysłonę aperturową na rozdzielaczu wiązki, który częściowo odbija światło do obiektywu,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych