JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:18 min. • July 8th, 2025
Aby wyizolować limfocyty T - białe krwinki niezbędne dla układu odpornościowego - za pomocą sortowania komórek aktywowanego wyporem, BACS, należy pobrać zawiesinę komórek jednojądrzastych krwi obwodowej, PBMC. PBMC zawierają docelowe limfocyty T i komórki niedocelowe, takie jak limfocyty B, monocyty, komórki NK i komórki dendrytyczne.
Dodać bufor zawierający odpowiednią ilość biotynylowanego przeciwciała anty-CD3 i inkubować przez wymagany czas. Przeciwciało wiąże się z kompleksem CD3 – multimerycznym kompleksem białkowym na powierzchni komórki – cechą charakterystyczną limfocytów T.
Dodaj funkcjonalizowane mikropęcherzyki - małe kuliste cząstki pokryte streptawidyną - w celu pozytywnej selekcji limfocytów T związanych z przeciwciałami. Rdzeń każdego mikropęcherzyka jest pustą kulą, dzięki czemu są to cząstki o niskiej gęstości, które mogą unosić się w roztworze wodnym.
Inkubować mieszaninę pod wpływem mieszania, pozwalając mikropęcherzykom i próbce dokładnie się wymieszać. Podczas inkubacji streptawidyna na mikropęcherzykach wiąże się z biotyną na przeciwciałie związanym z limfocytami T, unieruchamiając komórki na mikropęcherzykach.
Odwirować probówkę. Komórki niebędące przedmiote
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych