Izolowanie mikrogleju ze zmian demielinizacyjnych w mózgu myszy za pomocą magnetycznego sortowania komórek aktywowanych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:09 min. • July 8th, 2025
Wypreparuj barwione zmiany demielinizacyjne z ciała modzelowatego mózgu myszy.
Zmiany te zawierają rezydujący w mózgu mikroglej wykazujący ekspresję integryny CD11b na powierzchni komórki.
Zebrać tkankę i dodać roztwór zawierający enzym proteolityczny i DNazę.
Enzym degraduje macierz zewnątrzkomórkową, podczas gdy DNaza degraduje wolne DNA.
Dodaj zimny bufor i przefiltruj zawiesinę przez sitko, aby usunąć grudki komórkowe.
Odwirować, odrzucić supernatant i ponownie zawiesić granulowane komórki w podłożu o gradiencie gęstości.
Nakładka z buforem i wirówką w celu zebrania pozostałych zanieczyszczeń w górnych warstwach; nienaruszone komórki osiadają na dnie.
Usuń zanieczyszczenia i ponownie zawieś ogniwa w buforze.
Dodaj kulki magnetyczne anty-CD11b, aby oznaczyć mikroglej.
Załaduj ogniwa na kolumnę zawierającą kule ferromagnetyczne umieszczone w polu magnetycznym separatora magnetycznego.
Pod zewnętrznym polem magnetycznym mikroglej związany z kulkami jest zatrzymywany w kolumnie, podczas gdy przepływają przez nią niezwiązane komórki.
Usuń kolumnę z pola magnetycznego. Dodaj bufor, aby wymyć mikroglej.
Rozpocznij od mikrowypreparowania zmian oznaczonych neutralnym barwnikiem wokół ci
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych