Wykorzystanie matryc wieloelektrodowych do pomiaru fizjologii synaptycznej w sferach kokultury 3D

Weźmy sterylną matrycę wieloelektrodową lub MEA, urządzenie, które rejestruje aktywność elektryczną komórek docelowych.

Dodać roztwór polimeru do MEA i inkubować.

Polimer pokrywa powierzchnię MEA, zwiększając w ten sposób właściwości przyciągania wody do powierzchni.

Usuń nadmiar polimeru i umyj wodą dejonizowaną.

Dodaj macierz zewnątrzkomórkową lub ECM i inkubuj, aby umożliwić mu pokrycie MEA. Usuń nadmiar ECM.

Następnie dodaj sfery kokultury 3D składające się z neuronów i astrocytów w odpowiednim podłożu.

Inkubować, aby kulki przylegały do powierzchni MEA.

Umieść MEA na stopniu głowicy o kontrolowanej temperaturze systemu MEA i zarejestruj spontaniczną aktywność elektryczną na elektrodach.

Zmierzona aktywność elektryczna odpowiada komunikacji na skrzyżowaniach nerwowych w kuli.

Rozpocznij od pokrycia powierzchni każdej matrycy wieloelektrodowej lub MEA 1 milimetrem poliornityny, aby powierzchnia stała się hydrofilowa i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez co najmniej cztery godziny. Po inkubacji usunąć poliornitynę i umyć powierzchnię każdego MEA wodą dejonizowaną. Następnie dodaj 1 mililitr macierzy zewnątrzkomórkowej i wróć do inkubatora na co najmniej cztery godziny.

Gdy będziesz gotowy, usuń macierz zewnątrzkomórkową, a następnie nałóż kulki w 1,5 mililitra podłoża na powierzchnię MEA, upewniając się, że kulki są umieszczone na górze układu elektrod. Pozostawić do przylegania na dwa dni. Aby zmierzyć aktywność elektryczną kul neuronowych, umieść MEA na stoliku głowy o kontrolowanej temperaturze.