Rejestrowanie odpowiedzi synaptycznych CA3-CA1 w wycinku hipokampa szczura

Umieść plasterek hipokampa szczura w konfiguracji do elektrofizjologii.

Umieść elektrody stymulujące w warstwie promieniowej regionu CA1 hipokampa, który odbiera projekcje aksonalne z neuronów CA3.

Umieść elektrodę rejestrującą w pobliżu dendrytów wierzchołkowych CA1.

Umieścić kolejną elektrodę rejestrującą w warstwie piramidalnej.

Po stymulacji projekcje aksonalne CA3 depolaryzują się i generują potencjały czynnościowe, uwalniając pobudzające neuroprzekaźniki.

Te neuroprzekaźniki wiążą się z postsynaptycznymi dendrytami wierzchołkowymi CA1, indukując napływ jonów dodatnich i depolaryzację błony, zwaną pobudzającym potencjałem postsynaptycznym lub EPSP.

Elektroda rejestrująca mierzy zsumowane EPSP z dendrytów wierzchołkowych — pola EPSP lub fEPSP. Po uzyskaniu stabilnych sygnałów fEPSP opuść elektrody i zrób krótką przerwę.

Zastosuj zakres intensywności stymulacji, aby określić zależność wejścia-wyjścia od nachylenia fEPSP, a następnie wybierz i zastosuj określoną intensywność w oparciu o nachylenie.

Druga elektroda rejestrująca mierzy połączone potencjały czynnościowe z ciał komórek neuronalnych CA1, generując skoki populacji.

W eksperymentach z tagowaniem i wychwytywaniem synapstycznym pod mikroskopem umieść dwie elektrody stymulujące w warstwie promienistej regionu CA1, aby stymulować włókna poboczne Schaffera i jedną elektrodę rejestrującą w wierzchołkowym regionie dendrytycznym CA1 w połowie drogi między elektrodami stymulującymi, aby zarejestrować odpowiedzi fEPSP.

Umieść kolejną elektrodę rejestrującą w warstwie piramidalnej, aby zarejestrować wzrost populacji. Gdy wszystkie elektrody dotkną warstwy, przeprowadź stymulację testową, aby upewnić się, że w obu wejściach można uzyskać odpowiedni sygnał EPSP w polu.

Po uzyskaniu odpowiedniego sygnału fEPSP ostrożnie opuść elektrody o około 200 mikronów dalej za pomocą precyzyjnych pokręteł ruchowych manipulatorów, a następnie odczekaj 20 minut, aż plasterek się zregeneruje. Następnie określ relację wejścia/wyjścia, mierząc nachylenie pola EPSP w zakresie natężeń prądu od 20 mikroamperów do 100 mikroamperów.

Następnie, dla każdego wejścia, ustaw intensywność stymulacji, która wywołuje 40% maksymalnego nachylenia pola EPSP jako stałe bodźce przez cały eksperyment. Po 15 do 20 minutach rozpocznij nagrywanie linii bazowej.

Zapisz stabilną linię bazową co najmniej 30 do 60 minut przed indukcją LTP/LTD.