Rejestrowanie pobudzających potencjałów postsynaptycznych pola neuronalnego w ostrych wycinkach hipokampa

Umieść wycinek hipokampa myszy w komorze zanurzeniowej wypełnionej sztucznym płynem mózgowo-rdzeniowym lub aCSF.

Zabezpiecz plasterek siatką przytrzymującą, aby zapobiec przemieszczaniu się.

Stale krąży natleniony aCSF, aby utrzymać żywotność neuronów.

Zainstaluj elektrody odniesienia, aby zapewnić stabilne napięcie odniesienia.

Umieść elektrody stymulacyjne i rejestrujące w jednej linii i równolegle do warstwy piramidalnej CA1 hipokampa.

Zastosuj impulsy elektryczne.

Impulsy te stymulują neurony, powodując otwarcie kanałów jonowych bramkowanych napięciem, umożliwiając przepływ jonów dodatnich i wyzwalając potencjały czynnościowe.

Te potencjały czynnościowe rozchodzą się wzdłuż neuronów i indukują uwalnianie neuroprzekaźników pobudzających do szczeliny synaptycznej.

Neuroprzekaźniki wiążą się ze specyficznymi receptorami na neuronach postsynaptycznych, umożliwiając napływ jonów dodatnich i powodując zmianę potencjału błonowego - pobudzającego potencjału postsynaptycznego lub EPSP.

Elektroda rejestrująca mierzy EPSP na podstawie populacji neuronów w regionie zapisu — polu EPSP.

Namocz na kilka minut mały kawałek papieru do czyszczenia soczewek i nylonową siatkę przymocowaną do platynowego drutu w kształcie litery U w komorze zanurzeniowej. Następnie usuń platynowy drut w kształcie litery U. Wyłącz recykling i połóż plasterek na papierze do czyszczenia obiektywów. Następnie natychmiast umieść siatkę przytrzymującą plasterki na wierzchu plasterka.

Włącz pompę i pozwól plasterkowi zrównoważyć się przez 30 minut bez zanurzania obiektywu w ACSF. W międzyczasie napełnij elektrodę rejestrującą ACSF i zamontuj ją w uchwycie na pipety.

Następnie umieść testowaną elektrodę stymulacji wolframowej z izolacją epoksydową w uchwycie manipulatora, a przewód odniesienia w komorze plastora. Dodaj drugą elektrodę odniesienia do komory i podłącz ją do gniazda odniesienia stopnia głowicy elektrody rejestrującej.

W oprogramowaniu sterującym wzmacniaczem kliknij pole Zero-clamp Mode, a następnie kliknij dwukrotnie pole Output Gain List (Lista wzmocnień wyjściowych). Wybierz przyrost równy 100. Kliknij dwukrotnie pole filtra górnoprzepustowego bessel. Wybierz 3 kiloherce i kliknij dwukrotnie pole listy filtrów dolnoprzepustowych AC, aby wybrać 0,1 herca.

W oprogramowaniu do nagrywania kliknij Acquire Open Protocol. Wybierz protokół, który ma ustawienia pozwalające na stymulację epizodyczną i digitalizację wzmocnionych potencjałów przy 10 do 20 kilohercach przez 50 do 100 milisekund, a który automatycznie uruchamia izolator bodźca 10 milisekund po rozpoczęciu nagrania epizodycznego.

Umieść elektrody stymulacyjne i rejestrujące w linii i równolegle do warstwy piramidalnej. Następnie kliknij Uzyskaj protokół edycji i wybierz kartę Wyzwalacz w wyskakującym okienku. Kliknij pole Trigger Source (Źródło wyzwalaczy) i wybierz Spację jako źródło wyzwalacza. Następnie kliknij przycisk OK i kliknij przycisk Nagraj, aby rozpocząć pobieranie.

W oprogramowaniu izolatora bodźców kliknij pole kontroli napięcia i wprowadź zero. Kliknij przycisk Pobierz. Następnie kliknij okno Oprogramowanie do nagrywania i naciśnij spację. Powtórz ten cykl, wprowadzając sekwencyjnie wartości od 1 000 do 8 000. Skoreluj siłę stymulacji z wartościami nachylenia FEPSP i określ siłę stymulacji wymaganą do uzyskania 40% maksymalnego nachylenia FEPSP. Kliknij pole Kontrola napięcia i wprowadź określoną wartość. Następnie kliknij przycisk Pobierz.

W oprogramowaniu do nagrywania kliknij przycisk Zatrzymaj, a następnie menu Pobierz. Kliknij Edytuj protokół i wybierz zakładkę Wyzwalacz w wyskakującym okienku. Następnie kliknij pole Źródło wyzwalacza i wybierz Wewnętrzny zegar jako źródło wyzwalacza. Kliknij przycisk OK, a następnie przycisk Nagraj, który rozpoczyna automatyczne rejestrowanie potencjałów pola co 60 sekund. Kliknij przycisk Stop po 30 do 60 minutach.

W oprogramowaniu do nagrywania kliknij opcję Acquire Open Protocol (Uzyskaj otwarty protokół) i wybierz ten sam protokół, co nagranie bazowe. Kliknij przycisk OK, a następnie kliknij przycisk Nagraj. Kontynuuj automatyczne uruchamianie nagrań potencjału terenowego przez dwie do czterech godzin. Po zakończeniu kliknij przycisk Zatrzymaj, aby zakończyć nagrywanie.