Ekstrakcja białek z komórek neuronalnych

0 wyświetleń1:58 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weź hodowlę komórkową zawierającą neuronalne komórki rakowe przyczepione do szkiełka nakrywkowego i utrzymuj ją w niskich temperaturach.

Usunąć pożywkę hodowlaną i kilkakrotnie przemyć komórki zimnym buforem fosforanowym w celu wyeliminowania pozostałej pożywki.

Dodać bufor do lizy zawierający niskie stężenie niejonowego detergentu i inhibitorów proteazy.

Niejonowy detergent przerywa błonę komórkową, inicjując lizę.

Tymczasem inhibitory proteazy blokują komórkowe enzymy proteolityczne, chroniąc białka przed degradacją enzymatyczną.

Następnie użyj skrobaka do komórek, aby usunąć częściowo zlizowane komórki ze szkiełka nakrywkowego.

Przenieść zawartość do probówki zawierającej bufor do lizy.

W niskich temperaturach użyj homogenizatora do mechanicznej lizy komórek, zapewniając całkowitą lizę komórek i uwolnienie białka.

Odwirować lizat komórkowy.

Zebrać sklarowany osad do świeżej probówki.

Wyekstrahowane białka z neuronalnych komórek nowotworowych są teraz gotowe do dalszej analizy.

W celu walidacji ekspresji białka, 48 godzin po transfekcji umieść szalki hodowlane na lodzie i umyj komórki dwa razy PBS. Potraktuj komórki w każdym naczyniu 200 do 400 mikrolitrami buforu do lizy i użyj skrobaka do komórek, aby usunąć komórki z szkiełek nakrywkowych.

Przenieś oderwane komórki z każdej płytki do oddzielnych probówek mikrowirówek i dalej dysocjuj komórki za pomocą homogenizatora pod lodem. Po jednej minucie zdegranulowane kawałki komórek osadzają się przez odwirowanie.

10:37

Połączone ekstrakcje nukleotydów i białek w Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:07

Ekstrakcja i oczyszczanie białka FAHD1 z nerki świń i wątroby myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:58

Izolacja jąder neuronalnych z ludzkiej pośmiertnej tkanki mózgowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:51

Izolacja i hodowla embrionalnych komórek nerwowych szczura: szybki protokół

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:38

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji neuronów ze zróżnicowanych ludzkich komórek neuroprogenitorowych w hodowli

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:29

Symulacja neuroplastyczności trzustki: test plastyczności podwójnych neuronów in vitro

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:51

Konsensus białka pochodzenia mózgowego, protokół ekstrakcji do badania ludzkiego i mysiego proteomu mózgu przy użyciu immunoblottingu zarówno 2D-DIGE, jak i Mini 2DE

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:49

Izolacja i hodowla neuronów rdzenia kręgowego od nowonarodzonych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:39

Identyfikacja markerów powierzchniowych pierwotnych nerwowych komórek macierzystych i progenitorowych poprzez znakowanie metaboliczne sialoglikanu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:39

Oczyszczanie i identyfikacja białek specyficznych dla typu komórki ze złożonych tkanek przy użyciu zmutowanej linii myszy syntetazy tRNA metioniny

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026