JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:04 min. • July 8th, 2025
Zacznij od chemicznie utrwalonych torów Drosophila typu dzikiego i transgenicznego w buforze.
W transgenicznych klatkach piersiowych połączenia nerwowo-mięśniowe mięśni podłużnych grzbietu zawierają neurony, które wyrażają zmutowane białko indukujące neurodegenerację.
Usuń bufor i błyskawicznie zamroź klatkę piersiową, aby zapobiec uszkodzeniu tkanek podczas bisekcji.
Dodaj świeży bufor i przenieś klatkę piersiową do naczyń preparacyjnych.
Ustaw klatkę piersiową brzuszną stroną do góry i usuń skupiska komórek nerwowych, aby odsłonić linię środkową.
Przetnij na pół wzdłuż linii środkowej, aby uzyskać półkrwi.
Usuń nadmiar tkanki.
Inkubuj półkrwi w buforze blokującym, aby przepuszczalnie błony i zapobiec wiązaniu się niespecyficznych przeciwciał.
Dodaj przeciwciała sprzężone z fluoroforem skierowane przeciwko glikoproteinie ulegającej ekspresji w neuronach NMJ i włóknach aktyny mięśniowej.
Usuń niezwiązane przeciwciała.
Ułóż półwody na szkiełku mostkowym, dodaj podłoże montażowe i zamontuj tkanki.
Wizualizacja pod mikroskopem.
W porównaniu z typem dzikim, mutanty wykazują zmniejszone zabarwienie neuronów, co wskazuje na neurodegenerację, podczas gdy mięśnie wykazują nienaruszoną fluo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych