JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 6:37 min. • May 29th, 2025
Przymocuj znieczuloną mysz z oknem czaszkowym nad jej korą ruchową na bieżni.
Mysz wykazuje ekspresję reportera kinazy białkowej A w neuronach korowych.
Umieść bieżnię pod dwufotonowym obiektywem FLIM.
Dodaj kroplę wody między obiektywem a oknem czaszki.
Pozwól myszy się obudzić i zaaklimatyzować na bieżni.
Korzystając z oświetlenia w jasnym polu, zlokalizuj obszar obrazowania. Zamknij obudowę mikroskopu, aby zablokować światło zewnętrzne.
Ustaw parametry obrazowania, zainicjuj obrót bieżni w celu wywołania lokomocji i rozpocznij obrazowanie.
Wymuszona lokomocja aktywuje PKA, który fosforyluje reportera, zbliżając do siebie fluorofory dawcy i akceptora.
Mikroskop kieruje laserem na podczerwień, pobudzając dawcę do przekazania energii do akceptora, skracając czas życia fluorescencji dawcy.
Kiedy lokomocja ustaje, PKA i reporter wracają do swoich stanów nieaktywnych, zmniejszając transfer energii i wydłużając czas życia fluorescencji dawcy.
Przeanalizuj obrazy, aby porównać poziomy PKA w korze mózgowej podczas odpoczynku i lokomocji.
Co najmniej dwa tygodnie po zainstalowaniu okna czaszkowego ustaw długość fali lasera wzbudzenia dwufotonowego na 960 nanometrów i potwierdź brak reakcji na szc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych