Obrazowanie czasu życia fluorescencji agregacji białka PolyQ w neuronach Caenorhabditis elegans

Zacznij od znieczulonych, dopasowanych do wieku robaków kontrolnych i opiekuńczych z niedoborem Caenorhabditis elegans. Obie

grupy wyrażają znakowane fluoroforem białka polyQ w swoich neuronach, które są podatne na nieprawidłowe fałdowanie.

U robaków kontrolnych białka opiekuńcze ograniczają nieprawidłowo sfałdowaną agregację polyQ, podczas gdy u robaków z niedoborem białka opiekuńczego nieprawidłowo sfałdowany polyQ łatwo tworzy agregaty.

Umieść szkiełko kontrolne na stoliku mikroskopu konfokalnego do mikroskopii obrazowania fluorescencji (FLIM).

Oświetl robaki za pomocą lasera impulsowego.

Laser wzbudza fluorofor, który emituje foton, gdy powraca do stanu podstawowego.

FLIM mierzy czas życia fluorescencji - czas, przez jaki fluorofor pozostaje w stanie wzbudzonym.

U robaków z niedoborem białka opiekuńczego agregacja polyQ grupuje fluorofory, promując transfer energii między sąsiednimi fluoroforami zamiast emisji fotonów, skracając w ten sposób czas życia fluorescencji.

Oprogramowanie FLIM przetwarza te okresy życia w celu wygenerowania map oznaczonych kolorami, umożliwiając wizualizację agregacji.

Skrócony czas życia fluorescencji u robaków z niedoborem białka opiekuńczego, w porów