Co to jest splot chłodzący?

Splot chłodzący to sieć komórek w komorach mózgu, odpowiedzialna za produkcję płynu mózgowo-rdzeniowego.

Dlaczego fiksacja jest ważna w przygotowaniu próbki?

Fiksacja zachowuje strukturę komórkową i zapobiega degradacji podczas kolejnych etapów przetwarzania.

Jaką rolę odgrywa tetrotlenek osmu w protokole?

Tetrotlenek osmu wiąże się z lipidami błony komórkowej, stabilizując błony dla lepszego obrazowania.

Jak odwadnianie wpływa na próbki tkankowe?

Odwadnianie zapobiega zniekształceniu struktury tkanki podczas obrazowania poprzez usunięcie zawartości wody.

Jaki jest cel powlekania próbki platyną?

Warstwa platyny rozprasza elektrony podczas SEM, zapobiegając nagromadzeniu ładunku i minimalizując artefakty obrazowania.

Wizualizacja splotu naczyniówkowego mózgu myszy za pomocą skaningowej mikroskopii elektronowej

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weź splot naczyniówkowy z mózgu myszy w koszu na próbki.

Tkanka, znajdująca się w komorach mózgu, zawiera warstwę komórek nabłonkowych z mikrokosmkami na ich wierzchołkowej powierzchni.

Inkubuj tkankę w roztworze utrwalającym, aby zachować jej architekturę komórkową.

Przemyć buforem, aby usunąć nadmiar utrwalacza i ustabilizować pH.

Inkubuj tkankę z tetratlenkiem osmu, który wiąże się z lipidami błony komórkowej, zachowując stabilność błony, a następnie spłucz nadmiar odczynnika.

Odwodnić tkankę za pomocą zwiększającego się stężenia alkoholu, aby zapobiec zniekształceniu tkanek podczas obrazowania.

Wysusz chusteczkę, przymocuj ją do uchwytu próbki pokrytego węglem, a następnie pokryj ją przewodzącą warstwą platyny.

Za pomocą skaningowej mikroskopii elektronowej skoncentruj wiązkę elektronów na powierzchni. Warstwa platyny rozprasza elektrony, zapobiegając gromadzeniu się ładunku i minimalizując artefakty obrazowania.

Detektor wychwytuje elektrony rozpraszane wstecznie z powierzchni, tworząc obraz tkanki wykazującej komórki nabłonkowe z mikrokosmkami.

Aby przygotować próbkę do SEM, przenieś świeżo wyizolowany splot naczyniówkowy do świeżo przygotowanego roztworu utrwalającego i inkubuj przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Po zakończeniu przemyj próbkę trzykrotnie, używając od 3 do 5 mililitrów 0,1-molowego buforu kakodylanu sodu przez pięć minut każdy.

Po utrwaleniu próbek w 3 do 5 mililitrach 2% tetratlenku osmu w 0,1-molowym buforze kakodylanu sodu przez 30 minut. Następnie umyj próbki trzy razy przez pięć minut każda, używając od 3 do 5 mililitrów ultraczystej wody. Następnie odwodnić próbki w rosnącej serii lodowatych stężeń alkoholu etylowego w ciągu 15 minut na roztwór alkoholu etylowego. Użyj osuszacza w punkcie krytycznym, aby prawidłowo wysuszyć próbkę. Ostrożnie umieść próbkę na mocowaniu próbki za pomocą naklejki węglowej i wizualizuj próbki splotu naczyniówkowego za pomocą SEM.