Obrazowanie subkomórkowej dynamiki wapnia w neuronach Caenorhabditis elegans

Weź dwa oddzielne transgeniczne szczepy Caenorhabditis elegans na szkiełkach z podkładkami agarowymi. Klocki zawierają roztwór do toczenia z czynnikiem paraliżującym, który minimalizuje ruch.

Brzuszny rdzeń nerwowy robaków lub VNC zawiera pobudzające interneurony, które wyrażają cytoplazmatyczne wskaźniki wapnia w jednym szczepie i mitochondrialne wskaźniki wapnia w drugim.

Umieść szkiełko nakrywkowe, aby zwinąć robaki, ustawiając VNC do wizualizacji, a następnie umieść je pod mikroskopem fluorescencyjnym.

Użyj światła widzialnego, aby zlokalizować robaki, a następnie przełącz się w tryb fluorescencji.

W neuronach spoczynkowych niski wewnątrzkomórkowy poziom wapnia utrzymuje wskaźniki niezwiązane, co powoduje słabą fluorescencję.

Spontaniczna aktywność neuronalna otwiera kanały wapniowe bramkowane napięciem, umożliwiając napływ wapnia.

W szczepie ze wskaźnikami cytoplazmatycznymi wapń wiąże się ze wskaźnikami, wzmacniając fluorescencję cytoplazmatyczną.

Nadmiar cytoplazmatycznego wapnia dostaje się do mitochondriów przez kanały. W szczepie ze wskaźnikami mitochondrialnymi wiązanie wapnia zwiększa fluorescencję mitochondriów.

Zobrazuj neurony w obu szczepach, aby monitorować subkomórkową dy