Name: Warunkowanie niedokrwienne kończyn na odległość: technika neuroprotekcyjna u gryzoni (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-02T10:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Poznaj metodę warunkowania niedokrwiennego kończyn na odległość u szczurów w celu ochrony siatkówki przed uszkodzeniem świetlnym. Technika ta aktywuje endogenne mechanizmy neuroprotekcyjne poprzez cykle niedokrwienia i reperfuzyjne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autor jest wdzięczny za pomoc Pani Sharon Spana (University of Sydney) w monitorowaniu, obchodzeniu się i eksperymentowaniu z gryzoniami. Autor pragnie podziękować prof. Jonathanowi Stone'owi i dr. Danowi Johnstone'owi za pomoc w przygotowaniu tego manuskryptu. Wsparcie w finansowaniu studiów doktoranckich zostało zapewnione przez Uniwersytet w Sydney i Australijskie Centrum Doskonałości w Wizji.

Oświadczenie etyczne: Protokół jest zgodny z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami Uniwersytetu w Sydney, AEC #5657. Znieczulenie zostało zatwierdzone przez komisję etyczną ds. zwierząt (University of Sydney, AEC #5657).
1. Przygotowanie sprzętu
<ol>
	<li>Korzystaj ze śledzenia temperatury skóry w czasie rzeczywistym. Włącz komputer i sprzęt do akwizycji danych.</li>
	<li>Otwórz oprogramowanie do rejestracji temperatury i ustaw temperaturę w zakresie 30-35 °C, a częstotliwość próbkowania co 100 ms.</li>
	<li>Opcjonalnie: Włóż termometr doodbytniczy, aby upewnić się, że temperatura rdzenia pozostaje stabilna na poziomie 37,5 °C.</li>
</ol>
2. Kalibracja ręcznego ciśnieniomierza
<ol>
	<li>Podłącz mankiet noworodka do ciśnieniomierza. Użyj mankietu w rozmiarze 2 dla szczura o wadze 250-550 g. Do podłączenia rurki mankietu do ciśnieniomierza może być konieczny adapter</li>.
	<li>Opróżnij mankiet, poluzowując zawór spustowy powietrza lub odłączając rurkę mankietu od adaptera. Upewnij się, że w rurce nie ma ciśnienia, a igła manometru spoczywa na zerze wewnątrz owalu/prostokąta.</li>
	<li>Sprawdź ciśnienie między rurką, manometrem i mankietem. Napompuj mankiet delikatnymi pompkami żarówki do pompowania, aż na manometrze pojawi się 100 mmHg. Upewnij się, że ciśnienie pozostaje stałe. Opróżnij mankiet, powoli otwierając wartość uwalniania powietrza.</li>
</ol>
3. Przygotowanie zwierząt
Uwaga: Zwierzęta, które mają zostać zranione światłem, wymagają adaptacji do ciemności w noc poprzedzającą zdalne niedokrwienie. Zwierzęta poddawane lekkim uszkodzeniom wymagają ciemnego chowu (12 godzin cyklu światło: ciemność (5 luksów))
<ol>
	<li>Wykonaj zdalne niedokrwienie u obudzonych lub znieczulonych gryzoni. Upewnij się, że zwierzęta mają zdrowe napięcie mięśniowe. Upewnij się tego, ściskając górną tylną kończynę, aby upewnić się, że obecne są odpowiednie mięśnie. Ochrona przed lekkimi urazami wywołana przez RIP została przetestowana na szczurach prowadzących siedzący tryb życia do 6 miesiąca życia.</li>
	<li>Znieczulony preparat do RIP
	<ol>
		<li>Szczurom należy wstrzyknąć dootrzewnowe 60 mg/kg ketaminy i 5 mg/kg ksylazyny. Sprawdź głębokość znieczulenia, prostując nogę i szczypiąc skórę na spodniej stronie stopy. Zwierzę nie ma odruchu, jeśli jest głęboko znieczulone. Stosuj sztuczne łzy, aby uniknąć wysuszenia rogówki podczas znieczulenia.</li>
		<li>Umieść szczury na poduszce grzewczej lub rurki podgrzewacza wody obiegowej, aby utrzymać stałą temperaturę ciała 37.5 °C. Ustaw szczura w pozycji leżącej z poduszkami stóp kończyn dolnych skierowanymi do góry. Zarówno prawa, jak i lewa kończyna może ulec odległemu niedokrwieniu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie Awake do RIP Uwaga: Eksperymenty na zwierzętach Awake wymagają dwóch osób. Jedna osoba krępuje zwierzę, a druga osoba obsługuje ręczny ciśnieniomierz. Eksperymentatorzy muszą być pewni, że wykonają procedurę, ponieważ unieruchomienie zwiększa ryzyko obrażeń osób obsługujących. Szczury poddawane zdalnej niedokrwieniu muszą być przyzwyczajone do ręcznego unieruchamiania. W zależności od intuicyjnych wytycznych, ręczne unieruchomienie powinno być postępowane od 30 sEC do maksymalnie 5 minut w ciągu kilku tygodni. Płochliwe zwierzęta, które nie przyzwyczajają się do ręcznego krępowania, powinny być wyłączone z eksperymentów na jawie. Wreszcie, ręczne unieruchomienie może powodować stres (i potencjalnie wprowadzać zakłócenia do badania) u zwierząt, a w celu dokładnej interpretacji wyników badania RIP należy zastosować pozorowaną kohortę (założenie mankietu bez stanu zapalnego).
	<ol>
		<li>Pokrój ręcznik na kawałek o wymiarach 15 cm x 30-50 cm i ułóż krótszą krawędź prostopadle do kręgosłupa szczura, zakrywając głowę do górnej części kończyn tylnych.</li>
		<li>Wsuń ciasno krótszą krawędź pod tułów szczura i zacznij owijać szczura pozostałą długą krawędzią ręcznika. Zabezpiecz owinięte zwierzę pod pachą w pozycji leżącej. Jeśli szczur jest trzymany pod lewym ramieniem, uwolnij prawą kończynę szczura z ręcznika.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Zastosowanie sondy temperatury skóry
<ol>
	<li>Wyprostuj nogę szczura, który ma ulec niedokrwieniu i umieść sondę skórną na opuszku stopy. Ustaw sondę skóry tak, aby zmaksymalizować kontakt między sondą temperatury a skórą. Mocno wepchnij sondę w podnóżek i przymocuj sondę taśmą papierową.</li>
	<li>Sprawdź położenie sondy skórnej, śledząc temperaturę w oprogramowaniu do rejestrowania temperatury. Upewnij się, że temperatura skóry wynosi od 30 do 34 °C i pozostaje stabilna. Śledź temperaturę skóry przez 1-2 minuty. Wyreguluj sondę skóry, jeśli temperatura jest niestabilna lub niższa niż 30 °C.</li>
</ol>
5. Zdalne niedokrwienie
<ol>
	<li>Opróżnij mankiet i upewnij się, że zawór ciśnienia powietrza jest zamknięty. Wyprostuj nogę i luźno owiń mankiet na górnej kończynie tylnej. Użyj palca wskazującego i kciuka, aby wyprostować nogę i dolne palce, aby utrzymać poluzowany mankiet na miejscu.</li>
	<li>Zwiększ ciśnienie w mankiecie znieczulonego zwierzęcia do 160 mmHg, a u zwierząt obudzonych zwiększ ciśnienie w mankiecie do 180 mmHg. 
	Uwaga: Znieczulone ciśnienie krwi szczurów waha się od 120-140 mmHg i wzrasta do 160 mmHg, gdy są przytomne. Rozpocznij rejestrację temperatury timera i stopy po osiągnięciu prawidłowego ciśnienia. 
	Uwaga: Temperatura stopy powinna spaść o 2 °C po 5 minutach stałego nacisku.</li>
	<li>Utrzymuj pozycję mankietu nad "kolanem" zwierzęcia przez cały czas niedokrwienia. Ciśnienie w mankietu zacznie spadać po kilku minutach lub jeśli kończyna szczura się porusza.</li>
	<li>Wielokrotnie pompuj bańkę do pompowania w krótkich seriach, aby utrzymać pożądane ciśnienie w mankiecie, powtarzalna krótka seria pompowania</li>
	<li>Zdalne niedokrwienie może być dostarczane w sposób ciągły od 5 do 15 minut. Protokół reperfuzji niedokrwiennej obejmuje 2 okresy 5-minutowego niedokrwienia z 5-minutową reperfuzją.</li>
	<li>Zmniejsz ciśnienie w mankiecie, poluzowując zawór ciśnienia powietrza. Sprawdź zmianę temperatury w trakcie protokołu niedokrwienia. Zwolnij mankiet.</li>
	<li>Kontynuuj eksperymentowanie z kontuzjami. Zwierzęta pod wpływem znieczulenia będą musiały zostać umieszczone na poduszce grzewczej. Kontynuuj monitorowanie zwierząt do czasu rozpoczęcia chodzenia. Zwierzęta nie mogą być zwrócone do pomieszczeń przed chodzeniem.</li>
</ol>
6. Lekki uraz - model zwyrodnienia siatkówki
<ol>
	<li>Ciemne zwierzęta przystosowują się przez noc (12-15 godzin). Bezpośrednio po kondycjonowaniu na zdalne niedokrwienie lub pozorowane zdalne niedokrwienie (unieruchomienie zwierząt) należy umieścić zwierzęta w pomieszczeniach z pleksiglasu z jedzeniem i wodą.</li>
	<li>Włącz oświetlenie fluorescencyjne (1 000 luksów) znajdujące się nad obudową z pleksiglasu o godzinie 9 rano na 24 godziny. Po ekspozycji na światło przywróć zwierzęta do przyciemnionego oświetlenia cyklicznego na 7 dni. </li>
</ol>
7. Zabiegi po zdalnym niedokrwieniu
<ol>
	<li>Ocena wzroku za pomocą elektroretinogramu (ERG): 
	Uwaga: Konfiguracja ERG i protokół flash były zgodne z Brandli i Stone26.
	<ol>
		<li>Ciemne zwierzęta przystosowują się przez noc (12-15 godzin). W słabym czerwonym świetle znieczulić zwierzęta poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie ketaminy i ksylazyny (odpowiednio 60 mg/kg i 5 mg/kg). Rozszerzenie źrenic (siarczan atropiny 1,0%), znieczulenie rogówki (proksymetakaina 0,5%).</li>
		<li>Krople do oczu nawilżające rogówkę (polimer karbomerowy) należy natychmiast nałożyć na rogówkę. Nakładaj żel pod oczy w odstępach 20 minut, aby utrzymać nawilżenie rogówki.</li>
		<li>Narysuj luźno zawiązaną nić wokół gałki ocznej, aby pomóc w stabilnym zapisie ERG. Monitoruj temperaturę za pomocą sondy doodbytniczej i utrzymuj temperaturę ciała zwierzęcia na poziomie 37-37,5 °C.</li>
		<li>Umieść głowicę w kuli całkującej Ganzfelda. 
		Uwaga: Ganzfeld to w pełni programowalny bodziec świetlny, który dostarcza równomierne błyski z diod LED do oka.</li>
		<li>Zapisz elektroretinogram za pomocą wykonanej na zamówienie platynowej elektrody dodatniej o średnicy 4 mm, lekko dotykającej rogówki, oraz elektrody osadkowej Ag/AgCl o średnicy 2 mm wprowadzonej do jamy ustnej. Odwołaj obie elektrody do igły ze stali nierdzewnej wprowadzonej podskórnie do zadu.</li>
		<li>Nagrywaj sygnały z ustawieniem pasma przepustowego 0,3-1,000 Hz (-3 dB), z szybkością akwizycji 2 kHz (AD Instruments). Po ustaleniu stabilnego zapisu ERG, przed rozpoczęciem zapisów zwierzę należy poddać je 10-minutowej adaptacji do ciemności.</li>
		<li>Postępuj zgodnie z protokołem flash, jak opisano wcześniej przez Brandli i Stone26.
		<ol>
			<li>Zaprogramuj czas trwania błysku (użyliśmy błysków o czasie trwania 1-2 ms) i ustaw jego intensywność na -4,4 do 2,0 log scot cd.s.m-2. Użyj jasnych błysków (2.0 log scot cd.s.m-2, 1 ms), aby zmierzyć funkcję siatkówki. W tym badaniu jest to porównanie między kontrolą, lekkim urazem i lekkim urazem z RIP.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
8. Test TUNEL
<ol>
	<li>Eutanazja zwierząt przez dootrzewnowe wstrzyknięcie przedawkowania fenobarbitalu (100 mg/kg). Wyłuszczyć oczy i utrwalić w 4% paraformaldehydu.</li>
	<li>Przemyj oczy w PBS przed cyroochroną oczu przez noc w sacharozie 30% (w/v). Osadź oczy w związku OCT i pokrój na odcinki strzałkowe 20 μm za pomocą kriostatu.</li>
	<li>Wykonaj test TUNEL na skrawkach siatkówki z barwieniem DAPI zgodnie z protokołem Maslima i wsp.27 Rozdział 27</li>
	<li>Użyj mikroskopii fluorescencyjnej do zliczania TUNEL siatkówki. Komórki TUNEL zarejestrowano z zewnętrznej warstwy jądrowej (ONL); Najbardziej zewnętrzna warstwa siatkówki, która zawiera jądra fotoreceptorów. W tym badaniu liczbę TUNEL wykonano w trzech egzemplarzach dla każdego oka, po 5 oczu dla każdej grupy leczonej.</li>
	<li>Użyj jednokierunkowej ANOVA do statystycznego porównania grupowych średnich kontroli, lekkich obrażeń i lekkich obrażeń + szczurów RIP.</li>
</ol>

<ol><li>Meller, R., Simon, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+to+Ischemia-an+Increasingly+Complex+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Tolerance to Ischemia-an Increasingly Complex Biology.</a> Translational Stroke Research. 4 (1), 40-50 (2013).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+delayed+remote+limb+ischemic+postconditioning%3A+role+of+mitochondrial+K-ATP+channels+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemic+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Protective effect of delayed remote limb ischemic postconditioning: role of mitochondrial K-ATP channels in a rat model of focal cerebral ischemic reperfusion injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 32 (5), 851-859 (2012).</li>
<li>Harkin, D. W., D'Sa, A., McCallion, K., Hoper, M., Campbell, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+preconditioning+before+lower+limb+ischemia-reperfusion+protects+against+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ischemic preconditioning before lower limb ischemia-reperfusion protects against acute lung injury.</a> Journal of Vascular Surgery. 35 (6), 1264-1273 (2002).</li>
<li>Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+ischemia+-A+delay+of+lethal+cell+injury+in+ischemic+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with ischemia -A delay of lethal cell injury in ischemic myocardium.</a> Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).</li>
<li>Barone, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+preconditioning+and+brain+tolerance+-+Temporal+histological+and+functional+outcomes%2C+protein+synthesis+requirement%2C+and+interleukin-1+receptor+antagonist+and+early+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Ischemic preconditioning and brain tolerance - Temporal histological and functional outcomes, protein synthesis requirement, and interleukin-1 receptor antagonist and early gene expression.</a> Stroke. 29 (9), 1937-1950 (1998).</li>
<li>Roth, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+provides+complete+protection+against+retinal+ischemic+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Preconditioning provides complete protection against retinal ischemic injury in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 39 (5), 777-785 (1998).</li>
<li>Wegener, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+ischemic+attacks+before+ischemic+stroke%3A+Preconditioning+the+human+brain%3F+A+multicenter+magnetic+resonance+imaging+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Transient ischemic attacks before ischemic stroke: Preconditioning the human brain? A multicenter magnetic resonance imaging study.</a> Stroke. 35 (3), 616-621 (2004).</li>
<li>Weih, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+stroke+severity+after+prodromal+TIA+-+A+role+for+ischemic+tolerance+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Attenuated stroke severity after prodromal TIA - A role for ischemic tolerance in the brain.</a> Stroke. 30 (9), 1851-1854 (1999).</li>
<li>Casson, R. J., Wood, J. P. M., Melena, J., Chidlow, G., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+ischemic+preconditioning+on+light-induced+photoreceptor+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The effect of ischemic preconditioning on light-induced photoreceptor injury.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44 (3), 1348-1354 (2003).</li>
<li>Ettaiche, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP-sensitive+potassium+channels+%28K-ATP%29+in+retina%3A+a+key+role+for+delayed+ischemic+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">ATP-sensitive potassium channels (K-ATP) in retina: a key role for delayed ischemic tolerance.</a> Brain Research. 890 (1), 118-129 (2001).</li>
<li>Gross, E. R., Gross, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligand+triggers+of+classical+preconditioning+and+postconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Ligand triggers of classical preconditioning and postconditioning.</a> Cardiovascular Research. 70 (2), 212-221 (2006).</li>
<li>Heurteaux, C., Lauritzen, I., Widmann, C., Lazdunski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+adenosine%2C+adenosine-A1-receptors%2C+and+ATP-senstive+K%2B+channels+in+cerebral+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Essential role of adenosine, adenosine-A1-receptors, and ATP-senstive K+ channels in cerebral ischemic preconditioning.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (10), 4666-4670 (1995).</li>
<li>Dirnagl, U., Simon, R. P., Hallenbeck, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+tolerance+and+endogenous+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Ischemic tolerance and endogenous neuroprotection.</a> Trends in Neurosciences. 26 (5), 248-254 (2003).</li>
<li>Ren, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+ischemic+post-conditioning+reduced+brain+damage+in+experimental+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Remote ischemic post-conditioning reduced brain damage in experimental ischemia/reperfusion injury.</a> Neurol Res. 33 (5), 514-519 (2011).</li>
<li>Ren, C., Gao, X., Steinberg, G. K., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limb+remote-preconditioning+protects+against+focal+ischemia+in+rats+and+contradicts+the+dogma+of+therapeutic+time+windows+for+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Limb remote-preconditioning protects against focal ischemia in rats and contradicts the dogma of therapeutic time windows for preconditioning.</a> Neuroscience. 151 (4), 1099-1103 (2008).</li>
<li>Hu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+limb+remote+ischemic+preconditioning+contributes+neuroprotective+effects+via+activation+of+adenosine+A1+receptor+and+redox+status+after+transient+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive limb remote ischemic preconditioning contributes neuroprotective effects via activation of adenosine A1 receptor and redox status after transient focal cerebral ischemia in rats.</a> Brain Research. 1459, 81-90 (2012).</li>
<li>Jensen, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+Ischemic+Preconditioning+Protects+the+Brain+Against+Injury+After+Hypothermic+Circulatory+Arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Remote Ischemic Preconditioning Protects the Brain Against Injury After Hypothermic Circulatory Arrest.</a> Circulation. 123 (7), 714-721 (2011).</li>
<li>Kuntscher, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+preconditioning+by+brief+extremity+ischemia+before+flap+ischemia+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ischemic preconditioning by brief extremity ischemia before flap ischemia in a rat model.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 109 (7), 2398-2404 (2002).</li>
<li>Kharbanda, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+limb+ischemia+induces+remote+ischemic+preconditioning+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Transient limb ischemia induces remote ischemic preconditioning in vivo.</a> Circulation. 106 (23), 2881-2883 (2002).</li>
<li>Perl, W., Cucinell, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LOCAL+BLOOD+FLOW+IN+HUMAN+LEG+MUSCLE+MEASURED+BY+A+TRANSIENT+RESPONSE+THERMOELECTRIC+METHOD%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">LOCAL BLOOD FLOW IN HUMAN LEG MUSCLE MEASURED BY A TRANSIENT RESPONSE THERMOELECTRIC METHOD.</a> Biophysical Journal. 5 (2), 211-230 (1965).</li>
<li>Vuksanovic, V., Sheppard, L. W., Stefanovska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+relationship+between+level+of+blood+flow+and+skin+temperature+for+different+dynamics+of+temperature+change%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Nonlinear relationship between level of blood flow and skin temperature for different dynamics of temperature change.</a> Biophysical Journal. 94 (10), L78-L80 (2008).</li>
<li>Meng, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+limb+ischemic+preconditioning+prevents+recurrent+stroke+in+intracranial+arterial+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Upper limb ischemic preconditioning prevents recurrent stroke in intracranial arterial stenosis.</a> Neurology. 79 (18), 1853-1861 (2012).</li>
<li>Souza, M. V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hind+limb+ischemic+preconditioning+induces+an+anti-inflammatory+response+by+remote+organs+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Medical+and+Biological+Research%22%5BJournal%5D)">Hind limb ischemic preconditioning induces an anti-inflammatory response by remote organs in rats.</a> Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 42 (10), 921-929 (2009).</li>
<li>Hixson, F. P., Shafiroff, B. B., Werner, F. W., Palmer, A. K. DIGITAL TOURNIQUETS - A PRESSURE STUDY WITH CLINICAL RELEVANCE. Journal of Hand Surgery-American. 11A (6), 865-868 (1986).</li>
<li>Hamer, P. W., McGeachie, J. M., Davies, M. J., Grounds, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+Blue+Dye+as+an+in+vivo+marker+of+myofibre+damage%3A+optimising+parameters+for+detecting+initial+myofibre+membrane+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Evans Blue Dye as an in vivo marker of myofibre damage: optimising parameters for detecting initial myofibre membrane permeability.</a> Journal of Anatomy. 200 (1), 69-79 (2002).</li>
<li>Brandli, A., Stone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+ischemia+influences+the+responsiveness+of+the+retina%3A+observations+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthal+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Remote ischemia influences the responsiveness of the retina: observations in the rat.</a> Invest Ophthal Vis Sci. 55 (4), (2014).</li>
<li>Maslim, J., Valter, K., Egensperger, R., Hollander, H., Stone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+oxygen+during+a+critical+developmental+period+controls+the+death+and+survival+of+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Tissue oxygen during a critical developmental period controls the death and survival of photoreceptors.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 38 (9), 1667-1677 (1997).</li>
<li>Grimm, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1-induced+erythropoietin+in+the+hypoxic+retina+protects+against+light-induced+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">HIF-1-induced erythropoietin in the hypoxic retina protects against light-induced retinal degeneration.</a> Nature Medicine. 8 (7), 718-724 (2002).</li>
<li>Vander Heide, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinically+Useful+Cardioprotection%3A+Ischemic+Preconditioning+Then+and+Now%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Clinically Useful Cardioprotection: Ischemic Preconditioning Then and Now.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 16 (3-4), 251-254 (2011).</li>
<li>Zhou, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+Limb+Ischemic+Postconditioning+Protects+Against+Neonatal+Hypoxic-Ischemic+Brain+Injury+in+Rat+Pups+by+the+Opioid+Receptor%2FAkt+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Remote Limb Ischemic Postconditioning Protects Against Neonatal Hypoxic-Ischemic Brain Injury in Rat Pups by the Opioid Receptor/Akt Pathway.</a> Stroke. 42 (2), 439-444 (2011).</li>
<li>Hasegawa, J., Obara, T., Tanaka, K., Tachibana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+presynaptic+transporters+are+required+for+glutamate+removal+from+the+first+visual+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">High-density presynaptic transporters are required for glutamate removal from the first visual synapse.</a> Neuron. 50 (1), 63-74 (2006).</li>
<li>Kanoria, S., Jalan, R., Seifalian, A. M., Williams, R., Davidson, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocols+and+mechanisms+for+remote+ischemic+preconditioning%3A+A+novel+method+for+reducing+ischemia+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Protocols and mechanisms for remote ischemic preconditioning: A novel method for reducing ischemia reperfusion injury.</a> Transplantation. 84 (4), 445-458 (2007).</li>
<li>Maier, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+depth+and+duration+of+mild+hypothermia+in+a+focal+model+of+transient+cerebral+ischemia+-+Effects+on+neurologic+outcome%2C+infarct+size%2C+apoptosis%2C+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Optimal depth and duration of mild hypothermia in a focal model of transient cerebral ischemia - Effects on neurologic outcome, infarct size, apoptosis, and inflammation.</a> Stroke. 29 (10), 2171-2180 (1998).</li>
<li>Reith, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+temperature+in+acute+stroke%3A+Relation+to+stroke+severity%2C+infarct+size%2C+mortality%2C+and+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Body temperature in acute stroke: Relation to stroke severity, infarct size, mortality, and outcome.</a> Lancet. 347 (8999), 422-425 (1996).</li>
<li>Barbe, M. F., Tytell, M., Gower, D. J., Welch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HYPERTHERMIA+PROTECTS+AGAINST+LIGHT+DAMAGE+IN+THE+RAT+RETINA.+%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">HYPERTHERMIA PROTECTS AGAINST LIGHT DAMAGE IN THE RAT RETINA. </a> Science. 241 (4874), 1817-1820 (1988).</li>
<li>Wang, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+degradation+in+mouse+retina+after+a+transient+ischemia+and+protective+effect+of+hypothermia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurological+Research%22%5BJournal%5D)">Neuronal degradation in mouse retina after a transient ischemia and protective effect of hypothermia.</a> Neurological Research. 24 (7), 730-735 (2002).</li>
<li>Tonkovic-Capin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+cardioprotection+by+isoflurane%3A+role+of+K%28ATP%29+channels%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Delayed cardioprotection by isoflurane: role of K(ATP) channels.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 283 (1), H61-H68 (2002).</li>
<li>Pfenninger, E., Himmelseher, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+ketamine+on+a+cellular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesist%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of ketamine on a cellular level.</a> Anaesthesist. 46, S47-S54 (1997).</li>
<li>Hirose, K., Chan, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BLOCKADE+OF+GLUTAMATE+EXCITOTOXICITY+AND+ITS+CLINICAL-APPLICATIONS%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">BLOCKADE OF GLUTAMATE EXCITOTOXICITY AND ITS CLINICAL-APPLICATIONS.</a> Neurochemical Research. 18 (4), 479-483 (1993).</li>
<li>Welberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychiatric+disorders%3A+Ketamine+modifies+mood+through+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Psychiatric disorders: Ketamine modifies mood through mTOR.</a> Nature reviews. Neuroscience. 11 (10), 666(2010).</li>
<li>Garcia, L. S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+administration+of+ketamine+induces+antidepressant-like+effects+in+the+forced+swimming+test+and+increases+BDNF+levels+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neuro-Psychopharmacology+%26+Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Acute administration of ketamine induces antidepressant-like effects in the forced swimming test and increases BDNF levels in the rat hippocampus.</a> Progress in Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry. 32 (1), 140-144 (2008).</li>
<li>Wassle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+processing+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Parallel processing in the mammalian retina.</a> Nature Reviews Neuroscience. 5 (10), 747-757 (2004).</li>
<li>Hertle, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+analgesics+and+sedatives+on+the+occurrence+of+spreading+depolarizations+accompanying+acute+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Effect of analgesics and sedatives on the occurrence of spreading depolarizations accompanying acute brain injury.</a> Brain. 135, 2390-2398 (2012).</li>
</ol>

Autor nie ma nic do zdradzienia.

Niedokrwienie kończyn tylnych gryzoni udało się wywołać za pomocą ręcznego ciśnieniomierza i mankietu, zapewniając neuroprotekcję fotoreceptorom siatkówki. Odkrycie zgodne z kondycją niedokrwienną indukowało ochronę fotoreceptorów przed uszkodzeniem światłem9,28.
Zasadniczo, zdalne niedokrwienie powoduje krótkotrwały niedobór tlenu w tkankach. W związku z tym zdalne warunkowanie niedokrwienne ma wiele podobieństw do warunkowania niedokrwiennego lub alternatywnie nazywanego tolerancj...

Przeżywalność większości, być może wszystkich, tkanek w obliczu stresu metabolicznego może być poprawiona przez wcześniejsze kondycjonowanie z okresem subletalnego niedokrwienia1,2. Wstępne kondycjonowanie niedokrwienne (IP) w praktyce to narażenie tkanki na niedokrwienie subletalne, zanim tkanka doświadczy poważniejszych czynników stresogennych, takich jak późniejsze uszkodzenie niedokrwienne. W modelach zwierzęcych IP zapewnia uderzającą ochronę mózgu, siatkówki, serca i płuc3-6. Analogicznie, obserwacje u pacjentów po udarze wykazały związek między wcześniejszymi przemijającymi atakami niedokrwiennymi a lepszymi wynikami klinicznymi7,8. IP chroni również fotoreceptory siatkówki przed urazami nieniedokrwiennymi9.
Skuteczność IP w różnych tkankach i urazach sugeruje, że aktywuje ona wrodzony mechanizm przetrwania komórek, obecny we wszystkich tkankach. Sugeruje się, że wstępne kondycjonowanie niedokrwienne mięśnia sercowego ma działanie ochronne poprzez regulację w górę czynnika indukowanego hipoksją (HIF), o którym wiadomo, że reguluje wiele szlaków metabolicznych poprzez uwalnianie adenozyny lub otwarcie mitochondrialnych kanałów potasowych ATP10,11. Uwalnianie adenozyny i kanały potasowe ATP są zaangażowane w niedokrwienie mózgu, ale dotychczasowe badania nad neuroprotekcyjnemi mechanizmami warunkowania niedokrwiennego koncentrowały się na modyfikacjach szlaków antyekscytotoksycznych, antyapoptotycznych i przeciwzapalnych12,13. Ogólnie rzecz biorąc, wiedza na temat molekularnego procesu warunkowania niedokrwiennego w celu ochrony neuronów jest ograniczona.
Zdalne warunkowanie niedokrwienne próbuje warunkować odległe, krytycznie ważne organy (serce, mózg, płuca) poprzez generowanie niedokrwienia w mniej krytycznych tkankach. Wykazano, że zdalne kondycjonowanie niedokrwienne (RIP) przy użyciu kończyny tylnej ma działanie neuroprotekcyjne w modelach udaru14-17 u gryzoni. Opisana przez nas metoda zapewnia prosty, niezawodny i nieinwazyjny protokół indukcji RIP.
Zdecydowana większość protokołów RIP dotyczy kończyny tylnej, przypuszczalnie dlatego, że tętnica udowa znajdująca się w górnej kończynie tylnej może być łatwo zidentyfikowana i dostępna w celu chirurgicznego zaciśnięcia i założenia opaski uciskowej. W inwazyjnych badaniach niedokrwiennych kończyn w celu zbadania ochrony mózgu i skóry, niedokrwienie jest wywoływane przez oddzielenie tętnicy udowej od więzadeł pachwinowych i zaciśnięcie tętnicy udowej2,15,18.
Niedokrwienie wynikające z zaciśnięcia kończyny lub zaciśnięcia tętnicy udowej zostało potwierdzone przez zmiany w kończynie, w tym utratę pulsu, spadek natlenienia i spadek temperatury skóry. Zdalne niedokrwienie można potwierdzić utratą tętna za pomocą laserowego Dopplera lub ultrasonograficznego Dopplera17-19. Temperatura skóry może być stosowana jako alternatywa dla Dopplera, chociaż zależność jest nieliniowa20,21. Dokładne zapisy temperatury są powszechne w laboratoriach i można je łatwo włączyć do zdalnych badań niedokrwiennych.
Alternatywą dla operacji zaciskania kości udowej jest indukcja niedokrwienia za pomocą opaski uciskowej. Założenie opaski uciskowej powoduje niedokrwienie porównywalne do tego, które osiąga się przy zaciskaniu naczynia; Kutchner i wsp. Porównano inwazyjne zaciskanie tętnicy udowej z nieinwazyjną opaską uciskową i stwierdzono, że obie metody zatrzymały przepływ krwi do kończyny i zmniejszyły uszkodzenia skóry w modelu chirurgii plastycznej niedokrwienia płata skórnego18. Stwierdzono, że skucie nogi lub ramienia i podniesienie ciśnienia w mankiecie do poziomu powyżej skurczowego ciśnienia krwi chroni przed uszkodzeniem niedokrwiennym u świń i ludzi17,19,22.
Różne podejścia do wywoływania zdalnego niedokrwienia za pomocą opaski uciskowej obejmują użycie mankietu do pomiaru ciśnienia krwi lub elastycznej opaski17,22,23. Jednak stosowanie elastycznej opaski w celu wywołania niedokrwienia jest niebezpieczną metodą, potencjalnie powodującą nieuregulowany nacisk w kończynie, przy czym u ludzi odnotowuje się wzrost ciśnienia powyżej 500 mmHg24. Co więcej, niedokrwienie kończyn za pomocą elastycznej opaski prowadzi do uszkodzenia mięśni u szczurów po usunięciu opaski23, jak oceniono za pomocą Evans Blue Dye, markera przepuszczalności włókien mięśniowych in vivo 25. W przeciwieństwie do tego, dostarczenie kontrolowanego ciśnienia do opaski uciskowej można osiągnąć za pomocą mankietu do pomiaru ciśnienia krwi połączonego z ciśnieniomierzem17,19,22,26.
W tym badaniu, model lekkiego uszkodzenia degeneracji fotoreceptorów został wykorzystany do zademonstrowania neuroprotekcyjnej skuteczności zdalnego warunkowania niedokrwiennego. Zdalne niedokrwienie zostało wywołane bezpośrednio przed lekkim uszkodzeniem i zapobiegło późniejszemu zwyrodnieniu fotoreceptorów, co potwierdzono badaniami funkcji siatkówki. Załączony film zademonstruje zastosowanie nieinwazyjnego zdalnego niedokrwienia.

<table><tbody><tr><td>Ciśnieniomierz ręczny DuraShock z serii Gold</td><td>Welch Allyn</td><td>DS56</td><td>Ręczny ciśnieniomierz</td></tr><tr><td>Neonate [rozmiar 2] 1 tubka, 10 sztuk</td><td>Welch Allyn</td><td>5082-102-1</td><td>Mankiet do pomiaru ciśnienia krwi kończyn</td></tr><tr><td>Adapter Luer lock</td><td>Welch Allyn</td><td>5082-178</td><td>Adapter do mankietu noworodkowego</td></tr><tr><td>Termistor pod</td><td>AD Instruments</td><td>ML 309</td><td>jednostka temperatury skóry</td></tr><tr><td>Sonda temperatury skóry</td><td>AD Instruments</td><td>MLT 422/A</td> Powerlab, 4-kanałowy <td></td></tr><tr><td>sprzęt do akwizycji</td><td>AD Instruments</td><td>PL 35044</td><td></td></tr><tr><td>System homeotermicznych z elastyczną sondą</td><td>Harvard Appartus</td><td>507222F</td><td></td></tr><tr><td>Ręcznik</td><td></td><td></td><td>opcjonalnie: obudź zdalne niedokrwienie</td></tr><tr><td>Isoflo - 100% Isofluran (250 ml)</td><td>Abbot Animal Health</td><td>05260-05</td><td>opcjonalnie: znieczulenie wziewne zdalne niedokrwienie</td></tr><tr><td>Ketamil - ketamina 100 mg / ml (50 ml)</td> <td>Troy Laboratories Pty Ltd</td><td></td><td>opcjonalnie: znieczulenie do wstrzykiwań</td></tr><tr><td>Ksylium - Ksylazyna 100 mg / ml (50 ml)</td> <td>Troy Laboratories Pty Ltd</td><td></td><td>opcjonalnie: znieczulenie do wstrzykiwań zdalne niedokrwienie</td></tr></tbody></table>

warunkowanie niedokrwienne kończyn na odległość: technika neuroprotekcyjna u gryzoni

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Niedokrwienie subletalne chroni tkanki przed kolejnym, cięższym niedokrwieniem poprzez regulację w górę mechanizmów endogennych w dotkniętej tkance. Wykazano również, że niedokrwienie subletalne zwiększa mechanizmy ochronne w odległych tkankach. Krótki okres niedokrwienia (5-10 min) kończyny tylnej ssaków wywołuje reakcje samoobronne w mózgu, płucach, sercu i siatkówce. Efekt ten jest znany jako zdalne kondycjonowanie wstępne niedokrwienne (RIP). Jest to obiecujący terapeutycznie sposób ochrony ważnych narządów i jest już w trakcie badań klinicznych dotyczących urazów serca i mózgu. Niniejsza publikacja przedstawia kontrolowaną, małoinwazyjną metodę doprowadzenia kończyny – a konkretnie tylnej kończyny szczura – do niedokrwienia. Mankiet do pomiaru ciśnienia krwi opracowany do stosowania u noworodków jest połączony z ręcznym ciśnieniomierzem i służy do wywierania ciśnienia 160 mmHg wokół górnej części kończyny tylnej. Sonda przeznaczona do wykrywania temperatury skóry służy do weryfikacji niedokrwienia, rejestrując spadek temperatury skóry spowodowany niedrożnością tętnic nóg wywołaną ciśnieniem oraz wzrost temperatury, który następuje po zwolnieniu mankietu. Ta metoda RIP zapewnia ochronę siatkówki szczura przed uszkodzeniami i zwyrodnieniami wywołanymi jasnym światłem.

Mankiet do pomiaru ciśnienia krwi napompowany powyżej 160 mmHg zatrzymuje przepływ krwi do kończyny tylnej, co wyraźnie widać na Rysunku 1B. Brak utlenowania tkanek spowodował obniżenie temperatury stopy zwierzęcia w ramach protokołu niedokrwienia-reperfuzji (Rysunek 2). Temperatura stopy (33 °C) była niższa od temperatury głębokiej ciała i ulegała wiarygodnemu obniżeniu podczas podwyższenia ciśnienia w mankiecie (31 °C), wzrastając po jego spuszczeniu (32 °C). Pojedyncze uszkodzenie świ...

Zdalne warunkowanie niedokrwienne (RIP) to metoda kondycjonowania tkanek przed szkodliwym stresem. Ustaliliśmy metodę zdalnego niedokrwienia kończyny tylnej, poprzez napompowanie mankietu ciśnieniomierza na 5-10 minut. Zdolności neuroprotekcyjne RIP wykazano w modelu zwyrodnienia siatkówki u gryzoni.

Warunkowanie niedokrwienne kończyn na odległość: technika neuroprotekcyjna u gryzoni

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Ogólnym celem tej procedury jest doprowadzenie do niedokrwienia kończyny tylnej, które warunkuje odległe tkanki przed późniejszym stresem. Na przykład siatkówka przed lekkim uszkodzeniem. Osiąga się to poprzez pierwszą kalibrację ręcznego manometru Ingle mom.Następnie zwierzę jest znieczulane i umieszczane na poduszce grzewczej. Następnie tylna noga zwierzęcia jest wysuwana, a mankiet umieszczany jest na swoim miejscu. Wreszcie, zdalne niedokrwienie wykonuje się poprzez napompowanie mankietu za pomocą pompy, opróżnienie mankietu i powtórzenie procesu po raz drugi.Ostatecznie, w przypadku stosowania przed lekkim urazem, zdalne niedokrwienie jest wykorzystywane do wykazania poprawy funkcji siatkówki i liczby fotoreceptorów ulegających apoptozie. Metoda ta może odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie neurobiologii, takie jak to, w jaki sposób indukowana jest samoobrona za pomocą zdalnego warunkowania niedokrwiennego W celu śledzenia temperatury skóry w czasie rzeczywistym. Otwórz oprogramowanie do rejestracji temperatury, ustaw temperaturę w zakresie od 30 do 35 stopni Celsjusza, a częstotliwość pobierania próbek co 100 milisekund za pomocą mankietu noworodkowego w rozmiarze dwa dla szczura o wadze od 250 do 550 gramów, w razie potrzeby podłącz mankiet do manometru fome za pomocą adaptera.Następnie opróżnij mankiet, poluzowując zawór spustowy powietrza lub odłączając rurkę mankietu od adaptera. Upewnij się, że w rurce nie ma ciśnienia, a igła manometru spoczywa na zerze wewnątrz owalnego prostokąta. Następnie, aby sprawdzić ciśnienie między rurką, manometrem i kaszlem.Użyj delikatnych pompek żarówki do pompowania, aby napompować mankiet, aż manometr wskaże 100 miligramów rtęci. Po upewnieniu się, że ciśnienie pozostaje stałe, opróżnij mankiet, powoli otwierając zawór spustowy powietrza po zmroku, dostosowując zwierzę zgodnie z protokołem tekstowym. Potwierdź, że ma dobre napięcie mięśniowe, ściskając górną tylną kończynę, aby potwierdzić, że obecny jest odpowiedni mięsień.Po uśpieniu zwierzęcia zgodnie z protokołem tekstowym sprawdź głębokość znieczulenia, wysuwając nogę i szczypiąc skórę na spodniej stronie stopy. Następnie zastosuj sztuczne łzy. Umieść szczura na poduszce grzewczej lub rurki podgrzewacza wody krążącej w pozycji leżącej, z poduszkami stóp kończyn dolnych skierowanymi do góry.Aby zastosować sondę temperatury skóry, wyprostuj nogę szczura, który będzie podlegał niedokrwieniu i mocno umieść sondę skórną na opuszku stopy, ustawiając ją tak, aby zmaksymalizować kontakt między sondą temperatury a skórą. Następnie użyj taśmy papierowej, aby przymocować sondę. Sprawdź położenie sondy skórnej, śledząc temperaturę w oprogramowaniu do rejestrowania temperatury przez jedną do dwóch minut.Upewnij się, że temperatura skóry wynosi od 30 do 34 stopni Celsjusza i pozostaje stabilna. W przeciwnym razie dostosuj sondę do zdalnego niedokrwienia. Zacznij od opróżnionego mankietu i upewnij się, że zawór ciśnienia powietrza jest zamknięty.Wyprostuj nogę i luźno owiń mankiet na górnej kończynie tylnej. Użyj palca wskazującego i kciuka, aby wyprostować nogę i dolne palce, aby utrzymać poluzowany mankiet na miejscu. Teraz podnieś ciśnienie w mankiecie do 160 milimetrów słupa rtęci.Po osiągnięciu prawidłowego ciśnienia uruchom rejestrację temperatury timera i stopy. Temperatura stopy powinna spaść o dwa stopnie Celsjusza po pięciu minutach stałego nacisku, kilkakrotnie pompuj bańkę w krótkich seriach, aby utrzymać pożądane ciśnienie mankietu i utrzymać pozycję mankietu nad kolanem zwierzęcia przez cały czas niedokrwienia. Nieprzerwanie dostarczaj zdalne niedokrwienie przez pięć minut.Następnie zwolnij zawór ciśnienia powietrza na pięciominutową reperfuzję przed powtórzeniem zdalnego niedokrwienia. Po zakończeniu procedury obniż ciśnienie w mankiecie, poluzowując zawór ciśnienia powietrza. Sprawdź zmianę temperatury w trakcie protokołu niedokrwienia.Następnie zwolnij mankiet. Umieść zwierzę na poduszce grzewczej i kontynuuj monitorowanie do momentu rozpoczęcia chodzenia. Kiedy zwierzę chodzi, odłóż je do pomieszczenia.Na koniec przeprowadź lekkie obrażenia i wykonaj test tunelowy. Zgodnie z protokołem tekstowym, jak wyraźnie widać tutaj, mankiet do pomiaru ciśnienia krwi umieszczony nad kolanem podniesiony do ponad 160 milimetrów słupa rtęci zatrzymuje przepływ krwi do kończyny tylnej. Brak przepływu krwi spowodował obniżenie temperatury stopy, która była niższa niż temperatura rdzenia zwierzęcia i wzrosła po opróżnieniu mankietu, zgodnie ze stanem niezbędnym do RIP.Na tym rycinie, przystosowany do ciemności elektroretinogram lub ERG od normalnego, słabo wychowanego szczura wykazał dużą reakcję fotoreceptora i wewnętrznej siatkówki na jasny błysk tydzień po urazie świetlnym. Zapisy ERG wykazały znaczne zmniejszenie amplitudy w stosunku do grupy kontrolnej, odzwierciedlając utratę fotoreceptorów, jednak wstępne kondycjonowanie tylnej kończyny z niedokrwieniem przy użyciu protokołu reperfuzyjnego od dwóch do pięciu minut bezpośrednio przed niedokrwieniem chroniło fotoreceptory przed uszkodzeniem światłem. Panel ten pokazuje, że amplitudy R-I-P-E-R-G były większe niż samo uszkodzenie światłem z niewielkim zmniejszeniem fali A.Wreszcie, mankiet umieszczony poniżej kolana nie chroni fotoreceptorów przed lekkimi urazami, co znajduje odzwierciedlenie w obserwowanych tutaj obniżonych amplitudach ERG. Metody takie jak zdalne warunkowanie niedokrwienne mogą być wykonane w celu uzyskania odpowiedzi na dodatkowe pytania, takie jak jakie są mechanizmy endogennej neuroprotekcji i jak można zastosować zdalne niedokrwienie w celu poprawy funkcji po uszkodzeniu i zwyrodnieniu OUN.

remote-limb-ischemic-preconditioning-neuroprotective-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiono procedurę chirurgiczną indukcji jednostronnego niedokrwienia kończyny tylnej, z potwierdzeniem niedokrwienia za pomocą obrazowania perfuzji metodą laserowego Dopplera.

Mysi model niedokrwienia kończyny dolnej

Przybywa dowodów na to, że przeciwwarunkowanie niedokrwienne (PC) – nieuszkadzający bodziec niedokrwienny dla mózgu – zapewnia przejściową ochronę przed następującym po nim uszkadzającym niedokrwieniem. Zastosowaliśmy obustronną okluzję wspólnej tętnicy szyjnej (BCCAO) jako bodziec przeciwwarunkujący w celu wywołania wczesnej tolerancji na niedokrwienie (IT) w odpowiedzi na przejściowe ogniskowe niedokrwienie mózgu (wywołane okluzją środkowej tętnicy mózgowej, MCAO) u myszy C57Bl6/J.

Dwustronne zamknięcie wspólnych tętnic szyjnych jako odpowiedni bodziec prekondycjonujący w celu indukcji wczesnej tolerancji niedokrwiennej na ogniskowe niedokrwienie mózgu

Źródło: Zheng, Y., et al. Modele eksperymentalne do badania neuroprotekcji kwaśnego kondycjonowania końcowego przed niedokrwieniem mózgu. J. Vis. Exp. (2017)Ten film przedstawia zastosowanie kwaśnego kondycjonowania końcowego (APC) w celu oceny jego neuroprotekcyjnego działania przeciwko uszkodzeniu niedokrwiennemu w mysim modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAO). Przedstawiono w nim etapy związane z reperfuzją w modelu MCAO i zastosowaniem APC podczas reperfuzji w celu złagodzenia...

 Ocena neuroprotekcyjnego wpływu kwaśnego kondycjonowania końcowego w mysim modelu niedokrwienia mózgu

Źródło: Poinsatte, K., et al., K. Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Ocluzion in Mys. J. Vis. Exp. (2015)Ten film pokazuje metodę powtarzalnego kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego (RHP) poprzez wystawienie myszy na kontrolowane cykle hipoksji przed wywołaniem udaru niedokrwiennego. Eksperyment ocenia jego wpływ na stabilność bariery krew-mózg, adaptację neuronów i stan zapalny.

Adaptacja neuronalna do powtarzającego się kondycjonowania wstępnego hipoksyjnego u myszy

Źródło: Brandli, A. Zdalne warunkowanie niedokrwienne kończyn: technika neuroprotekcyjna u gryzoni. J. Vis. Exp. (2015)Ten film przedstawia nieinwazyjny protokół wstępnego kondycjonowania niedokrwiennego kończyn u szczurów w celu wywołania neuroprotekcji ogólnoustrojowej. Zabieg polega na kontrolowanym zamknięciu tętnic i reperfuzji, uruchamiając komórkowe szlaki stresu, które uwalniają czynniki ochronne. Czynniki te zwiększają odporność na urazy niedokrwienne i metaboliczne w odległych...

Nieinwazyjne przygotowanie niedokrwienne kończyn w modelu szczurzym do neuroprotekcji

Elektroretinogram (ERG) to potencjał elektryczny generowany przez siatkówkę w odpowiedzi na światło. W artykule opisano, w jaki sposób można wykorzystać ERG do oceny funkcji siatkówki u szczurów przystosowanych do ciemności oraz jak można go wykorzystać do oceny interwencji neuroprotekcyjnej, w tym przypadku zdalnego warunkowania niedokrwiennego.

Wykorzystanie elektroretinogramu do oceny funkcji siatkówki gryzoni i ochronnych skutków warunkowania wstępnego niedokrwiennego kończyn na odległość

Ten protokół opisuje powtarzające się wstępne kondycjonowanie hipoksyjne, czyli krótkie ekspozycje na niedotlenienie ogólnoustrojowe, które zmniejszają objętość zawału i zaburzenie bariery krew-mózg po przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy. Szczegółowo opisano również podwójną kwantyfikację objętości zawału i przerwania bariery krew-mózg po udarze, aby ocenić skuteczność ochrony nerwowo-naczyniowej.

Kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy

Izolowane serce szczura jest trwałym modelem uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwiennego. W tym miejscu opisujemy proces pobierania bijącego serca od szczura poprzez kaniulację aorty in situ, perfuzję Langendorffa serca, symulowane uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne i barwienie zawału, aby potwierdzić zakres urazu niedokrwiennego.

Indukcja i ocena uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego w sercach szczurów z perfuzją Langendorffa

Chirurgiczna indukcja niedokrwienia kończyn tylnych u myszy jest przydatna do badania angiogenezy, jednak jest ona zagrożona u niektórych szczepów myszy wsobnych, które wykazują wyraźną nekrozę tkanek wywołaną niedokrwieniem. Opisano metody wywoływania podostrego niedokrwienia kończyn za pomocą ameroidowych zwężaczy w celu obejścia tego problemu poprzez indukcję stopniowej niedrożności tętnic.

Metody leczenia ostrego i podostrego mysiego niedokrwienia kończyn tylnych

Kwaśne kondycjonowanie końcowe chroni przed niedokrwieniem mózgu. Poniżej przedstawiamy dwa modele do uruchamiania APC. Osiąga się je odpowiednio poprzez przeniesienie wycinków korowo-prążkowych do buforu kwaśnego po deprywacji tlenu i glukozy in vitro oraz przez wdychanie 20% CO2 po niedrożności tętnicy środkowej mózgu in vivo.

Modele eksperymentalne do badania neuroprotekcji kwaśnego kondycjonowania końcowego przeciwko niedokrwieniu mózgu

Ten protokół pokazuje, jak wykonać amputację poniżej kolana u szczurów i natychmiast przeprowadzić ukierunkowaną reinnerwację mięśni (iTMR), aby zbadać strategie leczenia i zapobiegania bólowi związanemu z amputacją oraz lepiej zrozumieć mechanizmy bólu związane z amputacją.

Model ćwiczeniowy amputacji kończyny dolnej szczura poniżej kolana i natychmiastowa ingerencja mięśniowa

Poznaj metodę warunkowania niedokrwiennego kończyn na odległość u szczurów w celu ochrony siatkówki przed uszkodzeniem świetlnym. Technika ta aktywuje endogenne mechanizmy neuroprotekcyjne poprzez cykle niedokrwienia i reperfuzyjne.

Warunkowanie niedokrwienne kończyn na odległość: technika neuroprotekcyjna u gryzoni

Przeglądaj więcej filmów