Name: Rozszyfrowywanie i obrazowanie patogenezy i sznurowania Mycobacterium abscessus w zarodkach danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Poznaj metody obrazowania patogenezy Mycobacterium abscessus w zarodkach Danio rerio przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej. Technika ta umożliwia badanie interakcji bakterii z układem odpornościowym w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są wdzięczni K. Kissie za pomocne dyskusje i dostarczenie lipo-klodronianu oraz L. Ramakrishnanowi za hojny dar pTEC27 i pTEC15, które umożliwiają ekspresję odpowiednio tdTomato i Wasabi. Praca ta jest częścią projektów Francuskiej Narodowej Agencji Badawczej (ZebraFlam ANR-10-MIDI-009 i DIMYVIR ANR-13-BSV3-007-01) oraz Siódmego Programu Ramowego Wspólnoty Europejskiej (FP7-PEOPLE-2011-ITN) na podstawie umowy o grant nr. PITN-GA-2011-289209 dla sieci szkoleń wstępnych Marie-Curie FishForPharma. Pragniemy również podziękować Stowarzyszeniu Gregory Lemarchal i Vaincre La Mucoviscidose (RF20130500835) za ufundowanie projektu C.M. Dupont.

<ol><li>Brown-Elliott, B. A., Wallace, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+taxonomic+status+of+pathogenic+nonpigmented+or+late-pigmenting+rapidly+growing+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Clinical and taxonomic status of pathogenic nonpigmented or late-pigmenting rapidly growing mycobacteria.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (4), 716-746 (2002).</li>
<li>Aitken, M. L., Limaye, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+outbreak+of+Mycobacterium+abscessus+subspecies+massiliense+in+a+lung+transplant+and+cystic+fibrosis+center%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Respiratory outbreak of Mycobacterium abscessus subspecies massiliense in a lung transplant and cystic fibrosis center.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 185 (2), 231-232 (2012).</li>
<li>Gilljam, M., Lindblad, A., Ridell, M., Wold, A. E., Welinder-Olsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+Mycobacterium+abscessus%2C+with+focus+on+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of Mycobacterium abscessus, with focus on cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 45 (5), 1497-1504 (2007).</li>
<li>Roux, A. -L., Catherinot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+study+of+prevalence+of+nontuberculous+mycobacteria+in+patients+with+cystic+fibrosis+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Multicenter study of prevalence of nontuberculous mycobacteria in patients with cystic fibrosis in France.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47 (12), 4124-4128 (2009).</li>
<li>Lee, M. -R., Cheng, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+infections+caused+by+Mycobacterium+abscessus+complex%3A+clinical+features+and+antimicrobial+susceptibilities+of+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">CNS infections caused by Mycobacterium abscessus complex: clinical features and antimicrobial susceptibilities of isolates.</a> The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (1), 222-225 (2012).</li>
<li>Talati, N. J., Rouphael, N., Kuppalli, K., Franco-Paredes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrum+of+CNS+disease+caused+by+rapidly+growing+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Spectrum of CNS disease caused by rapidly growing mycobacteria.</a> The Lancet Infectious Diseases. 8 (6), 390-398 (2008).</li>
<li>Medjahed, H., Gaillard, J. -L., Reyrat, J. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+a+new+player+in+the+mycobacterial+field%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: a new player in the mycobacterial field.</a> Trends in Microbiology. 18 (3), 117-123 (2010).</li>
<li>Griffith, D. E., Girard, W. M., Wallace, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+features+of+pulmonary+disease+caused+by+rapidly+growing+mycobacteria.+An+analysis+of+154+patients%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Clinical features of pulmonary disease caused by rapidly growing mycobacteria. An analysis of 154 patients.</a> The American Review of Respiratory Disease. 147 (5), 1271-1278 (1993).</li>
<li>Nessar, R., Cambau, E., Reyrat, J. M., Murray, A., Gicquel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+a+new+antibiotic+nightmare%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: a new antibiotic nightmare.</a> The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (4), 810-818 (2012).</li>
<li>Sanguinetti, M., Ardito, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+pulmonary+infection+due+to+multidrug-resistant+Mycobacterium+abscessus+a+patient+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Fatal pulmonary infection due to multidrug-resistant Mycobacterium abscessus a patient with cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 39 (2), 816-819 (2001).</li>
<li>Griffith, D. E., Aksamit, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+ATS%2FIDSA+statement%3A+diagnosis%2C+treatment%2C+and+prevention+of+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An official ATS/IDSA statement: diagnosis, treatment, and prevention of nontuberculous mycobacterial diseases.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 175 (4), 367-416 (2007).</li>
<li>Howard, S. T., Rhoades, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+reversion+of+Mycobacterium+abscessus+a+smooth+to+a+rough+morphotype+is+associated+with+reduced+expression+of+glycopeptidolipid+and+reacquisition+of+an+invasive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+%28Reading%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Spontaneous reversion of Mycobacterium abscessus a smooth to a rough morphotype is associated with reduced expression of glycopeptidolipid and reacquisition of an invasive phenotype.</a> Microbiology (Reading, England). 152 (Pt 6), 1581-1590 (2006).</li>
<li>Chardi, A., Olivares, F., Byrd, T. F., Julián, E., Brambilla, C., Luquin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+cord+formation+by+rough+Mycobacterium+abscessus+variants%3A+implications+for+the+clinical+microbiology+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Demonstration of cord formation by rough Mycobacterium abscessus variants: implications for the clinical microbiology laboratory.</a> Journal of Clinical Microbiology. 49 (6), 2293-2295 (2011).</li>
<li>Byrd, T. F., Lyons, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+characterization+of+a+Mycobacterium+abscessus+mutant+in+human+and+murine+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Preliminary characterization of a Mycobacterium abscessus mutant in human and murine models of infection.</a> Infection and Immunity. 67 (9), 4700-4707 (1999).</li>
<li>Catherinot, E., Clarissou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypervariance+of+a+rough+variant+of+the+Mycobacterium+abscessus+type+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Hypervariance of a rough variant of the Mycobacterium abscessus type strain.</a> Infection and Immunity. 75 (2), 1055-1058 (2007).</li>
<li>Catherinot, E., Roux, A. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+failure+involving+an+R+variant+of+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory failure involving an R variant of Mycobacterium abscessus.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47 (1), 271-274 (2009).</li>
<li>Bernut, A., Le Moigne, V., Lesne, T., Lutfalla, G., Herrmann, J. -L., Kremer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+drug+efficacy+against+Mycobacterium+abscessus+using+the+embryonic+zebrafish+test+system%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of drug efficacy against Mycobacterium abscessus using the embryonic zebrafish test system.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (7), 4054-4063 (2014).</li>
<li>Oh, C. -T., Moon, C., Jeong, M. S., Kwon, S. -H., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+for+Mycobacterium+abscessus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection+%2F+Institut+Pasteur%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster for Mycobacterium abscessus infection.</a> Microbes and Infection / Institut Pasteur. 15 (12), 788-795 (2013).</li>
<li>Bernut, A., Herrmann, J. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus+cording+prevents+phagocytosis+and+promotes+abscess+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus cording prevents phagocytosis and promotes abscess formation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (10), E943-E952 (2014).</li>
<li>Dubée, V., Bernut, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Lactamase+inhibition+by+avibactam+in+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">β-Lactamase inhibition by avibactam in Mycobacterium abscessus.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 70 (4), 1051-1058 (2015).</li>
<li>Torraca, V., Masud, S., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-pathogen+interactions+in+infectious+diseases%3A+new+therapeutic+insights+from+the+zebrafish+host+model%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Macrophage-pathogen interactions in infectious diseases: new therapeutic insights from the zebrafish host model.</a> Disease Models Mechanisms. 7 (7), 785-797 (2014).</li>
<li>Alibaud, L., Rombouts, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Molecular Microbiology. 80 (4), 919-934 (2011).</li>
<li>Clay, H., Volkman, H. E., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor+signaling+mediates+resistance+to+mycobacteria+by+inhibiting+bacterial+growth+and+macrophage+death%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor signaling mediates resistance to mycobacteria by inhibiting bacterial growth and macrophage death.</a> Immunity. 29 (2), 283-294 (2008).</li>
<li>Palha, N., Guivel-Benhassine, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+whole-body+visualization+of+Chikungunya+Virus+infection+and+host+interferon+response+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">Real-time whole-body visualization of Chikungunya Virus infection and host interferon response in zebrafish.</a> PLoS pathogens. 9 (9), e1003619(2013).</li>
<li>Mostowy, S., Boucontet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+new+model+for+the+in+vivo+study+of+Shigella+flexneri+with+phagocytes+and+bacterial+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a new model for the in vivo study of Shigella flexneri with phagocytes and bacterial autophagy.</a> PLoS pathogens. 9 (9), e1003588(2013).</li>
<li>Prajsnar, T. K., Cunliffe, V. T., Foster, S. J., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+vertebrate+model+of+Staphylococcus+aureus+reveals+phagocyte-dependent+resistance+of+zebrafish+to+non-host+specialized+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A novel vertebrate model of Staphylococcus aureus reveals phagocyte-dependent resistance of zebrafish to non-host specialized pathogens.</a> Cellular Microbiology. 10 (11), 2312-2325 (2008).</li>
<li>Van der Sar, A. M., Appelmelk, B. J., Vandenbroucke-Grauls, C. M. J. E., Bitter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+star+with+stripes%3A+zebrafish+as+an+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A star with stripes: zebrafish as an infection model.</a> Trends in Microbiology. 12 (10), 451-457 (2004).</li>
<li>Vergunst, A. C., Meijer, A. H., Renshaw, S. A., O’Callaghan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burkholderia+cenocepacia+creates+an+intramacrophage+replication+niche+in+zebrafish+embryos%2C+followed+by+bacterial+dissemination+and+establishment+of+systemic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Burkholderia cenocepacia creates an intramacrophage replication niche in zebrafish embryos, followed by bacterial dissemination and establishment of systemic infection.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1495-1508 (2010).</li>
<li>Levraud, J. -P., Disson, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+observation+of+Listeria+monocytogenes-phagocyte+interactions+in+living+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Real-time observation of Listeria monocytogenes-phagocyte interactions in living zebrafish larvae.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3651-3660 (2009).</li>
<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Current Drug Targets. 12 (7), 1000-1017 (2011).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+Rerio%29%22">The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio Rerio)</a>. , (2007).</li>
<li>Benard, E. L., van der Sar, A. M., Ellett, F., Lieschke, G. J., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+zebrafish+embryos+with+intracellular+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), e3781(2012).</li>
<li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+mediated+depletion+of+macrophages%3A+mechanism+of+action%2C+preparation+of+liposomes+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> Journal of Immunological Methods. 174 (1-2), 83-93 (1994).</li>
<li>Adams, K. N., Takaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145 (1), 39-53 (2011).</li>
<li>Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+within+the+zebrafish+to+understand+the+tuberculous+granuloma%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Looking within the zebrafish to understand the tuberculous granuloma.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 783, 251-266 (2013).</li>
<li>Davis, J. M., Clay, H., Lewis, J. L., Ghori, N., Herbomel, P., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+visualization+of+Mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Real-time visualization of Mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17 (6), 693-702 (2002).</li>
<li>Lamason, R. L., Mohideen, M. -A. P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLC24A5%2C+a+putative+cation+exchanger%2C+affects+pigmentation+in+zebrafish+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+NY%29%22%5BJournal%5D)">SLC24A5, a putative cation exchanger, affects pigmentation in zebrafish and humans.</a> Science (New York, NY). 310 (5755), 1782-1786 (2005).</li>
<li>Renshaw, S. A., Loynes, C. A., Trushell, D. M. I., Elworthy, S., Ingham, P. W., Whyte, M. K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108 (13), 3976-3978 (2006).</li>
<li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC developmental biology. 7, 42(2007).</li>
<li>Takaki, K., Davis, J. M., Winglee, K., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+pathogenesis+and+treatment+of+Mycobacterium+marinum+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the pathogenesis and treatment of Mycobacterium marinum in zebrafish.</a> Nature Protocols. 8 (6), 1114-1124 (2013).</li>
<li>Stoop, E. J. M., Schipper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Disease Models Mechanisms. 4 (4), 526-536 (2011).</li>
<li>Carvalho, R., de Sonneville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PloS One. 6 (2), e16779(2011).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Danio pręgowany stał się ostatnio doskonałym systemem modelowym kręgowców do badania dynamiki infekcji bakteryjnych przy użyciu obrazowania szerokokątnego i konfokalnego w czasie rzeczywistym36. Połączenie rozproszonych zawiesin prątków (protokół 2.2) wraz z metodami mikroiniekcji (protokół 4) umożliwia powtarzalne infekcje ogólnoustrojowe, a następnie monitorowanie i wizualizację postępu infekcji ze szczególnym uwzględnieniem interakcji bakteryjnych z makrofagami gospodarza. Zjadliwość M. abscessus <...

Mycobacterium abscessus to pojawiający się patogen, który powoduje szerokie spektrum klinicznych zespołów u ludzi. Należą do nich zakażenia skórne, a także ciężkie przewlekłe infekcje płuc, najczęściej występujące u pacjentów z obniżoną odpornością i mukowiscydozą1,2,3,4. M. abscessus jest również uważany za główny, szybko rosnący gatunek prątków odpowiedzialny za zakażenia szpitalne i jatrogenne u ludzi. Co więcej, kilka ostatnich doniesień podkreśliło możliwość, że M. abscessus może przekroczyć barierę krew-mózg i wywołać ważne zmiany w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN)5,6. Pomimo szybkiego wzrostu, M. abscessus wykazuje również kilka cech patogennych, które są związane z Mycobacterium tuberculosis, w tym zdolność do milczenia przez lata w strukturach ziarniniakowych i generowania zmian serowatych w płucach7. Bardziej niepokojąca jest niska wrażliwość M. abscessus na antybiotyki, co sprawia, że infekcje te są niezwykle trudne do leczenia, co prowadzi do znacznego odsetka niepowodzeń terapeutycznych8,9. Istotnym zagrożeniem związanym z tym gatunkiem jest przede wszystkim jego wewnętrzna oporność na antybiotyki, która budzi poważne obawy w instytucjach zdrowia publicznego10 i jest przeciwwskazaniem do przeszczepu płuc11.
M. abscessus wykazuje gładkie (S) lub szorstkie (R) morfotypy kolonii, które prowadzą do różnych wyników klinicznych. W przeciwieństwie do szczepu S, bakterie R mają tendencję do wzrostu od końca do końca, co prowadzi do powstania struktury przypominającej linę lub sznur12,13. Kilka niezależnych badań opartych na modelach komórkowych lub zwierzęcych ujawniło fenotyp hiperwirulencji morfotypu R14,15. Z badań epidemiologicznych wynika, że najcięższe przypadki zakażeń płuc M. abscessus wydają się być związane z wariantami R16, które są jedynym wariantem, który utrzymuje się przez lata u zakażonego gospodarza3. Różnica w morfotypie polega na obecności (w S) lub utracie (w R) glikopeptydolipidów związanych z powierzchnią (GPL)12. Jednak ze względu na nieodłączne ograniczenia obecnie dostępnych modeli komórkowych/zwierzęcych wykorzystywanych do badania infekcji M. abscessus, nasza wiedza na temat zdarzeń patofizjologicznych wariantów R lub S pozostaje niejasna. Zakażenie myszy immunokompetentnych drogą dożylną lub aerozolową prowadzi do przejściowej kolonizacji, utrudniając wykorzystanie myszy do badania uporczywych infekcji i do badania wrażliwości na leki in vivo 17. W związku z tym opracowanie modeli zwierzęcych podatnych na manipulację reakcją gospodarza jest poważnym wyzwaniem. W tym kontekście niedawno opracowano modele infekcji inne niż ssaki, w tym Drosophila melanogaster18, który oferuje kilka zalet, takich jak koszt, szybkość i akceptowalność etyczna w porównaniu z modelem mysim. Model infekcji danio pręgowanego (Danio rerio) został również zbadany w celu wizualizacji, za pomocą nieinwazyjnego obrazowania, postępu i chronologii zakażenia M. abscessus u żywego zwierzęcia19. Co ważne, ustanowiono również dowód słuszności koncepcji, aby wykazać jego przydatność do oceny antybiotyków in vivo przeciwko M. abscessus17,20.
Danio pręgowany był szeroko stosowany w ciągu ostatnich dwóch dekad do badania interakcji między różnymi patogenami a układem odpornościowym gospodarza21. Rosnący sukces tego alternatywnego modelu kręgowców opiera się na dużych i unikalnych możliwościach, które zmotywowały i potwierdziły jego zastosowanie w celu lepszego zrozumienia licznych infekcji wirusowych i bakteryjnych19,22,23,24,25,26,27,28,29. W przeciwieństwie do większości innych modeli zwierzęcych, zarodki danio pręgowanego są optycznie przezroczyste, co pozwala na nieinwazyjne obrazowanie fluorescencyjne30. Doprowadziło to do zbadania zarodków danio pręgowanego zakażonych M. abscessus z niespotykanymi dotąd szczegółami, których kulminacją był opis sznurów zewnątrzkomórkowych, które stanowią przykład plastyczności morfologicznej bakterii. Cording stanowi nowy mechanizm subwersji układu odpornościowego i kluczowy mechanizm promujący patogenezę ostrego zakażenia M. abscessus 19.
Ten raport opisuje nowe narzędzia i metody wykorzystujące zarodek danio pręgowanego do rozszyfrowania patofizjologicznych cech infekcji M. abscessus i do zbadania intymnych interakcji między pałeczkami a wrodzonym układem odpornościowym. Po pierwsze, przedstawiono szczegółowy protokół mikroiniekcji, który obejmuje przetwarzanie inokulum bakteryjnego, przygotowanie zarodka i infekcję jako taką. Przedstawiono metody specjalnie przystosowane do oceny zjadliwości M. abscessus poprzez pomiar różnych parametrów, takich jak przeżywalność gospodarza i obciążenie bakteryjne. Szczególny nacisk położono na to, jak monitorować, na poziomie czasoprzestrzennym, los i postęp infekcji oraz odpowiedź immunologiczną gospodarza na M. abscessus za pomocą wideomikroskopii. Ponadto, aby zbadać udział i rolę makrofagów w zakażeniu M. abscessus, opisano metody generowania zarodków zubożonych w makrofagi (przy użyciu podejść opartych na genetyce lub chemii). Na koniec udokumentowane są protokoły wizualizacji specyficznych interakcji z makrofagami lub neutrofilami przy użyciu stałych lub żywych zarodków.
Celem tego raportu jest stymulowanie dalszych badań, które rzucą nowe światło na mechanizmy wirulencji M. abscessus, a w szczególności na rolę cordingu w tworzeniu ostrego i niekontrolowanego procesu infekcji.

<table><tbody><tr><td>BBL MGIT PANTA</td><td>BD Biosciences</td><td>245114</td><td></td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>04-100-811-E</td><td></td></tr><tr><td>Katalaza z wątroby bydlęcej&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Difco Middlebrook 7H10 Agar</td><td>BD Biosciences</td><td>262710</td><td></td></tr><tr><td>Difco Middlebrook 7H9 Bulion</td><td>BD Biosciences</td><td>271310</td><td></td></tr><tr><td>Sól metanosulfonianu 3-aminobenzoesanu etylu (Trikaina)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>Kwas oleinowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1008</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Delta Mikroskopia</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Czerwień fenolowa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>319244</td><td></td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4780</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Gibco Life Technologie</td><td>30391-023</td><td></td></tr><tr><td>Niskotopliwa agaroza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instant Ocean Sea Salts&nbsp;</td><td>Aquarium Systems Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kapilary ze szkła borokrzemianowego&nbsp;</td><td>Instrument Sutter Inc</td><td>BF100-78-10</td><td>1 mm OD X 0,78 mm ID</td></tr><tr><td>Urządzenie do ściągania mikropipet&nbsp;</td><td>Sutter Instrument Inc</td><td></td><td>Flamming/Brown Ściągacz do mikropipet p-87</td></tr><tr><td>Mikrowtryskiwacz</td><td>Tritech Research&nbsp;</td><td></td><td>Cyfrowy mikrowtryskiwacz,</td></tr><tr><td>pęseta</td> Minj-D <td>Sciences Tools inc</td><td></td><td>Dumont # M5S&nbsp;</td></tr><tr><td>Końcówki do mikroładowarek</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rozszyfrowywanie i obrazowanie patogenezy i sznurowania mycobacterium abscessus w zarodkach danio pręgowanego

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Zarodki danio pręgowanego (Danio rerio) są coraz częściej wykorzystywane jako model infekcji do badania funkcji wrodzonego układu odpornościowego kręgowców w interakcjach gospodarz-patogen. Łatwość uzyskania dużej liczby zarodków, ich dostępność dzięki zewnętrznemu rozwojowi, ich przezroczystość optyczna, a także dostępność szerokiego wachlarza narzędzi genetycznych/immunologicznych i transgenicznych kolekcji linii reporterowych, przyczyniają się do wszechstronności tego modelu. W związku z tym niniejszy manuskrypt opisuje wykorzystanie danio pręgowanego jako systemu modelowego in vivo do badania chronologii zakażenia Mycobacterium abscessus. Ten ludzki patogen może występować w postaci gładkiej (S) lub szorstkiej (R), w zależności od składu ściany komórkowej, a ich odpowiednią zjadliwość można obrazować i porównywać w zarodkach i larwach danio pręgowanego. Mikroiniekcja wariantów fluorescencyjnych S lub R bezpośrednio do krążenia krwi przez żyłę ogonową prowadzi odpowiednio do przewlekłych lub ostrych/śmiertelnych infekcji. Ten system biologiczny umożliwia wizualizację i analizę w wysokiej rozdzielczości roli prątków w promowaniu powstawania ropni. Ponadto zastosowanie bakterii fluorescencyjnych wraz z transgenicznymi liniami danio pręgowanego zawierającymi fluorescencyjne makrofagi stwarza wyjątkową okazję do wielokolorowego obrazowania interakcji gospodarz-patogen. W artykule opisano szczegółowe protokoły przygotowania jednorodnego inokulum M. abscessus oraz dożylnego wstrzykiwania zarodków danio pręgowanego w celu późniejszego obrazowania fluorescencyjnego interakcji z makrofagami. Techniki te otwierają drogę do przyszłych badań nad mutantami wadliwymi w tworzeniu pępowiny i mają na celu zrozumienie, w jaki sposób wpływa to na patogenność M. abscessus u całego kręgowca.

Choć możliwe jest dokonywanie iniekcji w różnych miejscach anatomicznych32, iniekcje w żyłę ogonową są często stosowane w celu wywołania infekcji systemowej do późniejszych analiz, w tym eksperymentów dotyczących przeżywalności, oznaczenia ładunku bakteryjnego, aktywności fagocytozy lub tworzenia sznurów. Iniekcje w mięśnie ogona są wykorzystywane do oceny rekrutacji makrofagów w miejscu wstrzyknięcia (Rycina 3A). Aby zbadać i porównać zjadliwość wariantów R i S M. abscessus, fluoresc...

Optycznie przezroczyste embriony danio pręgowanego są szeroko stosowane do badania i wizualizacji w czasie rzeczywistym interakcji między patogennymi mikroorganizmami a wrodzonymi komórkami odpornościowymi. Mikroiniekcja Mycobacterium abscessus, w połączeniu z obrazowaniem fluorescencyjnym, służy do badania podstawowych cech chorobotwórczych, takich jak tworzenie się pępowiny w zarodkach danio pręgowanego.

Rozszyfrowywanie i obrazowanie patogenezy i sznurowania Mycobacterium abscessus w zarodkach danio pręgowanego

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Ogólnym celem tej procedury jest zbadanie i porównanie wirulencji szczepów Mycobacterium abscessus oraz opisanie interakcji między tymi bakteriami a wrodzonym układem odpornościowym gospodarza in vivo z wykorzystaniem przezroczystych zarodków zebrafish. W tym celu w pierwszej kolejności przygotowuje się jednorodne inokulum bakteryjne. Następnie, 30 godzin po zapłodnieniu, do zarodków wstrzykuje się dożylnie zawiesiny bakteryjne.Dodatkowo, aby dokładniej zbadać rolę makrofagów w kontrolowaniu infekcji, stosuje się procedurę wtryskiwania preparatu na bazie lipochoatu w celu uzyskania embrionów pozbawionych makrofagów. Na koniec zakażone embriony są przygotowywane i obrazowane przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej i konfokalnej, aby monitorować postęp infekcji. Otrzymane wyniki ukazują specyficzne oddziaływania między fluorescencyjnymi komórkami fagocytarnymi a M abscessus, występującymi w formie pojedynczych komórek lub w postaci sznurowych agregatów wewnątrz przezroczystego embrionu.Główną zaletą wykorzystania danio pręgowanych w porównaniu z innymi modelami zwierzęcymi, takimi jak myszy, jest możliwość specyficznego badania procesu infekcji w czasie rzeczywistym oraz obrazowania konkretnych interakcji między Mycobacterium abscessus a makrofagami lub neutrofilami. Krok ten jest krytyczny dla późniejszego ciśnienia wtrysku u danio pręgowanych. Ze względu na wysoką tendencję Mycobacterium abscessus do tworzenia dużych agregatów i produkcji biofilmu, niezbędne jest zastosowanie specyficznego przygotowania w celu otrzymania homogennego i ilościowo kontrolowanego inokulum przed mikroiniekcją.Aby przygotować M. abscessus, zaszczepić hodowle w fazie wzrostu wykładniczego z 150 cm² kolb do hodowli tkankowych do 50 ml sterylnych probówek plastikowych i odwirować przy 4 000 ×g w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Do resuspensji osadu i podziału na aliquoty użyć 1 ml podłoża Middlebrook 7H9, uzupełnionego o wzbogacenie OADC oraz Tween 80 (dalej nazywanego podłożem 7H9). Przenieść 200 µL zawiesiny bakteryjnej do probówek 1,5 ml za pomocą igły o rozmiarze 26 G; każdą alikwotę zawiesiny bakteryjnej homogenizować 15 razy.Następnie, używając kąpieli wodnej, przeprowadź sonikację trzykrotnie po 10 s, z dziesięciosekundowymi przerwami. Pomiędzy cyklami dodaj 1 mL medium 7H9 i krótko wymieszaj na wirówce typu vortex, a następnie odwiruj z prędkością 100 ×g przez 3 min. Ostrożnie zbierz nadsączki zawierające prątki, aby uniknąć grudek, i przelej jednorodne zawiesiny do sterylnej plastikowej probówki o pojemności 50 mL.Wirować zawiesinę z prędkością 4 000 ×g przez pięć minut, a następnie użyć 200 µL medium 7H9 do resuspensji osadu w celu oceny końcowego inokulum bakteryjnego. Zgodnie z protokołem tekstowym, wizualna demonstracja tej metody jest kluczowa, ponieważ kroki te są trudne do opanowania, gdyż precyzyjna i delikatna manipulacja przy iniekcji w embriony zebrafish pod mikroskopem, jak również opanowanie techniki mikroiniekcji wymagają czasu. Aby przeprowadzić mikroiniekcję M. abscessus około 24 godzin po zapłodnieniu (HPF), użyć pęsety do zebrania embrionów w 100 mm szalce Petriego i utrzymywać je w temperaturze 28,5 °C.Przenieś 30 embrionów w 48 HPF do komory pozycjonującej w kształcie litery V wypełnionej 25 mililitrami wody dla ryb zawierającej 270 miligramów na litr trica, używając przyciętej końcówki mikrodozownika. Ułóż embriony odpowiednio w kanałach, aby ułatwić manipulację. Użyj PBST z 0,05% Tween 80 do rozcieńczenia inokulum bakteryjnego do pożądanej liczby CFU do podania oraz dodaj 10% czerwieni fenolowej, aby za pomocą końcówki mikrodozownika sprawdzić poprawność wstrzyknięcia.Napełnij igłę do mikroiniekcji od 5 do 10 µL inokulum bakteryjnego. Umieść igłę w uchwycie mikromanipulatora podłączonego do injektora, a następnie za pomocą precyzyjnej pęsety odłam wierzchołek igły, aby uzyskać średnicę otworu od 5 do 10 µm.Zkalibruj objętość iniekcji, regulując ciśnienie i czas mikroiniekcji. Następnie, aby uzyskać wymaganą objętość iniekcji, zmierz średnicę kropli wprowadzanej do żółtka jednego embrionu w celu wykonania mikroiniekcji do żyły kardynalnej. Ustaw embrion stroną brzuszną w stronę igły i umieść końcówkę igły blisko otworu urogenitalnego.Następnie delikatnie wsuń końcówkę igły w embrion, aż przebije ona obszar żyły szyjnej. Po tym podaj pożądaną objętość zawiesiny bakteryjnej, zazwyczaj od 1 do 3 nanolitrów zawierających około 100 CFU na nanolitr. Inkubuj i monitoruj embriony zgodnie z protokołem tekstowym, aby przeprowadzić deplecję makrofagów w 24 hpf. Posortuj embriony i przenieś je do naczynia do iniekcji wypełnionego wodą dla ryb z trypsyną.Następnie ułożyć je grzbietem do dołu. Po wymieszaniu roztworu klodronianu enkapsulowanego w liposomach za pomocą wirówki vortex, napełnić mikroigłę kapilarną i skalibrować objętość iniekcji. Przebić obszar żyły głównej, jak pokazano wcześniej, i wstrzyknąć od dwóch do trzech litrów roztworu.Powtórz iniekcję trzykrotnie. Inkubuj embriony w temperaturze 28.5 °C i wykorzystaj mikroskopię fluorescencyjną, aby sprawdzić prawidłowe wyczerpanie makrofagów przed zakażeniem. Postępuj zgodnie z wcześniejszymi instrukcjami z tego filmu, aby zliczyć jednostki tworzące kolonie lub CFU w wybranym punkcie czasowym.Należy zebrać pięć zarodków dla każdego stanu zakażenia i przenieść każdy zarodek do probówki do mikrowirówki o pojemności 1,5 mililitra. Zarodki należy poddać krioanestezji poprzez inkubację w lodzie przez 10 minut po uprzednim uśpieniu zarodków przy użyciu 300 do 500 miligramów na litr Trica. Należy użyć sterylnej wody do dwukrotnego przemycia zarodków w nowej probówce.Następnie, po usunięciu wody z 2% Triton X 100 w 1X PBS z każdego zarodka, należy użyć igły o rozmiarze 26G do homogenizacji tkanki w celu całkowitej lizy. Po odwirowaniu zawiesiny, należy użyć 1X PBST do resuspensji osadu. Następnie wykonuje się seryjne rozcieńczenia homogenatu i wysiewa je na podłoże Middlebrook 7H10 OADC.Po uzupełnieniu podłoża B-B-L-M-G-I-T Panta, inkubować płytki w temperaturze 30 °C przez cztery dni przed zliczeniem kolonii do obrazowania na żywo infekcji M abscessus; zamontować znieczulone embriony trica w 1% niskotopliwym agarozie w 35 mm szklanej płytce Petri do mikroskopu odwróconego lub na pojedynczym wgłębniku do mikroskopii konfokalnej w układzie prostym. Ustawić embrion w pożądanej pozycji i przykryć zestaloną agarozę wodą rybną zawierającą trica do obrazowania utrwalonej infekcji M abscessus. Po uśmierceniu embrionów przenieść je do 1,5 ml probówek do mikrowirówki i utrwalić embriony w 4% Paraformaldehydzie w 1X PBST przez dwie godziny.W temperaturze pokojowej usuń paraformaldehyd, przemywając embriony dwukrotnie w 1X-P-B-S-T przez 10 minut, aby kolejno zachować integralność tkanek oraz fluorescencję. Inkubuj embriony w roztworach glicerolu o rosnącym stężeniu przez 10 minut dla każdego z warunków. Umieść embrion zatopiony w 50% glicerolu w komorze obserwacyjnej.Na koniec należy użyć mikroskopu fluorescencyjnego z obiektywem 10 x lub konfokalnego mikroskopu fluorescencyjnego z obiektywami 40 x lub 63 x do sekwencyjnej akwizycji fluorescencji oraz obrazowania transmisyjnego zarodka. Aby zbadać i porównać zjadliwość wariantów szorstkich i gładkich M abscessus, bakterie fluorescencyjne wstrzyknięto dożylnie 30 zarodków sprawnych pod kątem HPFC. W przeciwieństwie do wariantu gładkiego, wariant szorstki wywołuje silniejszą i bardziej letalną infekcję z rozwojem ropni w obrębie ośrodkowego układu nerwowego.Różnice w wirulencji ilościowo określono poprzez wyliczanie CFU lub poprzez oznaczenie liczby pikseli fluorescencyjnych, które są ze sobą skorelowane. Wskazuje to na wyższe miano bakterii w przypadku wariantu szorstkiego. Jak widać na tej rycinie, kinetykę tworzenia sznurów można monitorować i obrazować za pomocą mikroskopii wideo w sposób nieinwazyjny, co wykazuje skłonność wariantu szorstkiego do replikacji zewnątrzkomórkowej, jak pokazano tutaj. Zakażenie embrionów pozbawionych makrofagów szorstkim szczepem M abscessus prowadzi do gwałtownego wzrostu miana bakterii i produkcji sznurów oraz do szybkiej śmierci larw.Wyraźnie wskazuje to na konieczność obecności makrofagów w celu kontrolowania infekcji M. abscessus, co pozwala na obserwację interakcji między makrofagami a M. abscessus w czasie rzeczywistym. W tym celu można wykorzystać transgeniczną linię EG one M cherry, która wytwarza czerwone fluorescencyjne makrofagi. Infekcje wywołują wyraźną rekrutację makrofagów z efektywną fagocytozą pojedynczych bakterii, podczas gdy sznury prątkowe stanowią strategię wypracowaną przez M. abscessus w celu uniknięcia fagocytozy po ich wytworzeniu.Technika ta utorowała drogę do zbadania istotnej roli kodowania jako nowego mechanizmu ucieczki immunologicznej. Dzięki modelowi infekcji u rybek danio pręgowanych możliwe stało się obecnie obserwowanie i opisanie wkładu kodów w patogenezę mycobacterium abscesses in vivo.

deciphering-imaging-pathogenesis-cording-mycobacterium-abscessus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Przezroczyste zarodki rybek danio-ostrolepisnych okazały się użytecznymi modelami gospodarzy do wizualizacji i funkcjonalnego badania oddziaływań między komórkami odporności wrodzonej a wewnątrzkomórkowymi patogenami bakteryjnymi, takimi jak Salmonella typhimurium oraz Mycobacterium marinum. Mikrowstrzykiwanie bakterii oraz wielobarwne obrazowanie fluorescencyjne to kluczowe techniki stosowane w modelach infekcji zarodków rybek danio-ostrolepisnych.

Zakażanie zarodków danio pręgowanego wewnątrzkomórkowymi patogenami bakteryjnymi

Szybki rozwój, niewielki rozmiar i przezroczystość danio pręgowanego stanowią ogromne zalety w badaniach nad wrodzonym immunologicznym kontrolowaniem infekcji1-4. W niniejszej pracy prezentujemy techniki zakażania larw danio pręgowanego grzybiczym patogenem Candida albicans za pomocą mikroiniekcji – metodologii wykorzystanej niedawno do wykazania roli aktywności NADPH oksydazy fagocytów w kontrolowaniu dimorfizmu grzybów5.

Nieinwazyjne obrazowanie rozsianej kandydozy u larw rybek danio

Ten film opisuje metodę mikroiniekcji do dostarczania komórek raka piersi do przestrzeni okołobiałkowej transgenicznych embrionów danio pręgowanego. Po inkubacji wizualizujemy zarodek pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby obserwować inwazję, rozprzestrzenianie się i przerzuty komórek rakowych.

Analiza inwazyjności zPDX: badanie inwazyjnego zachowania przerzutowych komórek rakowych w ksenoprzeszczepach zarodków danio pręgowanego

Źródło: Zhang, X., et al. Model zarodka danio pręgowanego do wizualizacji in vivo i analizy przyżyciowej zakażenia Staphylococcus aureus związanego z biomateriałem. J. Vis. Exp. (2019 rok)Film przedstawia obrazowanie fluorescencyjne zarodków danio pręgowanego, którym wstrzyknięto Staphylococcus aureus, umożliwiając ilościowe określenie progresji infekcji i rozmieszczenia bakterii w celu oceny wpływu mikrosfer biomateriału na interakcje gospodarz-patogen in vivo.

 Obrazowanie fluorescencyjne infekcji bakteryjnej związanej z biomateriałem w zarodkach danio pręgowanego

Źródło: Niu, L. i in. Wizualizacja śmierci limfocytów makrofagów podczas zakażenia mykobakteriami w zarodkach danio pręgowanego za pomocą mikroskopii śródwitalnej. J. Vis. Exp. (2019)Ten film pokazuje zastosowanie mikroskopii konfokalnej wewnątrzżyciowej do wizualizacji litycznej śmierci komórek makrofagów u zarodków danio pręgowanego po zakażeniu Mycobacterium marinum .

Obrazowanie na żywo śmierci komórek makrofagów podczas infekcji mykobakterią w zarodkach danio dano pręgowanego

Źródło: Bernut, A. i in., Rozszyfrowanie i obrazowanie patogenezy oraz układania korzeni Mycobacterium abscessus w embrionach danio pręgowanego. J. Vis. Exp. (2015).Ten film pokazuje protokół izolowania i ilościowego określania ropnia Mycobacterium z zakażonego zarodka danio pręgowanego. Procedura obejmuje eutanazję zarodków, lizę tkanek oraz homogenizację w celu uwolnienia bakterii, a następnie wirowanie i ponowną zawiesinę w buforze powierzchniowo czynnym. Na koniec zawiesina bakteryjna jest...

Izolacja i hodowla bakterii z zarodków danio dano w celu oceny obciążenia infekcją

Źródło: Bernut, A. i inni. Rozszyfrowanie i obrazowanie patogenezy oraz układania rdzenia ropnia Mycobacterium absceptus w zarodkach danio dano dano. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje protokół wykorzystujący transgeniczne zarodki danio danio ekspresyjne ekspresujące makrofagi fluorescencyjne i zakażone fluorescencyjnym szczepem Mycobacterium abscessus rough do wizualizacji interakcji żywiciel-patogen. Pokazuje, jak pozakomórkowe przewody umożliwiają unikanie odporności, wspierając...

Obrazowanie na żywo interakcji żywiciel-patogen w zarodkach danio dano zakażonych Mycobacterium abscessus

Opisano obrazowanie rozwoju naczyń mózgowych u larw danio pręgowanego. Dostępne są również techniki ułatwiające obrazowanie 3D i modyfikujące rozwój naczyń mózgowych za pomocą zabiegów chemicznych.

Obrazowanie i rekonstrukcja 3D struktur naczyniowo-mózgowych u embrionalnego danio pręgowanego

Obrazowanie dynamicznego zachowania organelli i innych struktur subkomórkowych in vivo może rzucić światło na ich funkcję w warunkach fizjologicznych i chorobowych. W tym artykule przedstawiono metody genetycznego znakowania dwóch organelli, centrosomów i mitochondriów oraz obrazowania ich dynamiki w żywych zarodkach danio pręgowanego za pomocą mikroskopii szerokokątnej i konfokalnej.

Obrazowanie struktur subkomórkowych w żywym zarodku danio pręgowanego

Niniejsze badanie opisuje model zarodka danio pręgowanego do wizualizacji in vivo i analizy przyżyciowej infekcji związanej z biomateriałem w czasie na podstawie mikroskopii fluorescencyjnej. Model ten jest obiecującym systemem uzupełniającym modele zwierzęce ssaków, takie jak modele mysie, do badania zakażeń związanych z biomateriałem in vivo.

Model zarodka danio pręgowanego do wizualizacji in vivo i analizy przyżyciowej zakażenia Staphylococcus aureus związanego z biomateriałem

Ten protokół opisuje technikę wizualizacji zachowania i śmierci makrofagów u embrionalnego danio pręgowanego podczas infekcji Mycobacterium marinum. Uwzględniono etapy przygotowania bakterii, zakażenia zarodków i mikroskopii przyżyciowej. Technika ta może być stosowana do obserwacji zachowania komórek i śmierci w podobnych scenariuszach obejmujących infekcję lub sterylny stan zapalny.

Wizualizacja śmierci komórek litycznych makrofagów podczas infekcji prątkami w zarodkach danio pręgowanego za pomocą mikroskopii przyżyciowej

Poznaj metody obrazowania patogenezy Mycobacterium abscessus w zarodkach Danio rerio przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej. Technika ta umożliwia badanie interakcji bakterii z układem odpornościowym w czasie rzeczywistym.

Rozszyfrowywanie i obrazowanie patogenezy i sznurowania Mycobacterium abscessus w zarodkach danio pręgowanego

Przeglądaj więcej filmów