Prosta metoda automatycznej ekstrakcji próbek wody do fazy stałej do analizy immunologicznej małych zanieczyszczeń

Ogólnym celem tej metody przygotowania próbek jest wstępne zagęszczenie małych, organicznych zanieczyszczeń z próbek wody w sposób przyjazny dla użytkownika, ekonomiczny i zautomatyzowany. Metoda ta może zastąpić standardowe procesy SPE podczas badania zanieczyszczenia próbek wody za pomocą metod immunodetekcji, takich jak testy immunologiczne na płytkach studziennych lub bioczujniki. Główną zaletą tej techniki jest to, że procedura SPE jest zautomatyzowana, a powierzchnia zajmowana przez instrumenty i koszt są niskie w porównaniu z tradycyjnymi podejściami.

Ponadto wydajność procesu wzbogacania odpowiada wymaganiom analizy testów immunologicznych zarówno pod względem niskiej zawartości rozpuszczalnika, jak i wydajności wstępnego zatężania. Najpierw odfiltruj 100-milimetrową próbkę wody za pomocą filtra o wielkości nalewania w punkcie zerowym o wielkości nalewania o wielkości dwóch mikrometrów. Przefiltrowaną próbkę umieścić w szklanej butelce z gwintem GL 45.

Przygotuj 300 mikrolitrów eluentu, rozcieńczając metanol w wodzie dejonizowanej do 50 procent objętości w szczelnej probówce. Następnie przygotuj zawiesinę 20 miligramów na mililitr cząstek sorbentu oktadecylowo-krzemionkowego, dodając 1 600 mikrolitrów metanolu, a następnie 400 mikrolitrów wody dejonizowanej do 40 miligramów sorbentu z odwróconymi fazami w szklanym podłożu. Szczelnie zamknij pokrywę i wymieszaj mikserem wirowym.

Umieść nylonową membranę o wielkości porów 11 mikrometrów na podwójnej warstwie tkanki przeciwkurzowej. Wytnij dwie małe części w membranie za pomocą stempla o średnicy trzech milimetrów. Następnie chwyć jedną z małych membran za pomocą kleszczyków filtracyjnych z płaskim końcem i umieść ją po jednej stronie kolumny.

Następnie przykręć płaskie dolne złącze z rurką i dokręć. Następnie narysuj strzałkę na korpusie kolumny, wskazując w kierunku końca, na którym umieszczono membranę. W tym momencie zabezpiecz kolumnę na uchwycie strzałką skierowaną w dół.

Podłącz pustą jednorazową strzykawkę o pojemności 10 mililitrów do końca rurki kolumny za pomocą dolnych łączników blokujących. Wymieszać zawiesinę sorbentu za pomocą mieszalnika wirowego i szybko odpipetować 100 mikrolitrów w środku kolumny. Podczas wstrzykiwania należy delikatnie zassać odpipetowany roztwór przez membranę, używając strzykawki drugą ręką.

Przygotowanie kolumny SPE jest bardzo ważne. Należy upewnić się, że roztwór jest prawidłowo zasysany przez membranę za pomocą strzykawki podczas wstrzykiwania zawiesiny cząstek do kolumny. W przeciwnym razie cząstki nie będą gęsto upakowane.

Powtórzyć poprzedni proces jeszcze dwa razy, mieszając zawiesinę podstawową między wszystkimi etapami pipetowania, aby zapewnić jednorodne zawieszenie cząstek w roztworze. Po załadowaniu całej zawiesiny i wysuszeniu jej przez zassanie strzykawką, należy przytrzymać strzykawkę na miejscu i umieścić drugą nylonową membranę na górze, używając kleszczyków drugą ręką. Następnie przykręcić drugi łącznik rurką i wyrzucić strzykawkę.

W tym momencie dokręć kolumnę na urządzeniu SPE za pomocą dolnych łączników zamka. Podłącz butelkę zawierającą próbkę do urządzenia, nakręcając na nią dołączoną nasadkę zabezpieczającą GL 45. Załaduj 200 mikrolitrów eluentu do zbiornika eluentu.

Następnie załaduj 800 mikrolitrów wody dejonizowanej do zbiornika rozcieńczającego. Sprawdź, czy regulator ciśnienia jest w pozycji zamkniętej, obracając go do tyłu zgodnie z ruchem wskazówek zegara, aż dalszy ruch nie będzie możliwy. Po włączeniu prototypu należy wprowadzić wartości 580 dla pset i 30 dla delta pset.

Aby wyregulować regulator ciśnienia, uruchom pompę. Następnie ręcznie przekręć regulator ciśnienia, aż wartość odczytana dla preg będzie gorsza, ale bliska 320 milibarów. Po zatrzymaniu pompy należy uruchomić procedurę SPE, naciskając start w kąciku trybu automatycznego.

Po zakończeniu procedury SPE zamknij małą próbkę i przechowuj w ciemności w temperaturze od czterech do pięciu stopni Celsjusza, aż do analizy ELISA. Aby wyczyścić system, przygotuj 10 mililitrowy roztwór 70 procent objętości metanolu w szklanej butelce z gwintem GL 45. Odłącz kolumnę SPE i podłącz rurki ze złączami.

W trybie automatycznym wybierz plik Czyszczenie i uruchom go z tymi samymi ustawieniami ciśnienia, które były wcześniej używane dla pset, delta pset i preg. Powtarzalność wypełnienia sorbentu oceniano poprzez suszenie i ważenie pipetowanego sorbentu w szklanych żłobkach. Dla próbek o objętości 100 mililitrów przetestowano powtarzalność czasu iniekcji.

Stężenia początkowych i wstępnie skoncentrowanych próbek wzbogaconych określono przy użyciu komercyjnego zestawu ELISA zawierającego 17 beta-estradiolu. Z krzywych kalibracyjnych jasno wynika, że stosunek metanolu ze wzbogaconej próbki nie ma wpływu na czułość testu immunologicznego. Odzysk 128, plus minus 22 procent i 107 plus minus sześć procent, obliczono odpowiednio dla wody dejonizowanej i sztucznej wody morskiej.

Po opanowaniu przygotowanie kolumny SPE można wykonać w mniej niż pięć minut, jeśli zostanie wykonane prawidłowo. Cała procedura SPE może zostać zakończona w czasie krótszym niż jedna godzina. Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się naukami o środowisku do zbadania rozwoju metod immunodetekcji do monitorowania małych zanieczyszczeń organicznych.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przygotować próbki wody za pomocą naszego ekonomicznego, zautomatyzowanego urządzenia do analizy zanieczyszczeń za pomocą testów immunologicznych. Nie zapominaj, że praca z zanieczyszczeniami organicznymi i rozpuszczalnikami może być niebezpieczna, a podczas wykonywania tego procesu należy zawsze podejmować środki ostrożności, takie jak noszenie odpowiednich rękawic i okularów ochronnych.