Name: Króliczy model przyspieszonej miażdżycy: perspektywa metodologiczna uszkodzenia balonika tętnicy biodrowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Poznaj metodę indukowania miażdżycowych blaszek miażdżycowych u królików poprzez chirurgiczne uszkodzenie śródbłonka tętnicy biodrowej i karmienie dietą aterogenną. Model ten umożliwia badanie rozwoju płytki miażdżycowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Szwajcarską Narodową Fundację Nauki Grant 150271.

Ten eksperymentalny protokół został zatwierdzony przez Kantonalny Urząd Weterynaryjny we Fryburgu i Szwajcarski Federalny Urząd Weterynaryjny w Szwajcarii (FR 2015/58).
UWAGA: Wykorzystano samce królików NZW o wadze od 2,8 do 3,2 kg. Zwierzęta trzymano w konwencjonalnych warunkach (12-godzinny cykl światła i ciemności, dostarczany ad libitum woda i pożywienie). Przed denudacją balonową zwierzęta aklimatyzowano przez 1 tydzień, podczas którego karmiono je normalną dietą żywieniową. Po 1 tygodniu aklimatyzacji króliki przestawiono na dietę aterogenną składającą się z diety wysokotłuszczowej (8,6%) i nasyconej kwasami tłuszczowymi z 205 mg/kg cholesterolu (1%) przez cały czas trwania badania. Uszkodzenie balonu w lewej tętnicy biodrowej wykonywano 1 tydzień po rozpoczęciu diety, a zwierzęta uśmiercano po 2 tygodniach lub 4 tygodniach od uszkodzenia balonu.
1. Procedury przedoperacyjne
<ol>
	<li>Wysterylizuj wszystkie narzędzia chirurgiczne przed użyciem za pomocą sterylizatora z kulkami szklanymi lub innego odpowiedniego narzędzia.</li>
	<li>Przygotuj i sprawdź zespół cewnika balonowego.
	<ol>
		<li>Podłączyć strzykawkę typu luer lock o pojemności 1 ml wypełnioną solą fizjologiczną do części cewnika balonowego typu luer-lock. Uważnie monitoruj, czy nie ma uwięzionego powietrza. Sprawdź szczelności i upewnij się, że balon jest prawidłowo napompowany, naciskając tłok strzykawki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zważ królika i włącz podkładkę termiczną do temperatury 37 °C.</li>
	<li>Należy użyć roztworu buprenorfiny o stężeniu 0,3 mg/ml. Dawkę 0,01 mg/kg należy wstrzyknąć podskórnie.</li>
	<li>Znieczulić królika 5% izofluranem i 5 l/minO2 w komorze indukcyjnej przez 10 - 15 minut.</li>
	<li>Umieść znieczulonego królika na poduszce grzewczej umieszczonej na platformie operacyjnej. Umieść plaster i klipsy, aby monitorować temperaturę, oddech i elektrokardiogram.</li>
	<li>Przymocuj pysk królika do maski na twarz podłączonej do odpowiedniego aparatu do znieczulania. Utrzymać znieczulenie izofluranem (4,0% przy 2,5 l/minO2). Potwierdź prawidłowe znieczulenie (wskazane brakiem napięcia mięśniowego oraz utratą odruchów wymiotnych i małżowin usznych).</li>
	<li>Nałóż maść okulistyczną na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Ułóż królika sterylnym prześcieradłem chirurgicznym, tak aby odsłonięta była tylko kończyna dolna.</li>
</ol>
2. Protokół chirurgiczny
<ol>
	<li>Usuń włosy z obszaru brzusznego tuż pod stawami kolanowymi za pomocą maszynki do strzyżenia włosów zwierzęcych.</li>
	<li>Przetrzyj obszar odpowiednim środkiem dezynfekującym, aby oczyścić skórę i usunąć luźne włosy.</li>
	<li>Zlokalizuj tętnicę odpiszczelową i wykonaj małe nacięcie skóry o długości około 1,5 cm za pomocą skalpela.</li>
	<li>Odsłoń niewielką część tętnicy odpiszczelowej za pomocą małych zakrzywionych kleszczy, nie uszkadzając żyły udowej i nerwu udowego.</li>
	<li>Umieść dwie luźne pętle ligatury (jedwab 5-0) pod tętnicą odpiszczelową i zawiąż jedną pętlę ligatury w kierunku dystalnego końca tętnicy. Umieść zacisk mikronaczyniowy nad ligaturą, aby zatrzymać przepływ krwi z tętnicy biodrowej.</li>
	<li>Stosować miejscowo jedną kroplę papaweryny, aby rozszerzyć tętnicę i zapobiec skurczowi naczyń krwionośnych.</li>
	<li>Podnieś tętnicę odpiszczelową za pomocą zawiązanej ligatury i wykonaj małe nacięcie arterotomii za pomocą igły o rozmiarze 24.</li>
	<li>Podnieś płaty nacinające za pomocą cienkich kleszczyków i powoli wprowadź wytrych, wytrych, żylny lub igłę prowadzącą do światła tętnicy.</li>
	<li>Wprowadzić 2-francuski cewnik do embolektomii tętniczej Fogarty'ego do tętnicy odpiszczelowej. Usuń wytrych żylnych i zaciski mikronaczyniowe.</li>
	<li>Przesuń cewnik do szóstego znaku (20 - 25 cm) odpowiadającego pozycji około 2-5 cm powyżej rozwidlenia biodrowego.</li>
	<li>Napełnij balon 0,1 ml soli fizjologicznej za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml lub przy nominalnym ciśnieniu 6 atm za pomocą regulowanego inflatora ręcznego, jak opisano w 16,22.</li>
	<li>Przytrzymaj cewnik balonowy kleszczami i przeciągnij do tyłu o 6 cm przez tętnicę biodrową w kierunku punktu wprowadzenia, jednocześnie obracając cewnik.</li>
	<li>Opróżnić balon, odciągając tłok strzykawki.</li>
	<li>Powtórz kroki od 2.10 do 2.13 trzy razy, aby zapewnić całkowite obnażenie śródbłonka.</li>
	<li>Usuń cewnik i natychmiast zawiąż pętlę więzadła tuż nad miejscem arteriotomii, aby zatrzymać krwawienie.</li>
	<li>Nałóż odpowiedni środek antyseptyczny na całym obwodzie rany i usuń skrzepy krwi. Zamknij nacięcie skóry szwem 5-0 i zdezynfekuj miejsce operacji roztworem jodu powidonu.</li>
	<li>Powtórz kroki od 2.1 do 2.16 na biodrze przeciwległym, używając nowego cewnika.</li>
	<li>Wymaz maść okulistyczną z oczu.</li>
</ol>
3. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Sulfadoksynę w dawce 40 mg/kg mc. i trimetoprim w dawce 8 mg/kg mc. lub inny odpowiedni antybiotyk należy podać bezpośrednio po zabiegu chirurgicznym.</li>
	<li>W okresie rekonwalescencji po znieczuleniu trzymaj królika nad poduszką rozgrzewającą umieszczoną w czystej klatce z autoklawy.</li>
	<li>Usuń łatkę monitorującą i klipsy.</li>
	<li>Po wyzdrowieniu króliki należy umieścić z powrotem w ich domowych klatkach. Buprenorfinę należy wstrzykiwać podskórnie w dawce 0,05 - 0,1 mg/kg mc. po operacji co 6 - 12 godzin przez 48 godzin. Kontynuuj dietę miażdżycową przez kolejne dwa tygodnie lub cztery tygodnie.</li>
</ol>
4. Pobieranie tkanek i analiza składu płytki nazębnej
<ol>
	<li>Po dwóch tygodniach (w przypadku wczesnej cienkiej płytki nazębnej) lub trzech tygodniach uszkodzenia balonu, znieczulij królika za pomocą izofluranu w podobny sposób, jak opisano powyżej.</li>
	<li>Otwórz klatkę piersiową i poddaj króliki eutanazji przez wykrwawienie wewnątrzsercowe.</li>
	<li>Odizoluj tętnice biodrowe zgodnie z opisem w 23.
	<ol>
		<li>Krótko otwórz brzuch i odsłoń zaotrzewnową. Prześledź aortę w kierunku rozwidlenia biodrowego i zawiąż ją powyżej rozwidlenia. Ostrożnie usuń otaczające tkanki, aby odsłonić i wyizolować obie tętnice biodrowe.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wypreparuj obie tętnice biodrowe i zanurz je w lodowatym roztworze soli fizjologicznej buforowanym fosforanami. Usuń skrzepy za pomocą kleszczy. Podziel każdą tętnicę biodrową na 4-6 segmentów, aby scharakteryzować grubość blaszki miażdżycowej w całej tętnicy.</li>
	<li>Natychmiast zatopić odcinki tętnicze w formie zawierającej związek o optymalnej temperaturze cięcia, zamrozić za pomocą ciekłego azotu i utrzymać w temperaturze -70 °C. Przygotować skrawki o grubości 5 μm za pomocą kriostatu zgodnie z opisem w 24.</li>
	<li>Wykonaj barwienie histologiczne, immunofluorescencyjne lub immunohistochemiczne pod kątem morfometrii, zawartości lipidów płytki nazębnej i komórek zgodnie z opisem w 10,25. 
	UWAGA: Krótko przepłukać odcinki tętnic solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) i przepuścić powietrze za pomocą 0,2% Tritonu. Przepłukać skrawki PBS i zablokować niespecyficzne miejsca 2% albuminą surowicy bydlęcej przez 30 minut. Inkubować skrawki przez 1 godzinę w temperaturze 37 °C z aktyną anty α-SM (1:200) lub przeciwciałem RAM11 (1:200). Przepłukać skrawki PBS i inkubować je z odpowiednim przeciwciałem drugorzędowym przez 30 minut w temperaturze 37 °C. Przemyć ponownie PBS i dodawać Hoechst (5 μg/ml) przez 10 minut w celu wykrycia jąder.</li>
</ol>

<ol><li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2015+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2015 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 131, e29-e322 (2015).</li>
<li>Boone, L. R., Brooks, P. A., Niesen, M. I., Ness, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+resistance+to+dietary+cholesterol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipids%22%5BJournal%5D)">Mechanism of resistance to dietary cholesterol.</a> J Lipids. 2011, 101242(2011).</li>
<li>Kapourchali, F. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24868511">Animal models of atherosclerosis.</a> World J Clin Cases. 2, 126-132 (2014).</li>
<li>Carter, C. P., Howles, P. N., Hui, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+in+cholesterol+absorption+efficiency+among+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Genetic variation in cholesterol absorption efficiency among inbred strains of mice.</a> J Nutr. 127, 1344-1348 (1997).</li>
<li>Kolodgie, F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercholesterolemia+in+the+rabbit+induced+by+feeding+graded+amounts+of+low-level+cholesterol.+Methodological+considerations+regarding+individual+variability+in+response+to+dietary+cholesterol+and+development+of+lesion+type%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Hypercholesterolemia in the rabbit induced by feeding graded amounts of low-level cholesterol. Methodological considerations regarding individual variability in response to dietary cholesterol and development of lesion type.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 16, 1454-1464 (1996).</li>
<li>Singh, V., Tiwari, R. L., Dikshit, M., Barthwal, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+to+study+atherosclerosis%3A+a+mechanistic+insight%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Vasc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Models to study atherosclerosis: a mechanistic insight.</a> Curr Vasc Pharmacol. 7, 75-109 (2009).</li>
<li>Dornas, W. C., Oliveira, T. T., Augusto, L. E., Nagem, T. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20857052">Experimental atherosclerosis in rabbits.</a> Arq Bras Cardiol. 95, 272-278 (2010).</li>
<li>Baumgartner, H. R., Studer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BEffects+of+vascular+catheterization+in+normo-+and+hypercholesteremic+rabbits%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Microbiol+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">[Effects of vascular catheterization in normo- and hypercholesteremic rabbits].</a> Pathol Microbiol (Basel). 29, 393-405 (1966).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+activation+of+vascular+cells+and+leukocytes+in+the+rabbit+aorta+after+balloon+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Sustained activation of vascular cells and leukocytes in the rabbit aorta after balloon injury.</a> Circulation. 88, 1788-1803 (1993).</li>
<li>Phinikaridou, A., Hallock, K. J., Qiao, Y., Hamilton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+rabbit+model+of+human+atherosclerosis+and+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">A robust rabbit model of human atherosclerosis and atherothrombosis.</a> J Lipid Res. 50, 787-797 (2009).</li>
<li>Nakazawa, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-eluting+stent+safety%3A+findings+from+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Cardiovasc+Ther%22%5BJournal%5D)">Drug-eluting stent safety: findings from preclinical studies.</a> Expert Rev Cardiovasc Ther. 6, 1379-1391 (2008).</li>
<li>Aikawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+lowering+by+diet+reduces+matrix+metalloproteinase+activity+and+increases+collagen+content+of+rabbit+atheroma%3A+a+potential+mechanism+of+lesion+stabilization%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Lipid lowering by diet reduces matrix metalloproteinase activity and increases collagen content of rabbit atheroma: a potential mechanism of lesion stabilization.</a> Circulation. 97, 2433-2444 (1998).</li>
<li>Jeanpierre, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+lipid+lowering+modifies+plaque+phenotype+in+rabbit+atheroma+after+angioplasty%3A+a+potential+role+of+tissue+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Dietary lipid lowering modifies plaque phenotype in rabbit atheroma after angioplasty: a potential role of tissue factor.</a> Circulation. 108, 1740-1745 (2003).</li>
<li>Durand, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+ruptured+plaques+in+the+rabbit+with+ultrasmall+superparamagnetic+particles+of+iron+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of ruptured plaques in the rabbit with ultrasmall superparamagnetic particles of iron oxide.</a> J Vasc Res. 44, 119-128 (2007).</li>
<li>Stadius, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+and+cellular+characteristics+of+the+iliac+artery+response+to+acute+balloon+injury.+An+angiographic%2C+morphometric%2C+and+immunocytochemical+analysis+in+the+cholesterol-fed+New+Zealand+white+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Time course and cellular characteristics of the iliac artery response to acute balloon injury. An angiographic, morphometric, and immunocytochemical analysis in the cholesterol-fed New Zealand white rabbit.</a> Arterioscler Thromb. 12, 1267-1273 (1992).</li>
<li>Khanna, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+diet+withdrawal+leads+to+an+initial+plaque+instability+and+subsequent+regression+of+accelerated+iliac+artery+atherosclerosis+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cholesterol diet withdrawal leads to an initial plaque instability and subsequent regression of accelerated iliac artery atherosclerosis in rabbits.</a> PLoS One. 8, e77037(2013).</li>
<li>Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+resveratrol+on+intimal+hyperplasia+after+endothelial+denudation+in+an+experimental+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of resveratrol on intimal hyperplasia after endothelial denudation in an experimental rabbit model.</a> Life Sci. 68, 153-163 (2000).</li>
<li>Li, M., Zhang, Y., Ren, H., Zhang, Y., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+clopidogrel+on+the+inflammatory+progression+of+early+atherosclerosis+in+rabbits+model%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Effect of clopidogrel on the inflammatory progression of early atherosclerosis in rabbits model.</a> Atherosclerosis. 194, 348-356 (2007).</li>
<li>Nakazawa, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+polymer-based+comparator+drug-eluting+stents+using+a+rabbit+model+of+iliac+artery+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Cardiovasc+Interv%22%5BJournal%5D)">Evaluation of polymer-based comparator drug-eluting stents using a rabbit model of iliac artery atherosclerosis.</a> Circ Cardiovasc Interv. 4, 38-46 (2011).</li>
<li>Van Dyck, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolute+and+Xience+V+polymer-based+drug-eluting+stents+compared+in+an+atherosclerotic+rabbit+double+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22Catheter+Cardiovasc+Interv%22%5BJournal%5D)">Resolute and Xience V polymer-based drug-eluting stents compared in an atherosclerotic rabbit double injury model.</a> Catheter Cardiovasc Interv. 81, E259-E268 (2013).</li>
<li>Abran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validating+a+bimodal+intravascular+ultrasound+%28IVUS%29+and+near-infrared+fluorescence+%28NIRF%29+catheter+for+atherosclerotic+plaque+detection+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Validating a bimodal intravascular ultrasound (IVUS) and near-infrared fluorescence (NIRF) catheter for atherosclerotic plaque detection in rabbits.</a> Biomed Opt Express. 6, 3989-3999 (2015).</li>
<li>Kanamasa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+tissue+plasminogen+activator+prevents+intimal+hyperplasia+after+balloon+angioplasty+in+hypercholesterolemic+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+Circ+J%22%5BJournal%5D)">Recombinant tissue plasminogen activator prevents intimal hyperplasia after balloon angioplasty in hypercholesterolemic rabbits.</a> Jpn Circ J. 60, 889-894 (1996).</li>
<li>Pai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+in-stent+restenosis+in+rabbit+iliac+arteries+with+photodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Vasc+Endovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Inhibition of in-stent restenosis in rabbit iliac arteries with photodynamic therapy.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 30, 573-581 (2005).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21356883">Cryosectioning tissues.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li>
<li>Chaytor, A. T., Bakker, L. M., Edwards, D. H., Griffith, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin-mimetic+peptides+dissociate+electrotonic+EDHF-type+signalling+via+myoendothelial+and+smooth+muscle+gap+junctions+in+the+rabbit+iliac+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Connexin-mimetic peptides dissociate electrotonic EDHF-type signalling via myoendothelial and smooth muscle gap junctions in the rabbit iliac artery.</a> Br J Pharmacol. 144, 108-114 (2005).</li>
<li>Zhang, W., Trebak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+balloon+injury+and+intraluminal+administration+in+rat+carotid+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Vascular balloon injury and intraluminal administration in rat carotid artery.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Maillard, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+percutaneous+adenovirus-mediated+Gax+gene+delivery+to+the+arterial+wall+in+double-injured+atheromatous+stented+rabbit+iliac+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of percutaneous adenovirus-mediated Gax gene delivery to the arterial wall in double-injured atheromatous stented rabbit iliac arteries.</a> Gene Ther. 7, 1353-1361 (2000).</li>
<li>Sharif, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-eluting+stents%3A+adenovirus-mediated+delivery+of+eNOS+to+the+blood+vessel+wall+accelerates+re-endothelialization+and+inhibits+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene-eluting stents: adenovirus-mediated delivery of eNOS to the blood vessel wall accelerates re-endothelialization and inhibits restenosis.</a> Mol Ther. 16, 1674-1680 (2008).</li>
<li>Lee, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rabbit+model+for+a+preclinical+comparison+of+coronary+stent+types+in-vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+Circ+J%22%5BJournal%5D)">Development of a rabbit model for a preclinical comparison of coronary stent types in-vivo.</a> Korean Circ J. 43, 713-722 (2013).</li>
<li>Tulis, D. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18287662">Rat carotid artery balloon injury model.</a> Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).</li>
<li>Asada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inflation+pressure+of+balloon+catheter+on+vascular+injuries+and+subsequent+development+of+intimal+hyperplasia+in+rabbit+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Effects of inflation pressure of balloon catheter on vascular injuries and subsequent development of intimal hyperplasia in rabbit aorta.</a> Atherosclerosis. 121, 45-53 (1996).</li>
<li>Dornas, W. C., Oliveira, T. T., Augusto, L. E., Nagem, T. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20857052">Experimental atherosclerosis in rabbits.</a> Arq Bras Cardiol. 95, 272-278 (2010).</li>
<li>Waksman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PhotoPoint+photodynamic+therapy+promotes+stabilization+of+atherosclerotic+plaques+and+inhibits+plaque+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">PhotoPoint photodynamic therapy promotes stabilization of atherosclerotic plaques and inhibits plaque progression.</a> J Am Coll Cardiol. 52, 1024-1032 (2008).</li>
<li>Fernandez-Parra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+Study+of+Paclitaxel+Concentration+after+Drug-Eluting+Balloon+Angioplasty+in+the+Iliac+Artery+of+Healthy+and+Atherosclerotic+Rabbit+Models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Interv+Radiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic Study of Paclitaxel Concentration after Drug-Eluting Balloon Angioplasty in the Iliac Artery of Healthy and Atherosclerotic Rabbit Models.</a> J Vasc Interv Radiol. 26, 1380-1387 (2015).</li>
<li>Dussault, S., Dhahri, W., Desjarlais, M., Mathieu, R., Rivard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elsibucol+inhibits+atherosclerosis+following+arterial+injury%3A+multifunctional+effects+on+cholesterol+levels%2C+oxidative+stress+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Elsibucol inhibits atherosclerosis following arterial injury: multifunctional effects on cholesterol levels, oxidative stress and inflammation.</a> Atherosclerosis. 237, 194-199 (2014).</li>
<li>Manderson, J. A., Mosse, P. R., Safstrom, J. A., Young, S. B., Campbell, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balloon+catheter+injury+to+rabbit+carotid+artery.+I.+Changes+in+smooth+muscle+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%22%5BJournal%5D)">Balloon catheter injury to rabbit carotid artery. I. Changes in smooth muscle phenotype.</a> Arteriosclerosis. 9, 289-298 (1989).</li>
<li>Miyake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+neointimal+formation+after+angioplasty+using+nuclear+factor-kappaB+decoy+oligodeoxynucleotide-coated+balloon+catheter+in+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Cardiovasc+Interv%22%5BJournal%5D)">Prevention of neointimal formation after angioplasty using nuclear factor-kappaB decoy oligodeoxynucleotide-coated balloon catheter in rabbit model.</a> Circ Cardiovasc Interv. 7, 787-796 (2014).</li>
<li>Fulcher, J., Patel, S., Nicholls, S. J., Bao, S., Celermajer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+for+serial+in+vivo+imaging+of+aortic+plaque+in+the+rabbit%3A+a+preliminary+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Heart%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography for serial in vivo imaging of aortic plaque in the rabbit: a preliminary experience.</a> Open Heart. 2, e000314(2015).</li>
<li>Abela, O. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque+Rupture+and+Thrombosis%3A+the+Value+of+the+Atherosclerotic+Rabbit+Model+in+Defining+the+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Plaque Rupture and Thrombosis: the Value of the Atherosclerotic Rabbit Model in Defining the Mechanism.</a> Curr Atheroscler Rep. 18, 29(2016).</li>
<li>Yamashita, A., Asada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+thrombosis+on+atherosclerotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of thrombosis on atherosclerotic lesions.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 424929(2011).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.

Model miażdżycy tętnicy biodrowej królika jest szeroko stosowany w badaniach nad miażdżycą. Dzięki temu protokołowi u królików szybko rozwinęły się poważniejsze i bardziej zaawansowane blaszki miażdżycowe w porównaniu z spontanicznymi zmianami powstałymi przy diecie opartej wyłącznie na cholesterolu. Co ważne, zwierzęta szybko wracają do zdrowia po operacji.
Głównym bodźcem do miażdżycy jest mechaniczne uszkodzenie spowodowane przez cewnik balonowy, który uszkadza śródbłonek i rozszerza ścianę...

Pęknięcie wrażliwych blaszek miażdżycowych jest jedną z głównych przyczyn zgonów w krajach uprzemysłowionych1. Chociaż badania prowadzone w ciągu ostatnich dziesięcioleci ujawniły kilka mechanizmów molekularnych i komórkowych zaangażowanych w progresję blaszki miażdżycowej, nadal potrzebne są ciągłe wysiłki, nie tylko w celu rozwikłania złożonego mechanizmu progresji choroby, ale także w celu przetestowania nowych podejść terapeutycznych. Zaproponowano kilka modeli zwierzęcych do badania miażdżycy. Manipulacje genetyczne, karmienie cholesterolem lub mechaniczne uszkodzenie śródbłonka to standardowe strategie wspólne dla większości zwierzęcych modeli miażdżycy, w tym myszy, królików lub świnek miniaturowych. Wśród nich króliki nowozelandzkie są wrażliwe na dietę cholesterolową, podczas gdy normalne szczury i myszy nie wchłaniają znacząco cholesterolu w diecie2,3,4. U królików spontanicznie rozwijają się zmiany w aorcie bogate w makrofagi z pewnym składnikiem włóknistym, gdy są karmione dietą bogatą w cholesterol5,6. Jednak długi czas przygotowania wynoszący 4-8 miesięcy do wywołania blaszek miażdżycowych poprzez podawanie samej diety cholesterolowej6,7 jest główną wadą dla większości ustawień eksperymentalnych. W pogoni za wywołaniem zmian chorobowych w stosunkowo krótkim czasie, Baumgarter i Studer8 opracowali kombinację diety wysokocholesterolowej i uszkodzenia balonu. Ogólnym celem tej techniki jest wywołanie blaszek miażdżycowych złożonych z komórek piankowatych (podobnych do smug tłuszczowych u ludzi) u królików z hipercholesterolemią w ciągu 2 tygodni. Niniejsza technika opisuje procedurę uszkodzenia ściany tętnicy w oparciu o metodę Baumgartera z wykorzystaniem cewnika balonowego wprowadzanego do tętnicy biodrowej królików z hipercholesterolemią NZW.
Razem z dietą bogatą w cholesterol, uraz wynikający z deśródbłonka wywołanego balonem doprowadzi do miażdżycy. Uszkodzenie balonu przyspiesza powstawanie zmian miażdżycowych i wytwarza płytkę nazębną o jednolitej wielkości i rozmieszczeniu. Pogrubienie błony wewnętrznej nasila się z czasem, a infiltracja komórek błony wewnętrznej rozpoczyna się w ciągu kilku dni po urazie. Smugi tłuszczowe ze znacznymi makrofagami zaczynają pojawiać się po 7 - 10 dniach od uszkodzenia balonu i są reprezentowane jako zmiana typu II zgodnie z klasyfikacją American Heart Association. Uszkodzenie balonu u królika jest często wykonywane w aorcie w celu zbadania składu płytki nazębnej. Śródbłonek neintimy wyraża wysoki poziom cząsteczki adhezji międzykomórkowej. Blaszki są związane z rozwarstwieniem przyśrodkowym i zmianami przybyszowymi. Zmiany miażdżycowe zbudowane są z lipidów, proliferujących komórek mięśni gładkich (SMC), włókien kolagenowych i komórek zapalnych, które gromadzą się pod zregenerowanym śródbłonkiem i mają głównie charakter typu II. Rozkład topologiczny blaszek króliczych był podobny do tego zgłaszanego w aorcie ludzkim 9,10 Zasadniczo aorta ma większy rozmiar w porównaniu z tętnicami biodrowymi i wytwarza blaszkę miażdżycową o większej długości. Jednak główną zaletą stosowania tętnicy biodrowej jako miejsca miażdżycy u królików jest jej dostępność, podobieństwo w zawartości mięśni do ludzkiej tętnicy wieńcowej11, równomierny rozwój zmian12, wysoka aktywność czynnika tkankowego13 oraz stały wymiar naczynia porównywalny z ludzką tętnicą wieńcową, co pozwala na ocenę komercyjnie produkowanych urządzeń do morfometrycznych i angiograficznych punktów końcowych. Metody inwazyjne i nieinwazyjne zostały zbadane w celu analizy blaszek miażdżycowych w tętnicach biodrowych królika u żywego zwierzęcia. Poprzednie doniesienia opisują zastosowanie obrazowania metodą rezonansu magnetycznego (MRI) za pomocą systemu MR o natężeniu 2,35 tesli 14 Ponadto cewniki do ultrasonografii wewnątrznaczyniowej (IVUS) lub optycznej tomografii koherentnej (OCT) mogą być odpowiednio stosowane do obrazowania blaszek miażdżycowych w tętnicach biodrowych królika. Tętnica biodrowa jest dostępna do obrazowania ultrasonograficznego przy użyciu echografii o wysokiej rozdzielczości, a za pomocą tej techniki można również badać aortę.
W ciągu ostatniej dekady, ten króliczy model uszkodzenia balonu pomógł lepiej zrozumieć mechanizmy progresji płytki nazębnej15i regresji płytki16. Ponadto model został wykorzystany do zbadania wpływu nowych środków terapeutycznych, takich jak statyny, standardowe leki przeciwpłytkowe, środki przeciwutleniające17,18 i stentów uwalniających leki, takich jak ewerolimus lub stent uwalniający zotarolimus19,20 na pogrubienie neointimal. Model ten został również wykorzystany do badania wewnątrznaczyniowego obrazowania fluorescencyjnego w bliskiej podczerwieni cewnik21.

<table><tbody><tr><td>Nowa Zelandia Białe króliki</td><td>Charles River laboratories, Francja</td><td>Cre:KBL(NZW)</td><td></td></tr><tr><td>Dieta bogata w cholesterol</td><td>Ssniff spezialdi&auml; dziesięć</td><td>Ssniff EF K Sterylizator kulek szklanych o wysokiej zawartości tłuszczu i cholesterolu</td><td></td></tr><tr><td>- Germinator 500</td><td>VWR, Leicestershire, Wielka Brytania</td><td>101326-488</td><td></td></tr><tr><td>Cewniki do embolektomii balonowej Fogarty, 2 francuskie</td><td>Edwards Lifesciences, Szwajcaria</td><td>120602F</td><td>Tylko do jednorazowego użytku</td></tr><tr><td>Strzykawka Luer Lock</td><td>Becton, Dickinson and Company, USA</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Thermopad Typ 226</td><td>Solis, Szwajcaria AG</td><td>397387</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina- Temgesic</td><td>Reckitt Benckiser AG, Szwajcaria</td><td>7.68042E+12</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care, Inc, Betlejem, PA 18017</td><td>2667-46-7</td><td></td></tr><tr><td>Maszyna anestezjologiczna-combi-vet Podstawowy system anestezjologiczny</td><td>Rothacher Medical GmbH, Szwajcaria</td><td>CV 30-301-A</td><td></td></tr><tr><td>Weterynaryjny monitor parametrów życiowych Cardell touch</td><td>Midmark, Ohio, Stany Zjednoczone</td><td>8013-001</td><td></td></tr><tr><td>Maść okulistyczna - Humigel</td><td>Virbac, Francja</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maszynki do strzyżenia włosów dla zwierząt</td><td>Aesculap AG, Niemcy</td><td>GT420</td><td></td></tr><tr><td>Środek dezynfekująco-roztwór betadyny</td><td>MundipharmaMedicalCompany, Szwajcaria</td><td>14671-1203</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 Kleszcze</td><td>FST Niemcy</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Średnie i małe mikronożyczki</td><td>Medline International Szwajcaria S&agrave; rl</td><td>UC4337</td><td></td></tr><tr><td>Zaciski mikronaczyniowe</td><td>FST, Niemcy</td><td>18051-28</td><td></td></tr><tr><td>Papaverine</td><td>ESCA chemicals, Szwajcaria</td><td>RE 356 803</td><td></td></tr><tr><td>Vein Pick</td><td>Harvard Apparatus, Cambridge, Wielka Brytania</td><td>72-4169</td><td>Tylko do jednorazowego użytku</td></tr><tr><td>Saline</td><td>Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Szwajcaria</td><td>1330055</td><td></td></tr><tr><td>Szew</td> <td>Polysorb 5-0Covidien AG, Szwajcaria</td><td>UL 202</td><td>Monofilament</td></tr><tr><td>Sulfadoxine i trimetoprim-trimetazol</td><td>Werner Stricker AG, Szwajcaria</td><td>Swissmedic Nr. 50'361</td><td></td></tr><tr><td>Środek antyseptyczny- Octenisept</td><td>Sch&uuml; lke & Mayr AG, Szwajcaria</td><td>GTIN: 4032651214068</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem</td><td>Roth</td><td>1058.1</td><td></td></tr><tr><td>Isobutanol-2-methylbutane</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>M32631-1L</td><td></td></tr><tr><td>Optymalna temperatura cięcia compound-Tissue-Tek</td><td>VWR Chemicals, Belgia</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica, Glattbrugg, Szwajcaria</td><td>Leica CM1860 UV</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełko szklane Superfrost Plus</td><td>Thermo Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>MHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>Eozyna 0,5% aq.</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>HT110232-1L</td><td></td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>O0625-25G</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-przeciwciało aktynowe mięśni gładkich</td><td>Abcam, Wielka Brytania.</td><td>ab7817</td><td></td></tr><tr><td>Klon makrofagów Przeciwciało RAM11</td><td>DAKO, Szwajcaria</td><td>M063301</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Abcam, Wielka Brytania.</td><td>ab145596</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało wtórne poliklonalne kozy (Chromeo 546)</td><td>Abcam, Wielka Brytania.</td><td>ab60316</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488/547</td><td>Abcam, Wielka Brytania.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Podłoże montażowe glicerynowe, wodne</td><td>DAKO, Szwajcaria</td><td>C056330</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksylina do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>H3136-25G</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek żelaza do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>Jod do barwienia Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>207772-100G</td><td></td></tr><tr><td>Jodek potasu do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>60400-100G-F</td><td></td></tr><tr><td>Błękit alcki do barwienia Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>A5268-10G</td><td></td></tr><tr><td>Silny amoniak do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>320145-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Brylantowa croceina MOO do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>210757-50G</td><td></td></tr><tr><td>Kwas kwasowy do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>F8129-50G</td><td></td></tr><tr><td>Tiosiarczan sodu do barwienia pentachromem</td><td>Movat Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>72049-250G</td><td></td></tr><tr><td>Kwas fosfatungsowy do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>79690-100G</td><td></td></tr><tr><td>Crocin do pentachromu Movat barwienie</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>17304-5G</td><td></td></tr><tr><td>EUKITT do barwienia pentachromem Movat</td><td>Sigma-Aldrich, Szwajcaria</td><td>03989-100ML</td><td></td></tr></tbody></table>

króliczy model przyspieszonej miażdżycy: perspektywa metodologiczna uszkodzenia balonika tętnicy biodrowej

The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury

Ostry zespół wieńcowy wynikający z niedrożności naczyń wieńcowych po rozwoju i pęknięciu blaszki miażdżycowej jest główną przyczyną zgonów w uprzemysłowionym świecie. Króliki nowozelandzkie białe (NZW) są szeroko stosowane jako model zwierzęcy do badań nad miażdżycą. Rozwijają się u nich spontaniczne zmiany chorobowe, gdy są karmione dietą miażdżycową; Wymaga to jednak długiego czasu od 4 do 8 miesięcy. Aby jeszcze bardziej wzmocnić i przyspieszyć miażdżycę, często stosuje się połączenie diety miażdżycowej i mechanicznego uszkodzenia śródbłonka. Przedstawiona procedura indukcji blaszek miażdżycowych u królików wykorzystuje cewnik balonowy do przerwania śródbłonka w lewej tętnicy biodrowej królików NZW karmionych dietą aterogenną. Takie mechaniczne uszkodzenia spowodowane przez cewnik balonowy indukują łańcuch reakcji zapalnych inicjujących akumulację lipidów w neonabłonie w sposób zależny od czasu. Blaszka miażdżycowa po urazie balonu wykazuje pogrubienie neodintymiczne z rozległym naciekiem lipidowym, wysoką zawartością komórek mięśni gładkich i obecnością komórek piankowatych pochodzących z makrofagów. Ta technika jest prosta, powtarzalna i wytwarza blaszkę miażdżycową o kontrolowanej długości w tętnicy biodrowej. Cała procedura trwa 20 - 30 minut. Zabieg jest bezpieczny przy niskiej śmiertelności, a także zapewnia wysoki sukces w uzyskiwaniu znacznych zmian w błonie wewnętrznej. Zabieg uszkodzenia tętnic wywołanego cewnikiem balonowym powoduje miażdżycę w ciągu dwóch tygodni. Model ten może być wykorzystany do badania patologii choroby, diagnostyki obrazowej i oceny nowych strategii terapeutycznych.

Uszkodzenie balonowe tętnicy biodrowej zostało wykonane pomyślnie i bez powikłań (Rysunek 1). Całkowity czas operacji wynosił od 20 do 30 min w przypadku uszkodzeń wykonanych w jednej tętnicy biodrowej oraz od 35 do 45 min w przypadku uszkodzeń obu tętnic. Króliki regenerowały się w ciągu 1 h po uszkodzeniu balonowym. Wszystkie zwierzęta wydawały się zdrowe, bez znacznej utraty masy ciała. Nie stwierdzono infekcji, obrzęków ani zakrzepicy tętniczej. Obszar ra...

Zwierzęce modele miażdżycy są niezbędne do zrozumienia mechanizmu i zbadania nowszych metod zapobiegania rozwojowi lub pękaniu płytki nazębnej, głównej przyczynie zgonów w uprzemysłowionym świecie. Protokół ten wykorzystuje połączenie uszkodzenia balonu i diety bogatej w cholesterol w celu wywołania blaszek miażdżycowych w tętnicy biodrowej królika.

Króliczy model przyspieszonej miażdżycy: perspektywa metodologiczna uszkodzenia balonika tętnicy biodrowej

Acute coronary syndrome resulting from coronary occlusion following atherosclerotic plaque development and rupture is the leading cause of death in the ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie tworzenia się blaszek miażdżycowych u królików poprzez chirurgiczne uszkodzenie śródbłonka ich lewych tętnic biodrowych oraz podawanie im diety aterogennej. Samowystarczalne uszkodzenie u królików jest często przeprowadzane w aorcie w celu badania składu blaszki miażdżycowej. Jednakże tętnica biodrowa jest bardzo podobna do ludzkiej tętnicy wieńcowej, co czyni ją atrakcyjnym miejscem do modelowania blaszek miażdżycowych.Jednorodność zmian w obrębie tkanki mięśniowej, aktywność czynników tkankowych oka oraz spójne wymiary naczyń w tętnicy biodrowej wewnętrznej królika są porównywalne z parametrami tętnicy wieńcowej człowieka. W konsekwencji umożliwia to ocenę komercyjnie produkowanych urządzeń pod kątem punktów końcowych morfometrycznych i angiograficznych. Procedurę zaprezentuje Aurelien Frobert, współpracownik z mojego laboratorium.Należy upewnić się, że wszystkie narzędzia chirurgiczne zostały wysterylizowane, na przykład za pomocą sterylizatora koralikowego. Następnie należy przygotować i sprawdzić dwa zestawy cewników balonowych. Do każdego z nich należy przymocować strzykawkę 1 mL z końcówką Luer-lock wypełnioną solą fizjologiczną, a następnie sprawdzić obecność pęcherzyków powietrza za pomocą mechanizmu pompowania balonu.Następnie ustaw temperaturę podkładki termicznej na platformie chirurgicznej na 37 °C. Potem zważ królika. Następnie podaj zastrzyk buprenorfiny i znieczul królika, stosując 5% isofluran z przepływem pięciu litrów na minutę przez 10 do 15 minut.Teraz należy umieścić znieczulonego królika na macie grzewczej na platformie chirurgicznej. Należy podłączyć czujniki do monitorowania temperatury i oddychania królika oraz do rejestracji elektrokardiogramów. Następnie należy założyć maskę twarzową w celu podawania 4% isofluranu z przepływem 2,5 litrów na minutę.Następnie potwierdź odpowiedni poziom znieczulenia, sprawdzając zanik odruchu wymiotnego i rogówkowego. Wskaźnikiem głębokiej anestezji jest również ogólne rozluźnienie napięcia mięśniowego. W kolejnym kroku nanieś maść antybiotykową do obu oczu.Następnie, za pomocą maszynki do strzyżenia zwierząt, usuń owłosienie z obszaru brzusznego tuż poniżej stawów kolanowych. Po tym usuń luźną sierść i oczyść odsłoniętą skórę, wykonując naprzemiennie trzy przemycia 70% ethanol oraz betadyną, a następnie odizoluj zwierzę sterylnymi obłożeniami, pozostawiając odsłoniętą jedynie kończynę dolną. Aby rozpocząć zabieg chirurgiczny, zlokalizuj tętnicę odpiszczelową i wykonaj nacięcie o długości 1,5 centymetra.Następnie, używając małych zakrzywionych pęsety, ostrożnie odsłoń niewielki odcinek tętnicy saphénous. Należy zachować ostrożność, aby nie uszkodzić żyły udowej ani nerwu udowego. Podczas tego odsłaniania bardzo ważne jest dokładne oczyszczenie tętnicy.Następnie umieść dwie luźne pętle ligatury pod tętnicą odpiszczelową i zawiąż jedną pętlę ligatury w pobliżu dystalnego końca tętnicy. Następnie umieść mikro clamp naczyniowy wzdłuż tętnicy powyżej ligatury i zamknij clamp, aby zatrzymać przepływ krwi. Natychmiast nanieś kroplę papaweryny, aby rozszerzyć tętnicę i zapobiec skurczom naczyń.Następnie, używając ligatury, unieś tętnicę odpiszczelową i wykonaj niewielkie nacięcie tętnicy (arteriotomię) za pomocą igły 24 G. Następnie unieś brzegi nacięcia i powoli wprowadź zgłębnik do żył lub igłę prowadzącą do światła tętnicy. Teraz ostrożnie wprowadź cewnik do embolektomii tętniczej do tętnicy odpiszczelowej.Postępuj delikatnie, aby uniknąć powstania pęknięć. Następnie wyjmij zgłębnik do żyły i zwolnij zacisk mikronaczyniowy na tętnicy. Aby wywołać uraz, najpierw wprowadź cewnik balonowy do trzeciej kreski.Powinno to umieścić cewnik około dwóch do pięciu centymetrów powyżej rozwidlenia tętnic biodrowych. Następnie należy napompować balon 0,1 mililitra soli fizjologicznej. Teraz należy zacisnąć cewnik i cofnąć go o sześć centymetrów, obracając go w celu uszkodzenia tkanki.Po wycofaniu, spuść powietrze z balonu. Aby zapewnić całkowite rozszerzenie śródbłonka, powtórz ten proces jeszcze dwukrotnie. Następnie usuń cewnik i niezwłocznie zawiąż pętlę ligatury tuż powyżej miejsca arteriotomii, aby zatamować krwawienie.Następnie należy zastosować odpowiedni środek antyseptyczny wokół otworu rany i usunąć skrzepy krwi za pomocą gazika. Na koniec zamknąć nacięcie skóry i zdezynfekować miejsce operacyjne roztworem powidonu z jodem. Następnie powtórzyć całą procedurę chirurgiczną na przeciwległej tętnicy biodrowej, używając drugiego cewnika.Po zabiegu w pierwszej kolejności należy oczyścić boki królika z maści abtonicznej. Następnie należy podać sulfadoksynę i trimetoprim. Po tym królika wraz z podkładką pod głowę należy przenieść do czystej klatki pooperacyjnej, zakładając plaster monitorujący i klipsy.Gdy zwierzę odzyska zdolność do pionizacji i zacznie się poruszać, należy przenieść je z powrotem do klatki macierzystej. W celu uśmierzenia bólu należy podać buprenorfinę. Następnie należy rozpocząć karmienie zwierzęcia dietą aterogenną przez wymagany czas.Aby pobrać wczesny cienki len, od dwóch do czterech tygodni po zabiegu, należy najpierw zznieczulić królika, a następnie poddać go eutanazji poprzez nacięcie międzysercowe. Następnie należy otworzyć jamę brzuszną i odsłonić przestrzeń zaotrzewnową. Potem należy odnaleźć aortę w kierunku rozwidlenia biodrowego i podwiązać ją powyżej rozwidlenia.Następnie należy ostrożnie usunąć otaczające tkanki i wyizolować obie tętnice biodrowe. Teraz należy wypreparować obie tętnice i zanurzyć je w lodowatym PBS. Następnie, używając pęsety, należy usunąć skrzepy i podzielić każdą tętnicę na 46 segmentów.Następnie niezwłocznie osadź segmenty w formie zawierającej związek OCT i zamroź tkanki gwałtownie w ciekłym azocie. Przechowuj tkanki w temperaturze -80 °C, a następnie zabarw przekroje o grubości 5 µm zgodnie ze standardową metodologią. Uszkodzenie balonowe tętnic biodrowych zostało przeprowadzone pomyślnie i bez powikłań w czasie krótszym niż godzina.Króliki powróciły do pełnej sprawności w ciągu jednej godziny i/lub wydawały się zdrowe, bez znaczącej utraty masy ciała. Nie wystąpiły żadne powikłania pooperacyjne. Po czterech tygodniach diety aterogennej u wszystkich królików stwierdzono hipercholesterolemię.Połączenie urazu balonowego i diety cholesterolowej doprowadziło do zmian strukturalnych w ścianie naczynia, co w ciągu dwóch tygodni skutkowało rozwojem blaszek miażdżycowych. Porównano tętnice biodrowe nieuszkodzone i uszkodzone balonowo, wyizolowane z tego samego zwierzęcia. Blaszki charakteryzowały się infiltracją lipidów, a także migracją i proliferacją komórek mięśni gładkich.Len terus xuyên rosnąć w uszkodzonych naczyniach, podczas gdy rozmiar światła naczynia nadal się zmniejszał. Wynikowe zmiany były bardzo wyraźne po czterech tygodniach. Po dwóch i czterech tygodniach kwantyfikacja morfometryczna wykazała zwiększoną grubość kompleksu intima-media, zwiększoną powierzchnię blaszki miażdżycowej, zmniejszoną powierzchnię światła naczynia, a ostatecznie zwiększoną akumulację lipidów.Barwienie przeciwciałem przeciwko alfa-aktynie mięśni gładkich reaguje z aktyną mięśniową, identyfikując w ten sposób komórki mięśni gładkich naczyń. Z kolei barwienie przeciwciałem monoklonalnym CD11 ujawnia cytoplazmę makrofagów. Razem oba barwienia pokazują stopień, w jakim komórki mięśni gładkich oraz makrofagi proliferują w blaszkę miażdżycową w uszkodzonych naczyniach.Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać odpowiednią wiedzę z zakresu bezpieczeństwa oraz być w stanie bez trudności przeprowadzić wywołanie urazu gwałtownego w tętnicach biodrowych królika. Uraz ten, w połączeniu z dietą aterogenną, prowadzi do jednorodnego w czasie rozwoju blaszek miażdżycowych w tętnicach biodrowych.

the-rabbit-model-accelerated-atherosclerosis-methodological

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Szczegółowo opisujemy nowy cewnik do fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF), służący do dwuwymiarowego wewnątrznaczyniowego obrazowania molekularnego biologii blaszki miażdżycowej in vivo. Cewnik NIRF umożliwia wizualizację kluczowych procesów biologicznych, takich jak zapalenie, poprzez wykrywanie obecności aktywowalnych i celowanych fluorochromów NIR wykazujących powinowactwo do blaszki miażdżycowej. Cewnik spełnia wymogi inżynieryjne i energetyczne stosowane w klinice i jest...

In vivo wewnątrznaczyniowe obrazowanie molekularne blaszek zapalnych z wykorzystaniem fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF) – multimodalne podejście do obrazowania miażdżycy

Ten film pokazuje dwa modele rozwoju blaszki miażdżycowej w tętnicach mysich i podkreśla różnice w przeroscie mięśniowo-brzuszkowym i miażdżycy.

Wywoływanie przerostu mięśniowo-wewnętrznego, a miażdżyca u myszy: wprowadzenie dwóch prawidłowych modeli

Ten protokół wykorzystuje cewnik balonowy do spowodowania uszkodzenia śródświetlnego tętnicy szyjnej szczura i wywołania przerostu neointimalu. Jest to dobrze ugruntowany model do badania mechanizmów przebudowy naczyń krwionośnych w odpowiedzi na uraz. Jest również szeroko stosowany do określania ważności potencjalnych podejść terapeutycznych.

Uszkodzenie balonu naczyniowego i podanie śródświetlne w tętnicy szyjnej szczura

Opisany poniżej model uszkodzenia balonu szyjnego u szczura pozwala badaczom ocenić leki lub terapie, które negują przerost tętnic wywołany urazem. Opisano szczegółowe przygotowanie przedoperacyjne, zabieg chirurgiczny i opiekę pooperacyjną nad zwierzęciem.

Model uszkodzenia balonu szyjnego szczura do testowania terapii przeciwnaczyniowej

To badanie opisuje inwazyjną procedurę indukcji przyspieszonej miażdżycy u myszy. W porównaniu z innymi metodami wykorzystującymi urazy wywołane elektrycznością lub kriogenicznością, uraz wywołany mechanicznie naśladuje ludzki stan restenozy po terapiach rewaskularyzacyjnych i jest idealny do badania zaangażowanych mechanizmów molekularnych.

Indukcja przyspieszonej miażdżycy u myszy: model "urazu drutowego"

Ten artykuł demonstruje model mysi do badania rozwoju przerostu mięśniowo-intimalnego (MH) po uszkodzeniu balonu aorty.

Uraz balonowy w celu wywołania przerostu mięśniowo-wewnętrznej w aorcie brzusznej myszy

Opisujemy zabieg chirurgiczny stosowany do wywołania niedokrwienia obwodowego u królików z hiperlipidemią i cukrzycą. Operacja ta działa jako model przedkliniczny dla stanów doświadczanych w chorobie tętnic obwodowych u pacjentów. Angiografia jest również opisywana jako sposób pomiaru stopnia wprowadzonego niedokrwienia i odzyskania perfuzji.

Przedkliniczny model niedokrwienia kończyn tylnych u królików z cukrzycą

Uszkodzenie balonu tętnicy szyjnej szczura naśladuje zabieg angioplastyki klinicznej wykonywany w celu przywrócenia przepływu krwi w naczyniach miażdżycowych. Model ten indukuje reakcję na uszkodzenie tętnicy poprzez rozdęcie ściany tętnicy i obnażenie warstwy wewnętrznej komórek śródbłonka, ostatecznie powodując przebudowę i reakcję hiperplastyczną błony wewnętrznej.

Segmentowe uszkodzenie balonu tętnicy szyjnej szczura z kontrolowanym ciśnieniem z okołoprzybytkowym zastosowaniem terapeutycznym

Rozwój i testowanie urządzeń wewnątrznaczyniowych do leczenia tętniaków wewnątrzczaszkowych jest nadal bardzo ważne. Większość stosowanych obecnie modeli tętniaków pomija albo ważne cechy zwyrodniałej ściany tętnicy, albo hemodynamikę prawdziwego rozwidlenia. Dlatego naszym celem było zaprojektowanie nowatorskiego modelu bifurkacji worka tętniczego u królików.

Worek tętniczy Model tętniaka bifurkacji mikrochirurgicznej u królika

Ciągły zapis ciśnienia tętniczego krwi pozwala na badanie wpływu różnych parametrów hemodynamicznych. W niniejszym raporcie przedstawiono zastosowanie ciągłego monitorowania ciśnienia tętniczego krwi w dużym zwierzęcym modelu udaru niedokrwiennego w celu określenia patofizjologii udaru, wpływu różnych czynników hemodynamicznych oraz oceny nowych podejść do leczenia.

Monitorowanie i modulacja ciśnienia krwi w czasie rzeczywistym w króliczym modelu udaru niedokrwiennego

Odpowiedni model zwierzęcy jest potrzebny do zrozumienia mechanizmów patologicznych leżących u podstaw zwężenia zastawki aortalnej (AVS) i oceny skuteczności interwencji terapeutycznych. Niniejszy protokół opisuje nową procedurę opracowywania modelu królika AVS poprzez bezpośrednie uszkodzenie balonu in vivo.

Model zwężenia zastawki aortalnej królika wywołany bezpośrednim uszkodzeniem balonu

Poznaj metodę indukowania miażdżycowych blaszek miażdżycowych u królików poprzez chirurgiczne uszkodzenie śródbłonka tętnicy biodrowej i karmienie dietą aterogenną. Model ten umożliwia badanie rozwoju płytki miażdżycowej.

Króliczy model przyspieszonej miażdżycy: perspektywa metodologiczna uszkodzenia balonika tętnicy biodrowej

Przeglądaj więcej filmów