Zdefiniowane i skalowalne generowanie komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych

Ogólnym celem tego protokołu jest wytworzenie ludzkich komórek podobnych do hepatocytów z pluripotencjalnych komórek macierzystych przy użyciu rekombinowanych matryc lamininy w określonych warunkach. Ta metoda pozwala użytkownikowi na niestandardowe wykonanie funkcjonalnych ludzkich hepatocytów w celu zbadania biologii wątroby w naczyniu. Główną zaletą tej techniki jest to, że jej zdefiniowany charakter pozwala na masową produkcję hepatocytów o wysokim stopniu odtwarzalności eksperymentalnej. Aby rozpocząć eksperyment, rozmrozić 100 mikrogramów na mililitr rekombinowanej lamininy-521 lub LN-521 w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Rozcieńczyć rozmrożony LN-521 w lodowatym 1xDBPS z wapniem i magnezem, aby uzyskać roztwór o stężeniu pięciu mikrogramów na mililitr. Dodaj jeden mililitr roztworu LN-521 o pięciu mikrogramach na mililitr, aby pokryć jedną studzienkę z sześciodołkowej płytki i kołysz płytką, aby równomiernie rozprowadzić ją w studzience. Następnie inkubuj płytki w inkubatorze do hodowli komórkowych CO2 o temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% przez co najmniej dwie godziny w celu pilnego użycia. Przenieść powlekaną płytkę z inkubatora do okapu do hodowli tkankowej. Ostrożnie zassać roztwór powłoki LN-521, nie uszkadzając powlekanej powierzchni. Następnie natychmiast dodaj jeden mililitr wstępnie podgrzanego mTeSR