Izolacja pośrednich białek filamentowych z wielu tkanek myszy w celu zbadania modyfikacji potranslacyjnych związanych ze starzeniem się

Ogólnym celem tej procedury biochemicznej jest wyizolowanie frakcji wzbogaconych w włókna pośrednie z wielu tkanek myszy w celu zbadania modyfikacji potranslacyjnych różnych specyficznych dla tkanek białek pośrednich włókien. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie włókien pośrednich, takie jak to, w jaki sposób starzenie się ssaków wpływa na funkcję i regulację tych ważnych białek cytoszkieletu chroniących przed stresem. Główną zaletą tej techniki jest to, że włączenie zautomatyzowanego etapu lizy tkanek pozwala użytkownikom przetwarzać wiele próbek tkanek w szybki i wydajny sposób.

Na początek dodaj jeden mililitr lodowatego buforu Triton X-100 uzupełnionego inhibitorami proteazy do homogenizatora ze szklaną rurką i umieść go na lodzie. Wyjmij mały kawałek tkanki z magazynu ciekłego azotu i umieść go bezpośrednio w szklanym homogenizatorze. Następnie, trzymając homogenizator i próbkę przez cały czas na lodzie, należy użyć około 50 pociągnięć pastylki z politetrafluoroetylenu w celu homogenizacji próbki, jednocześnie minimalizując tworzenie się pęcherzyków.