곤충 푸파리움 제거 : 푸팔 조사를위한 방법

Overview

이 문서에서는 곤충의 강아지를 제거하는 기술을 설명하면서 내부 강아지를 그대로 유지하므로 추가 조사에 적합합니다. 예제 프로토콜은 Drosophila guttifera와절차를 보여줍니다; 그러나,이 기술은 다른 Drosophila 종에 적용 할 수 있습니다.

Protocol

이 프로토콜은 후쿠토미 등에서 발췌, 푸팔 기간을 준비하고 드로소필라 guttifera의날개 색소 침착의 측정을위한 방법,J. Vis. Exp. (2018). 

1. 푸파리움 제거

참고 사항 드로소필라의 푸파는 푸파리움이라는 구조로 덮여 있습니다. Muscomorpha의 곤충 (파리) 새끼에 그것의 애벌레 큐티클을 흘리지 않습니다; 대신, 그것은 다각형 후 큐티클을 경화하고, 푸파의 보호 커버로 사용, 푸파리움. 푸파리움 안에 있는 강아지는 매우 부드럽고 깨지기 쉬운 진정한 푸팔 큐티클을 가지고 있습니다. P4 (ii) 주위에 polysis가 일어나기 전에, 상피와 puparium는 함께 붙어 있고, 따라서 손상 없이 푸파리움을 제거하는 것은 아주 어렵습니다. P5 후, puparium을 제거하는 것은 힘들지만, 형태학적 관찰 및 pupal 단계의 정의에 유용합니다. 이 과정은 다음과 같이 수행됩니다.

1. 종이 타월 조각에 양면 테이프 조각을 부착합니다.
2. 양면 테이프 복부 측에 강아지를 놓습니다(그림1A).
3. 푸파리움의 전방측과 내부 푸파 사이의 공간을 찾습니다. 집게를 사용하여이 간격 주위의 puparium을 잡고 제거하고, 강아지의 머리의 전방 측면을 노출.
4. 앞쪽 후방 축과 평행하게 이동하여 집게 의 끝을 삽입합니다. 포셉의 끝을 들어 올려 푸파리움을 로컬로 깨뜨린다. 파손이 푸파리움의 후방 부분에 도달할 때까지 이 작업을 반복합니다. 푸파리움과 푸팔 다리 사이에 틈새가 형성되고, 푸파리움의 복부 면을 부수고 내부 푸파(도1B)의손상을 최소화한다.
5. 가능한 한 강아지를 부러 뜨린 후, 미세 페인트 브러시 (#5/0)를 사용하여 강아지를 꺼내십시오(도 1C).
6. pupa를 ddH₂O로 적시고 플라스틱 페트리 접시 (직경 60mm x 높이 15mm)에 넣은 티슈 페이퍼에 놓습니다. 노출 된 강아지가 취약하고 쉽게 건조되기 때문에 가능한 한 빨리 사진을 찍습니다.
    

Representative Results

그림 1. 푸파리움 제거 그림. (A) 양면 테이프 에 강아지 복부 면을 놓습니다. 푸파리움의 전방 부분을 제거합니다. (B) 복부 측에서 집게로 새끼 를 부러뜨린다. (C) 푸파리움을 부러뜨린 후 페인트 브러시를 사용하여 강아지를 꺼내십시오.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Drosophila guttifera	The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego	15130-1971.10	Drosophila guttifera,  a fruit fly species used in this article
NICETACK double sided tape	Nichiban	NW-15SF	Double sided tape,   for removing puparium
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11252-20	Forceps,  for removing puparium
Van Gogh VISUAL Paint brush	Talens Japan	GWVR-#5/0	Paint brush,  for removing puparium
Stereomicroscope	Olympus	SZX16	Stereomicroscope,  for morphological observation
Digital camera	Olympus	DSE-330-A	Digital camera,  for imaging
Falcon standard tissue culture dish	Corning	353002	Plastic Petri dish (diameter 60 mm x height 15 mm)