Overview
この記事では、内側の子犬をそのままにしたまま昆虫の子犬を取り除く技術を説明し、さらなる調査に適しています。このプロトコルの例は、 ショウジョウバエ・グティフェラとの手順を示しています。しかし、この技術は他の ショウジョウバエ 種にも適用可能である。
Protocol
このプロトコルは、福富らからの抜粋です, プパルの期間をステージングするための方法とショウジョウバエグティフェラの翼色素沈着の測定,J. Vis.(2018).
1. 子犬の除去
注ショウジョウバエの子犬は、子犬と呼ばれる構造で覆われています。ムスコモルファ(ハエ)の昆虫は、子犬の時に幼虫のキューティクルを流しません。代わりに、それは、ア多量症の後にキューティクルを硬化させ、子犬、子犬の保護カバーとしてそれを使用しています。子犬の中に住んでいる子犬は、非常に柔らかく壊れやすい真の子犬のキューティクルを持っています。P4(ii)の周りに多項論が起こる前に、上皮と子犬が一緒に取り付けられているので、損傷を受けずに子犬を取り除くことは非常に困難です。P5の後、子犬の摘出は面倒ですが、形態学的観察やプパルステージの定義には有用です。この処理は以下のように行われます。
- 両面テープをペーパータオルに貼ります。
- 両側テープ腹側に子犬を上に置きます(図1A)。
- 子犬の前側と内の子犬の間のスペースを見つけます。鉗子を使ってこの隙間の周りの子犬をつかんで取り除き、前頭の子犬を露出させる。
- 鉗子の先端を前部軸に平行に動かして挿入します。鉗子の先端を持ち上げて、子犬を局所的に壊します。破断が子犬の後部に到達するまで、このアクションを繰り返します。子犬と子犬の脚の間にも隙間が形成されていることを確認し、子犬の腹側を壊し、内部の子犬の損傷を最小限に抑える(図1B)。
- できるだけ子犬を壊した後、細かい絵筆を使って子犬を取り出す(#5/0) (図1C)。
- pupaをddH2Oで湿らせたティッシュペーパーの上に置き、プラスチックペトリ皿(直径60mm x 高さ15mm)に入れます。露出した子犬は脆弱で、簡単に乾燥するので、できるだけ早く写真を撮ります。
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Representative Results
図 1.子犬の除去のイラスト。(A) 両サイドテープの上に子犬の腹側を置きます。子犬の前部を取り除きます。(B)腹側の鉗子で子犬を割る。(C)子犬を壊した後、絵筆を使って子犬を取り出す。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drosophila guttifera | The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego | 15130-1971.10 | Drosophila guttifera, a fruit fly species used in this article |
| NICETACK double sided tape | Nichiban | NW-15SF | Double sided tape, for removing puparium |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | Forceps, for removing puparium |
| Van Gogh VISUAL Paint brush | Talens Japan | GWVR-#5/0 | Paint brush, for removing puparium |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | Stereomicroscope, for morphological observation |
| Digital camera | Olympus | DSE-330-A | Digital camera, for imaging |
| Falcon standard tissue culture dish | Corning | 353002 | Plastic Petri dish (diameter 60 mm x height 15 mm) |
