Summary
Denne protokollen beskriver en mus modell av Salmonella drevet intestinal fibrose som ligner viktige patologiske kjennetegn ved Crohns sykdom, inkludert transmuralt inflammasjon og fibrose. Denne metoden kan brukes til å evaluere verts faktorer som endrer antifibrotiske utfall ved hjelp av mutant mus opprettholdt på en C57Bl/6 genetisk bakgrunn.
Abstract
Vev fibrose karakterisert ved patologisk akkumulering av ekstracellulære matrise som kollagen er utfallet av vedvarende betennelse og dysregulated reparasjon. I inflammatorisk tarmsykdom (IBD) fører fibrose til tilbakevendende striktur formasjoner som det ikke er noen effektiv behandling enn kirurgisk reseksjon. På grunn av sin sene debut, er prosessene som driver fibrose mindre studert og i stor grad ukjent. Derfor antifibrotiske komplikasjoner representerer en stor utfordring i IBD. I denne protokollen, en robust in vivo modell av intestinal fibrose er beskrevet der Streptomycin pre-behandling av C57Bl/6 mus etterfulgt av oral gavage med vaksine grade Salmonella tyfimurium ΔAroA mutant fører til vedvarende patogen kolonisering og fibrose i cecum. Metoder for å forberede S. Tyfimurium ΔAroA for inoculation, kvantifisere patogen belastninger i cecum og milt, og evaluere kollagen deponering i intestinal vev er forklart. Denne eksperimentelle sykdommen modellen er nyttig for å undersøke verten faktorer som enten forsterke eller forverre CD-lignende intestinal fibrose.
Introduction
Ulcerøs kolitt (UC) og Crohns sykdom (CD) er de to store formene for IBD og er karakterisert som kroniske og relapsing inflammatoriske forstyrrelser i mage-tarmkanalen 1,2. Disse lidelsene har en stor innvirkning på livskvaliteten til pasientene. Symptomer på IBD inkluderer magesmerter, diaré, kvalme, vekttap, feber og tretthet3. Nyere studier har identifisert genetiske og miljømessige faktorer som bidrar til sykdom patogenesen; Det er antatt at slike risikofaktorer bidrar til forstyrrelsen av epitel barrieren, noe som resulterer i translokasjon eller oversampling av luminal antigener4. Som en konsekvens, initierer dette en avvikende inflammatorisk respons på Commensal flora formidlet av tarm immunceller4. Vise egenskaper av IBD-forbundet komplikasjoner kanskje forlenge å steder over det gi luftveiene kjærligheten forskjellige organ inkluderer skjøt, hud, og lever1,2. Kjennetegn ved UC inkluderer alvorlig og diffus betennelse vanligvis lokalisert i kolon1. Sykdom patologi påvirker slimhinnen og submukosa i tarmen som resulterer i overfladisk slimhinne ulcerasjon1. I kontrast, kan CD påvirke noen del av GI-tarmkanalen selv om tegn på sykdom er ofte funnet i tykktarmen og ileum2. Videre er betennelsen i CD transmuralt, berører alle lag av tarmveggen2.
Flere IBD mottakelighet gener som er identifisert vil indikere at feilregulering av epitel barriere eller immunitet er kritiske bidragsytere til sykdomsprogresjon5. Mutasjoner i nukleotid oligomerisering domene 2 (NOD2) uttrykt ved monocytter ble funnet å være assosiert med økt mottakelighet for CD; Dette fremhever en kobling mellom endrede medfødte immun deteksjon av bakterielle komponenter og sykdommen6. Nyere Genova-brede foreningen studier (GWAS) har avdekket flere trasé potensielt involvert i patogenesen av IBD inkludert genetiske variasjoner i: STAT1, NKX2-3, IL2RA, IL23R avhengige trasé knyttet til adaptive immunitet, MUC1, MUC19, og PTGER4 i intestinal barriere vedlikehold, og ATG16L-mediert autofagi7,8,9. Mens disse befolknings-baserte genetikk studier har styrket vår forståelse av IBD, mottakelighet alleler alene er sannsynligvis utilstrekkelig i initiering og opprettholde kronisk sykdom3. Andre ikke-genetiske faktorer, inkludert endringer i tarm mikrobiomet sammensetning og en reduksjon i mangfold, har blitt assosiert med tarmbetennelse. Det er imidlertid uklart om gut dysbiosis foran eller er konsekvensen av dysregulated immunresponser3. Selv om etiologi av IBD fortsatt er uklart, har vår forståelse av patogenesen av sykdommen blitt forsterket av eksperimentelle musemodeller av intestinal betennelse10,11. Disse modellene individuelt ikke fullt ut representerer kompleksiteten i den menneskelige sykdommen, men de er verdifulle for Elucidating patofysiologiske trasé som kan være relevant for IBD og for validering av foreløpige terapeutiske strategier10, 11i. Slike mus modeller vanligvis stole på initiering av betennelse ved kjemisk induksjon eller infeksjon, immun celle overføring, eller genetisk manipulasjon. Videre disse strategiene ofte innebære forstyrrelser i epitel integritet eller modulering av medfødt eller adaptiv immunitet.
Salmonella enterica serovarer er intestinal patogener som kan infisere mennesker og mus. Etter inntak, Salmonella kanne kolonisere tarmen av direkte invasjonen av Prolifererende, M celler, eller antigen presenterer celler12. Mus smittet muntlig med S. Tyfimurium resulterer i kolonisering hovedsakelig av systemiske nettsteder som milt og chrezbryzheechno lymfeknuter med relativt lav overflod i mage-tarmkanalen12. Men forbehandling av mus med Streptomycin forbedrer effektiviteten av Salmonella kolonisering av tarmen ved å redusere verten beskyttende effekter av normal bakterieflora13. Patologiske trekk ved denne modellen inkluderer avbrudd eller sårdannelse i epitel barrieren, granulocytt rekruttering, og alvorlig ødem13. Alternativt, infeksjon med vaksinen karakteren S. Tyfimurium ΔAroA mutant fører til kronisk kolonisering av cecum og kolon som vedvarer opp til dag 40 etter infeksjon14. S. Tyfimurium ΔAroA stamme har en defekt i biosyntesen av aromatiske aminosyrer; Dette gjengir mutant stamme avirulent og kan benyttes som en svært effektiv vaksine15. Oral infeksjon i mus fører til en Th1-og Th17-cytokin tilhørende inflammatorisk respons, omfattende vev remodeling, og kollagen deponering. Tissue patologi er forbundet med forhøyede nivåer av Pro-antifibrotiske faktor som TGF-β1, CTGF, og IGF14. Den transmuralt antifibrotiske arrdannelse rapportert i denne modellen minner om striktur formasjoner ofte observert i IBD. Induksjon av fibrose ved Salmonella krever virulens kodet av Salmonella patogenitet øyer (SPI)-1 og 2 12. Viktigere, dette S. Tymphimurium ΔAroA infeksjon modellen er et nyttig system for studiet av antifibrotiske responser i mutant mus opprettholdes på en C57/Bl6 bakgrunn. C57/Bl6-belastningen er svært følsom for S. Typhiumurim SL1344 infeksjon på grunn av en taps-av-funksjon mutasjon i genet koding naturlig motstand-assosiert macrophage protein (NRAMP)-116,17. Vi har funnet ut at IL-17A og RORα-avhengige medfødte lymfoide celler er viktige bidragsytere til patogenesen i denne modellen18.
En stor komplikasjon av CD er dysregulated og overdreven deponering av ekstracellulære Matrix (ECM) inkludert kollagen2,19. Selv om gi luftveiene har en relativt høy kapasitet for regenerering, antifibrotiske arrdannelse kan oppstå på grunn av uløste sår healing svar som er forbundet med kroniske og alvorlige betennelser20,21. I CD, dette resulterer i skadelige effekter på vev arkitektur fører til betydelig organ svekkelse21,22. Den transmuralt natur betennelse observert i CD til slutt forut for tykkere tarmveggen forbundet med symptomatisk stenose eller striktur formasjon21. Om lag en tredjedel av CD-pasienter krever intestinal reseksjon for denne komplikasjon22. Det er ingen effektive anti-antifibrotiske terapier i IBD gitt at bruk av immunsuppressive midler som azatioprin eller anti-TNFα biologiske har ingen innvirkning eller bare beskjedent redusert kravet om kirurgiske inngrep19,23 . Mens fibrose er antatt være konsekvensen av kronisk betennelse, celler av mesenchymal opprinnelse som fibroblaster og pericytes antas å være den primære cellulære kilder til ECM i antifibrotiske arr21,24. Kronisk S. Tyfimurium ΔAroA infeksjon er en robust musen modell av intestinal fibrose det kanne tilbud innblikk i patogenesen av CD-like vise egenskaper.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyre protokoller ble godkjent av Animal Care Committee ved University of British Columbia.
1. utarbeidelse av Salmonella tyfimurium ΔAroA kulturer for oral gavage av mus
- Fra en frossen glyserol av S. Tyfimurium ΔAroA, klargjør en strek plate ved hjelp av LB agar som inneholder 100 μg/mL Streptomycin med en steril vaksinere sløyfe. Ruge over natten ved 37 ° c. Strek plater kan oppbevares inntil en uke ved 4 ° c.
- En dag før infeksjon forbereder du antibiotika ved å oppløse 0,5 g Streptomycin i 2,5 mL vann. Etter filter sterilisering Streptomycin oppløsning, oralt gavage musene ved hjelp av en pære-tippet 22G gavage nål og 1 mL sprøyte med 100 μL av Streptomycin oppløsning (20 mg Streptomycin/dose). Ved hjelp av en vaksinere sløyfe, vaksinere 3 mL LB buljong (50 μg/mL Streptomycin) i et kultur rør med en enkelt koloni. Ruge Salmonella kultur aerobt på 37 ° c over natten med risting ved 200 RPM.
- På dagen for smitte, forberede endelig infeksjon dose ved å utføre 2 påfølgende 1/10 fortynninger over natten Salmonella kulturer i sterile PBS. Dette vil resultere i en 100 μL inokulum inneholdende ca. 3 x 106 CFU.
- Ved hjelp av en lyspære-tippet 22G gavage nål og en 1 mL sprøyte, gavage hver mus med 100 μL av forberedt Salmonella.
Merk: Forbered Salmonella kulturer ved hjelp av aseptisk teknikk. Final inoculation konsentrasjonen av Salmonella kanskje være bekreftet av plating føljetong fortynninger opp på LB agar med Streptomycin. S. Tyfimurium ΔAroA belastning kan fås ved å kontakte professor McNagny (kelly@brc.ubc.ca).
2. vurdering av Salmonella byrder i vev
- Forbered 2 mL safe-Lock, rund bunn mikrorør med 1 mL steril PBS og en autoklaveres rustfritt stål perle. Pre-veie rørene før vev samling.
- Resect cecal og milt vev fra mus euthanized av karbondioksid eksponering. Samle vev fra individuelle dyr i separate rør. Veie rørene for å bestemme vev vekter.
- Homogenisere ved hjelp av en mikser Mill apparater for 15 min ved 30 Hz. overføring 900 μL av PBS per brønn i en 96-brønn 2-mL megablock. Pipetter 100 μL av vev homogenater i den første brønnen, bland godt, og utfør serie fortynninger ved å tilsette 100 μL til etterfølgende brønner inntil en 10-6- fortynning oppnås. Plate 10 μL av hver fortynning i triplicates på LB agar inneholdende 100 μg/mL streptomcyin.
- Count og multiplisere gjennomsnittlig CFU med en faktor på 100 siden 10 μL av 1000 μL prøven var belagt, og riktig fortynning faktor. Dividere vev vekt totalt CFU av vev vekter for å fastslå CFU per gram av vev.
Merk: Oppbevar alle prøvene på is eller ved 4 ° c under vevs behandling. Bruk brede munnstykke pipette tips når du utfører seriell fortynninger med vev homogenater. Forbered 96-brønnen megablock som inneholder PBS på forhånd.
3. Picrosirius rød farging og kvantifisering av kollagen.
- Fix cecal vev over natten i 10% bufret formalin og forberede para fin innebygging. Cut 5-μm seksjoner for Picrosirius rød farging som beskrevet tidligere25.
- Fang opp sammensatte bilder av hele cecal tverrsnitt på et brightfield mikroskop.
- Åpen Fiji (ImageJ) og hemsko og miste det. TIF Image arkiv onto det verktøyet.
- På menylinjen velger du bilde ≫ Skriv inn > RGB stack for å dele bildet inn i røde, grønne og blå kanaler. Skyv den horisontale linjen nederst i panelet for å sette kanalen til grønn.
- Åpne bilde ≫ juster ≫ terskel verktøyet. Juster minimums-og maksimumsgrenser for å eliminere bakgrunns signaler. Når ønsket terskelverdi er angitt, lukker du terskel verktøyet og går til analyser ≫ angi mål. Merk av område, brøk for område, grense til terskelog visnings etikett.
- Gate vevs delen med enten Frihånd eller polygon valg verktøyet og måle% området positive for kollagen ved å klikke analysere > mål.
- Normalisere det absolutte området positivt for kollagen flekker på vev området.
Merk: Fiji (ImageJ) er et åpen kildekode-program som kan lastes ned på https://fiji.sc. Bilder med samme opptaksforhold (dvs. lysstyrke og fokus) må ha identiske terskel grenser for nøyaktig kvantifisering. Hvis det er noen bakgrunn flekker innenfor det valgte vevet, måle absolutt areal og subtrahere det fra området positivt for kollagen fra hele vevet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Streptomycin behandling etterfulgt av oral infeksjon med S. Tyfimurium ΔAroA fører til robust tarmbetennelse og fibrose spesielt i cecum (figur 1). Typiske patogen byrder på 108 til 109 CFU per 1 g cecum og 104 CFU per 1 g milt kan utvinnes fra infiserte dyr (figur 2). Vurdering av fibrose i picrosirius rød beiset cecal seksjoner indikerer topp fibrose 21 dager etter smitte, mens mye av patologi er løst etter dag 42 PI (Figur 3 og Figur 4). Kollagen deponering er mest uttalt i submukosa av tarmen, mens fibrose i slimhinnen er mildere.
Figur 1. Diagram over cecal snitting for histologi, Salmonella byrde vurdering, og cytokin kvantifisering.
Segment 1 som representerer cecal spissen, kan brukes til analyse av genuttrykk mens segment 2 vil bli løst i 10% bufret formalin for histologi og segment 3 vil bli homogenisert for bakteriell opplisting.
Figur 2. Patogen byrder i Ceca og spleens.
Salmonella CFU per vekt av vev i løpet av infeksjonen. Dette tallet er endret fra lo et al.26. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Picrosirius rød farget tverrsnitt av tarm vevet.
Bright feltet bilder av Ceca fra infisert dyr og dyr 21 og 42 dager etter S. Tyfimurium ΔAroA infeksjon. Scale bar, 200 μm. Dette tallet er endret fra lo et al.26.
Figur 4. Kvantifisering av kollagen deponering av morphometric analyser.
(A) PSR + farging normalisert til vev området. Betydning bestemmes av enveis ANOVA Kruskal-Wallis test med Dunns post test. * *, P < 0,01, N.S., p > 0,05. Dette tallet er endret fra lo et al.26. (B) eksempel på kollagen kvantifisering i cecal vev bruker Fiji. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vår forståelse av patogenesen av IBD har blitt kraftig forsterket av musen modeller av intestinal betennelse. Selv om slike individuelle modeller ikke recapitulate alle funksjonene i komplekse og multifaktoriell menneskelig sykdom, har de vært nyttige i å identifisere viktige funksjoner i sykdomsprogresjon. Antifibrotiske strictures assosiert med IBD fortsatt en stor unmet klinisk behov som dagens behandlinger er ineffektive i reversering sykdomsutvikling. Videre, intestinal fibrose er vanskelig å studere i et laboratorium innstilling på grunn av begrensninger i dagens dyremodeller. Kronisk eksponering for TNBS i BALB/c mus har vist å indusere robust kollagen deponering i kolon som er drevet av Il-13 og TGF-B1 signalering27,28. Men, intestinal fibrose er ikke allment observert i andre rutinemessig brukte laboratorie modeller av kolitt som DSS behandling, IL-10-mangelfull, eller adoptiv T celle overføring modeller. Grassl et al. demonstrert at kronisk Gastrointestinal infeksjon i C57Bl6 med svekket ΔAroA mutant Salmonella belastning resulterer i robust fibrose i slimhinnene og submucosal regioner av cecum12. De rapporterte at peak fibrose skjedde tre uker etter smitte og var assosiert med Th1 og Th17 immunitet og forhøyede Pro-antifibrotiske faktorer TGF-B1, CTGF, og IGF-112. Patologi minner om CD som alvorlig inflammasjon og fibrose er transmuralt. Stund IBD er karakteristisk progressiv, ettall betydelig begrensningen av det kronisk Salmonella infeksjon modell er det forbigående art av det antifibrotiske immunopathology. I C57Bl/6 mus, tarmsykdom er vanligvis løst etter uke seks etter smitte. Til tross for dette brist, kan sistnevnte stadier av denne infeksjonen modellen benyttes til å identifisere faktorer eller prosesser involvert i å fremme sykdom remisjon26.
Selv om bakteriell patogen-drevet modeller av kolitt er godt studert, er det ingen tilknytning mellom Salmonella og CD. Imidlertid har det vært foreslått at omfanget av antifibrotiske sykdom i løpet av de siste stadiene av kronisk Salmonella kolonisering ikke direkte relatere med patogen byrder som tyder på at patologi er "selv-spre" en gang alvorlig intestinal betennelsen er initiert av Salmonella29. I kontrast har den tilhenger-invasiv Escherichia coli (AIEC) pathovar vært sterkt knyttet til utvikling av CD på grunn av sin høye utbredelse i ileal mucosa hos pasienter30. I tillegg, vedvarende AIEC kolonisering (opp til 9 uker) av ileum, cecum og kolon av flere mus stammer inkludert C57Bl/6 fører til robust matrise akkumulering i tarmen via flagellin uttrykk dermed demonstrere fibrogenic induksjon potensialet i denne pathobiont31,32. Den nylige utviklingen av smitte drevet modeller av intestinal fibrose har gitt robuste eksperimentelle modeller av IBD. Disse har forsynt ny systemer å analysere forholdet imellom enteric bakteriell Art inkluderer deres virulens faktorene, og vert mottakelighet faktorene det kanskje forsterke våre forståelse av IBD-forbundet fibrose.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen økonomiske konflikter av interesse å avsløre.
Acknowledgments
Vi takker Ingrid Barta for histologi tjenester.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 ml round bottom safe lock tubes | Eppendorf | 22363344 | |
| Stainless steel beads | Qiagen | 69989 | |
| PBS | Gibco | 10010031 | |
| Large-Orifice Pipet Tips | Fisher | 2707134 | |
| 2 mL megablock plates | Sarstedt | 82.1972.002 | |
| Gavage needles | FST | 18061-22 | |
| Streptomycin sulfate | Sigma | S9137 | |
| Mixer mill | Retsch | MM |
References
- Danese, S., Fiocchi, C.
- Baumgart, D. C., Sandborn, W. J.
- Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J. Advances in inflammatory bowel disease pathogenesis: linking host genetics and the microbiome. Gut. 62 (10), 1505-1510 (2013).
- Xavier, R. J., Podolsky, D. K. Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).
- Cho, J. H. The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature Reviews Immunology. 8 (6), 458-466 (2008).
- Ogura, Y., et al. A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease. Nature. 411 (6837), 603-606 (2001).
- Jostins, L., et al. Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease. Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).
- Rivas, M. A., et al. Deep resequencing of GWAS loci identifies independent rare variants associated with inflammatory bowel disease. Nature Genetics. 43 (11), 1066-1073 (2011).
- Rioux, J. D., et al. Genome-wide association study identifies new susceptibility loci for Crohn disease and implicates autophagy in disease pathogenesis. Nature Genetics. 39 (5), 596-604 (2007).
- Uhlig, H. H., Powrie, F. Mouse models of intestinal inflammation as tools to understand the pathogenesis of inflammatory bowel disease. European Journal of Immunology. 39 (8), 2021-2026 (2009).
- Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models. Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).
- Grassl, G. A., Finlay, B. B.
- Barthel, M., et al. Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host. Infection and Immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).
- Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K., Vallance, B. A., Finlay, B. B. Chronic Enteric Salmonella Infection in Mice Leads to Severe and Persistent Intestinal Fibrosis. Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).
- Hoiseth, S. K., Stocker, B. A. Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines. Nature. 291 (5812), 238-239 (1981).
- Valdez, Y., Ferreira, R. B., Finlay, B. B. Molecular mechanisms of Salmonella virulence and host resistance. Current Topics in Microbiology and Immunology. 337, 93-127 (2009).
- Valdez, Y., et al. Nramp1 drives an accelerated inflammatory response during Salmonella-induced colitis in mice. Cellular Microbiology. 11 (2), 351-362 (2009).
- Lo, B. C., et al. The orphan nuclear receptor RORalpha and group 3 innate lymphoid cells drive fibrosis in a mouse model of Crohn's disease. Science Immunology. 1 (3), eaaf8864 (2016).
- Burke, J. P., et al.
- Hogan, B. L., et al. Repair and regeneration of the respiratory system: complexity, plasticity, and mechanisms of lung stem cell function. Cell Stem Cell. 15 (2), 123-138 (2014).
- Fiocchi, C., Lund, P. K. Themes in fibrosis and gastrointestinal inflammation. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (5), G677-G683 (2011).
- Rieder, F., Fiocchi, C. Intestinal fibrosis in IBD—a dynamic, multifactorial process. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 6 (4), 228-235 (2009).
- Bouguen, G., Peyrin-Biroulet, L. Surgery for adult Crohn's disease: what is the actual risk? Gut. 60 (9), 1178-1181 (2011).
- Wynn, T. A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. The Journal of Pathology. 214 (2), 199-210 (2008).
- Junqueira, L. C., Bignolas, G., Brentani, R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).
- Lo, B. C., et al. IL-22 Preserves Gut Epithelial Integrity and Promotes Disease Remission during Chronic Salmonella Infection. Journal of Immunology. 202 (3), 956-965 (2019).
- Fichtner-Feigl, S., et al. Induction of IL-13 triggers TGF-beta1-dependent tissue fibrosis in chronic 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis. Journal of Immunology. 178 (9), 5859-5870 (2007).
- Fichtner-Feigl, S., et al. IL-13 signaling via IL-13R alpha2 induces major downstream fibrogenic factors mediating fibrosis in chronic TNBS colitis. Gastroenterology. 135 (6), e2001-e2007 (2013).
- Johnson, L. A., et al. Intestinal fibrosis is reduced by early elimination of inflammation in a mouse model of IBD: impact of a "Top-Down" approach to intestinal fibrosis in mice. Inflammatory Bowel Diseases. 18 (3), 460-471 (2012).
- Darfeuille-Michaud, A., et al. High prevalence of adherent-invasive Escherichia coli associated with ileal mucosa in Crohn's disease. Gastroenterology. 127 (2), 412-421 (2004).
- Small, C. L., Reid-Yu, S. A., McPhee, J. B., Coombes, B. K. Persistent infection with Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichia coli leads to chronic inflammation and intestinal fibrosis. Nature Communications. 4, 1957 (2013).
- Imai, J., et al. Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiont promotes intestinal fibrosis. Mucosal Immunology. , (2019).
