Summary
जटिल शरीर रचना विज्ञान के कारण, हृदय के नमूनों के लिए लगातार प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विच्छेदन और कटाई प्रोटोकॉल को लागू करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। यह पांडुलिपि कुछ मानक कार्डियक विच्छेदन प्रोटोकॉल के प्रमुख तत्वों को प्रस्तुत करती है, जो सकल परीक्षा दृष्टिकोण और आमतौर पर हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा के लिए उपयोग की जाने वाली नमूना साइटों दोनों पर प्रकाश डालती है।
Abstract
मानक सकल परीक्षा और नमूनाकरण बड़े जानवरों में किए गए कार्डियोवैस्कुलर रोगों के प्रयोगात्मक अध्ययनों की प्रजनन क्षमता और सफलता में महत्वपूर्ण तत्व हैं। हृदय की जटिल शारीरिक रचना, अंतर-प्रजाति मतभेदों और प्रतिपूरक और पैथोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के प्रकारों को ध्यान में रखते हुए, लगातार प्रोटोकॉल को लागू करना चुनौतीपूर्ण है। कई विच्छेदन प्रोटोकॉल का उपयोग आमतौर पर प्रोसेक्टर के अनुभव के अनुरूप अनुकूलित किया जाता है, और व्यक्तिगत वरीयता प्रयोगात्मक और इंटरऑब्जर्वर परिवर्तनशीलता का स्रोत बनी हुई है। यहां, उद्देश्य कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों के मॉडल के रूप में कुछ सामान्य रूप से इस्तेमाल की जाने वाली प्रजातियों (कुत्तों, सूअरों, जुगाली करने वालों और बिल्लियों सहित) में हृदय की मुख्य शारीरिक विशेषताओं और स्थलों, विच्छेदन प्रोटोकॉल और हिस्टोलॉजिकल नमूना मानकों को प्रस्तुत करना है।
दो मानक सकल परीक्षा प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत किए गए हैं। सबसे पहले, इनफ्लो-आउटफ्लो विधि, जो हृदय और बड़ी वाहिकाओं (अक्सर कुत्तों, जुगाली करने वालों और सूअरों में उपयोग की जाती है) के माध्यम से शारीरिक रक्त प्रवाह दिशा का पालन करती है, और दूसरा, चार-कक्ष विच्छेदन तकनीक (बिल्लियों में उदाहरण)। दोनों तकनीकों को कुछ प्रयोगात्मक परिस्थितियों में किसी भी प्रजाति के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। नमूना प्रोटोकॉल में रुचि के सभी क्षेत्र शामिल हैं (सिनोएट्रियल नोड, वेंट्रिकल्स, इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम, एट्रिया, वाल्व और महाधमनी), और यदि ठीक से किया जाता है, तो प्रयोगात्मक अध्ययनों की प्रजनन क्षमता और विश्वसनीयता दोनों में सुधार करें।
Introduction
जटिल शरीर रचना विज्ञान और प्रारंभिक कठोरता के कारण, जो हृदय की दीवार की मोटाई का आकलन करने में हस्तक्षेप कर सकता है, हृदय की सकल परीक्षा चुनौतीपूर्ण है और कई तकनीक से संबंधित या व्याख्या त्रुटियों से ग्रस्त है। यह अंतर-विशिष्ट रूपात्मक विविधताओं और इस तथ्य से प्रवर्धित होता है कि कई नैदानिक, प्रमुख हृदय रोग (कोरोनरी हृदय रोगों, फाइब्रोसिस, धमनीशोथ और एमाइलॉयडोसिस के शुरुआती मामलों सहित) किसी भी सकल परिवर्तन से जुड़े नहीं हैं, संक्षेप में, हिस्टोलॉजिकल विकृति। एक मानकीकृत विच्छेदन और हिस्टोलॉजिकल नमूना कटाई प्रोटोकॉल पर्यवेक्षकों के बीच स्थिरता ला सकता है और साथ ही, कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों के प्रयोगात्मक अध्ययनों की तुलनात्मकता और प्रजनन क्षमता ला सकता है।
नमूने दो कुत्तों (कैनिस ल्यूपस परिचित) (एक 3 वर्षीय, नर फ्रेंच बुलडॉग, और 8 वर्षीय, मादा मिश्रित नस्ल), एक बिल्ली (फेलिस कैटस) (एक 6 वर्षीय, पुरुष यूरोपीय शॉर्टहेयर), एक घरेलू सुअर (सुस स्क्रोफा डोमेस्टिकस) (एक 1 वर्षीय, नर लार्ज व्हाइट), और एक गाय (बोसटॉरस) (2 महीने की, मादा होलस्टीन) से एकत्र किए गए थे। चुनी गई प्रजातियों में से प्रत्येक का एक अलग बीमारी के लिए कार्डियोवैस्कुलर मॉडल के रूप में विशेष उपयोग है; उदाहरण के लिए, कुत्ते अतालता मॉडलिंग के लिए एक पसंदीदा मॉडल हैं; बिल्लियों को हाइपरट्रॉफिक कार्डियोमायोपैथी (एचसीएम) के लिए पसंद किया जाता है, क्योंकि यह एचसीएम के उच्चतम प्रसार वाली प्रजाति है; सूअरों का उपयोग तीव्र मायोकार्डियल रोधगलन के लिए एक मॉडल के रूप में किया जाता है; और जुगाली करने वालों का उपयोग विषाक्त पदार्थों के संपर्क में आने के कारण नशे के लिए एक मॉडल के रूप में किया जाता है जो घास के मैदान11 पर आसानी से पाए जा सकते हैं।
इस पांडुलिपि में, एक नेक्रोपसी प्रोटोकॉल और हृदय के दो विच्छेदन प्रोटोकॉल प्रस्तुत किए गए हैं, जिन्हें प्रयोगात्मक हृदय रोगों में हृदय की सकल और हिस्टोलॉजिकल परीक्षा में सुधार करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। वर्णित प्रोटोकॉल पशु चिकित्सा पाठ्यपुस्तकों 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12, जर्नल साहित्य 3,13,14, आधिकारिक दस्तावेज 15 और वेबिनार 16 से जानकारी के आधार पर विकसित किए गए थे , 17. इस अध्ययन में उपयोग किए गए नमूने नियमित ऑटोप्सी निदान के लिए यूएसएएमवी क्लुज-नेपोका के पैथोलॉजी विभाग को प्रस्तुत शवों से निकाले गए थे।
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Protocol
प्रायोगिक प्रोटोकॉल को जैव-नैतिक समझौता (2022 से संख्या 311) प्राप्त हुआ और राष्ट्रीय (2014 के कानून संख्या 43) और यूरोपीय (2010 से यूरोपीय संघ के निर्देश संख्या 63) दोनों कानून के अनुपालन में कृषि विज्ञान और पशु चिकित्सा विश्वविद्यालय की बायोएथिक्स समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। इस प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली सभी सामग्रियों और उपकरणों के बारे में विवरण के लिए सामग्री की तालिका देखें।
1. नेक्रोपसी प्रोटोकॉल
नोट: यह अनुशंसा की जाती है कि2,12 प्रदर्शन किए जाने पर आसान पहुंच के कारण प्रस्तुत सभी प्रजातियों के लिए एक ही नेक्रोपसी प्रोटोकॉल का उपयोग किया जाए। निम्नलिखित चरण एक मध्यम आकार के कुत्ते में किए गए नेक्रोपसी का प्रतिनिधित्व करते हैं। विभिन्न विषयों पर नेक्रोपसी करते समय चरणों को अनुकूलित करें।
- विषय का वजन करें और इसे इसके बाईं ओर नेक्रोपसी टेबल पर रखें (चित्रा 1 ए)। विषय की बाहरी परीक्षा के लिए आगे बढ़ें (कटिस और म्यूकोसा के निरीक्षण और झुकाव द्वारा, रंग, स्थिरता और मात्रा में सभी परिवर्तनों को ध्यान में रखते हुए)।
- चाकू (या स्केलपेल) का उपयोग करें और दाहिने एक्सिला में 7 सेमी का चीरा लगाएं (चित्रा 1 ए)।
- कॉक्सोफेमोरल जंक्शन (चित्रा 1 ए, बी) का पता लगाएं। चाकू से कैप्सूल खोलें। फीमर के सिर के स्नायुबंधन को काटें (चित्रा 1 बी)।
- एक्सिला कपाल में त्वचा के चीरे को मैंडिबुलर सिम्फिसिस और पुच्छल रूप से पेरिनियम तक विस्तारित करने के लिए चाकू का उपयोग करें (चित्रा 1 बी)।
- स्केलपेल के साथ त्वचा को हटा दें और वेंट्रल मिडलाइन से वक्ष और पेट की दीवार को कशेरुक अनुप्रस्थ प्रक्रियाओं के स्तर तक उजागर करें (चित्रा 1 बी)।
- स्केलपेल और फोर्सप्स के साथ, पेट की दीवार के माध्यम से एक फ्लैप बनाएं, वेंट्रोकॉडल को सही कॉस्टल आर्क तक। कैंची के साथ पेट की गुहा खोलें- दाहिने हाइपोकॉन्ड्रियम के पुच्छल पहलू का पालन करें (चित्रा 1 बी)।
- चीरा को दाहिने पारलुम्बर क्षेत्र के साथ बाहरी इलियाक शिखा तक बढ़ाएं। बाद में, लिनिया अल्बा के जघन सम्मिलन तक चीरा का विस्तार करें।
- संक्षेप में, सीटू में पेट के अंगों की जांच करें (अंगों के रंग, स्थिरता, मात्रा और स्थिति में किसी भी बदलाव को नोट करके)।।
- स्केलपेल और फोर्सप्स के साथ, उच्चतम बिंदु पर डायाफ्राम को पंचर करें (चित्रा 1 बी)।
- हड्डी काटने वाले बल का उपयोग करके दो अनुदैर्ध्य वर्गों के साथ दाईं पसली पिंजरे को हटाकर वक्ष गुहा में प्रवेश करें। पसलियों के पैरास्टर्नल कार्टिलाजिनस खंड को खंडित करें। इसके बाद, पसलियों के पृष्ठीय खंड को खंडित करें, जो कोस्टोवर्टेब्रल जोड़ों के समीपस्थ है (चित्रा 1 सी)।
- सीटू में दिल की जांच करें (चित्रा 1 सी)। आकार, स्थिति, रंग, आसन्न ऊतकों के साथ कनेक्शन पर ध्यान दें, और धड़कन द्वारा, स्थिरतामें कोई भी परिवर्तन 9.
नोट: यदि एक घनास्त्रता या जन्मजात हृदय रोग मौजूद है, तो हृदय को सीटू में विच्छेदित किया जाना चाहिए (यह दृष्टिकोण बड़ी वाहिकाओं की पूरी परीक्षा की अनुमति देता है)। - आधार से हृदय के शीर्ष तक एक अनुदैर्ध्य खंड के साथ पेरिकार्डियल गुहा की जांच करने और खोलने के लिए कैंची का उपयोग करें। पेरिकार्डियल गुहा और एपिकार्डियम की जांच करें (रंग, स्थिरता और मात्रा में किसी भी बदलाव को ध्यान में रखते हुए)12.
- कैंची के साथ दिल को छोड़ दें, महाधमनी, फुफ्फुसीय ट्रंक और दोनों वेना कैवे के अनुप्रस्थ खंडों को उत्पन्न करें। क्रिस्टा टर्मिनल को संरक्षित करने के लिए दाहिने आलिंद में प्रवेश द्वार से कम से कम 1 सेमी ऊपर सुपीरियर वेना कावा को खंडित करें।
- अंग की बाहरी समोच्च, एपिकार्डियम की उपस्थिति, एपिकार्डियम की पारदर्शिता द्वारा मायोकार्डियम की उपस्थिति और बड़े वाहिकाओं की बाहरी उपस्थिति की जांच करें (चित्रा 2 ए)।
नोट: सामान्य तौर पर, पेरिकार्डियम का उद्घाटन और परीक्षा प्रजातियों के बीच कुछ अंतर प्रस्तुत करती है। पेरिकार्डियल गुहा की परीक्षा समग्र पेरिकार्डियल सामग्री 1,2 के पेरिकार्डियम की पारदर्शिता के माध्यम से बाहरी निरीक्षण और मूल्यांकन के साथ शुरू होती है। एक बिल्ली या कुत्ते में, पेरिकार्डियम में आमतौर पर लगभग 0.25 एमएल / किलोग्राम पतला, स्पष्ट, पारभासी से हल्के पीले द्रव9 होता है। यदि कोई पैथोलॉजिकल बहाव हैं, तो उन्हें बाँझ सिरिंज या वैक्यूटेनर ट्यूब के साथ एकत्र किया जाना चाहिए।
2. विच्छेदन प्रोटोकॉल
नोट: हृदय के लिए कई नेक्रोपसी तकनीकों का उपयोग किया जाता है, जिनमें से प्रत्येक के कई फायदे हैं। इस प्रोटोकॉल के लिए, दो सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकों को चुना गया था: 1) "इनफ्लो-आउटफ्लो विधि," जो वाल्व और एंडोकार्डियम की बेहतर परीक्षा की अनुमति देता है और अधिकांश प्रजातियों 2,11,12,16 के लिए उपयोग किया जाने वाला प्रोटोकॉल है, और 2) "चार कक्ष विच्छेदन"/ 17.
- कार्डियक विच्छेदन के लिए "इनफ्लो-आउटफ्लो विधि" 2,11,12,16
- एट्रियल चेहरे के साथ दिल को ऊपर की ओर रखें (चित्रा 2 ए)।
- पुच्छल वेना कावा से दाहिने आलिंद में मोटे तौर पर काटने के लिए कैंची और दंतहीन बल का उपयोग करें (चित्र 2 बी)। क्रिस्टा टर्मिनलिस / साइनोएट्रियल नोड (एसए नोड) को उजागर करने के लिए दाईं ओरिकुलर उपांग में कट जारी रखें। पृष्ठीय दृश्य से ट्राइकसपिड वाल्व का निरीक्षण करें।
- दाहिने आलिंद से दाएं वेंट्रिकल और इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम (चित्रा 2 सी) के बीच जंक्शन तक एक खंड काटें। सही एट्रियोवेंट्रिकुलर वाल्व प्रदर्शित करें।
- इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ दाहिने वेंट्रिकल मुक्त दीवार को खंडित करें। फुफ्फुसीय ट्रंक की उत्पत्ति तक अनुभाग जारी रखें (चित्रा 2 सी, डी)।
- कॉर्डे टेंडिने और पैपिलरी मांसपेशियों (चित्रा 2 डी) सहित सही एट्रियोवेंट्रिकुलर वाल्व की पूरी तरह से जांच करें। कॉर्डे टेंडिने को काट लें।
- फुफ्फुसीय ट्रंक के माध्यम से बल रखें और ट्रंक को अनुदैर्ध्य रूप से काटें (चित्रा 2 ई)। फुफ्फुसीय बहिर्वाह पथ, फुफ्फुसीय ट्रंक उत्पत्ति और सेमीलूनर वाल्व की जांच करें।
- फुफ्फुसीय नसों से बाएं आलिंद को बाएं ऑरिकल के सिरे तक काटें (चित्रा 2 एफ)। पृष्ठीय दृश्य से बाइसपिड (माइट्रल) वाल्व का निरीक्षण करें।
- इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ दिल को नीचे की ओर रखें (चित्रा 2 एफ)। वेंट्रिकुलर मुक्त दीवार में वेंट्रिकल के आधार से कार्डियक एपेक्स तक एक बड़ा चीरा लगाएं। बाएं एट्रियोवेंट्रिकुलर वाल्व को पूरी तरह से प्रदर्शित करें।
- बाएं एट्रियोवेंट्रिकुलर वाल्व के शीर्ष के कॉर्डे टेंडिने को काटें।
- बाएं वेंट्रिकुलर बहिर्वाह पथ के माध्यम से बल रखें और इसे महाधमनी खोलने के लिए मार्गदर्शन के रूप में उपयोग करें (चित्रा 2 जी)।
- सभी रक्त के थक्कों को हटाने के लिए खारे घोल का उपयोग करें। एक बार जब सभी रक्त के थक्के हटा दिए जाते हैं, तो शरीर के द्रव्यमान या मानक कार्डियक वजन तालिकाओं (तालिका 1)11,13 के खिलाफ कार्डियक वजन का आकलन और तुलना करें।
- दिल को तौलें।
- यदि केवल एसए नोड रुचि का बिंदु है, तो बाएं वेंट्रिकल परीक्षा के बाद, पूरे दिल को पूरी तरह से 24 घंटे के लिए 10% तटस्थ-बफर्ड फॉर्मेलिन (एनबीएफ) में रखें, और क्रिस्टा टर्मिनलिस का नमूना लेने के लिए दाएं आलिंद को ट्रिम करें।
नोट: इस तकनीक द्वारा, बाएं और दाएं वेंट्रिकल की आसानी से सराहना की जा सकती है। बाएं और दाएं वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई के बीच का अनुपात 3: 1 है, जिसमें प्रजातियों और नस्ल द्वारा छोटे अंतर हैं; पशु भ्रूण के दिल के लिए, अनुपात 1: 112 है।
3. हिस्टोलॉजी के लिए नमूना प्रोटोकॉल16
- एक स्केलपेल के साथ, दो अनुदैर्ध्य, समानांतर कटौती (लगभग 5 मिमी अलग) बनाएं जिसमें दाएं आलिंद, ट्राइकसपिड वाल्व और दाएं वेंट्रिकुलर मुक्त दीवार शामिल हैं (चित्रा 2 आई)
- बाएं आलिंद, माइट्रल वाल्व, पृष्ठीय पैपिलरी मांसपेशी और बाएं वेंट्रिकल (चित्रा 2 एच) को शामिल करते हुए दो अनुदैर्ध्य समानांतर कटौती (लगभग 5 मिमी अलग) बनाएं।
- हृदय के पृष्ठीय ऊपरी-तिहाई के भीतर, इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम, राइट एट्रियम, महाधमनी, महाधमनी वाल्व और ट्राइकसपिड वाल्व (चित्रा 2 जे) सहित एक रेखा के बाद हृदय के आधार को ट्रांसवर्सल सेक्शन करें।
- महाधमनी और इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम (चित्रा 2 जे) के आधार को शामिल करते हुए दो अनुदैर्ध्य समानांतर कटौती करें।
- क्रिस्टा टर्मिनलिस के चारों ओर दाएं आलिंद को ट्रिम करें, और एसए नोड (चित्रा 3, चित्रा 4 आई और चित्रा 5 एच) के छह टुकड़े प्राप्त करने के लिए क्रिस्टा के अनुदैर्ध्य अक्ष (लगभग 3-4 मिमी अलग) पर ट्रांसवर्सल रूप से उन्मुख कई समानांतर खंड प्रदान करें।
- हिस्टोलॉजिकल कैसेट में प्राप्त ऊतकों को ट्रिम करें।
नोट: अनुशंसित ब्लॉकिंग प्रोटोकॉल: चरण 3.1.-हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 1 (चित्रा 6 इस ब्लॉक से परिणामी स्लाइड दिखाता है), चरण 3.2.-हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 2 (चित्रा 7 इस ब्लॉक से परिणामी स्लाइड दिखाता है), चरण 3.4.-हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 3 (चित्रा 8 इस ब्लॉक से परिणामी स्लाइड दिखाता है), चरण 3.5.-हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 4 (चित्रा 9 इस ब्लॉक से परिणामी स्लाइड दिखाता है)। - ऊतकों को कम से कम 48 घंटे के लिए 10% एनबीएफ में डुबोएं।
4. कोरोनरी धमनियों का नमूना 3,10,14
- कार्डियक पैराकोनल नाली से कोरोनरी धमनियों को विच्छेदित करने के लिए बल और एक स्केलपेल का उपयोग करें (चित्रा 4 के)। 10% एनबीएफ में रात भर कोरोनरी धमनी को ठीक करें।
- यदि आवश्यक हो, तो 8% फॉर्मिक एसिड और हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 1: 1 मिश्रण में पर्याप्त रूप से डीकैल्सीफाई करें।
- 3 मिमी अंतराल पर कई अनुप्रस्थ कटौती करें। अनुभागों को एक कैसेट में रखें और फिर एम्बेडिंग तक कैसेट को 10% एनबीएफ में रखें।
नोट: सूअरों का उपयोग मनुष्यों के लिए कार्डियक मॉडल के रूप में किया जा सकता है, खासकर जब यह कोरोनरी हृदय रोग की बात आती है। इसलिए, कोरोनरी धमनियों के पूरक नमूने और हिस्टोलॉजिकल वर्गों की सिफारिश की जाती है 3,10,14।
5. दिल के "चार कक्ष"/"इकोलॉजिकल प्लेन" विच्छेदन तकनीक 1,17
नोट: चार-कक्ष विच्छेदन तकनीक में मानक दृश्य 1 प्राप्त करने के लिए आधार से हृदय के शीर्ष तक एक कट होताहै। "चार-कक्ष" तकनीक निश्चित ऊतकों पर सबसे अच्छी तरह से लागू होती है।
- पूरे दिल को कम से कम 48 घंटे के लिए 10% एनबीएफ में रखें।
- कम से कम 48 घंटे (चित्रा 10 ए) के लिए 10% एनबीएफ में हृदय को स्थिर करने के बाद, दो दंतहीन सीधे विच्छेदन बल रखें, एक कपाल कावा-दाएं आलिंद-ट्राइकसपिड वाल्व-दाएं वेंट्रिकल के माध्यम से, और दूसरा फुफ्फुसीय नस-बाएं आलिंद-माइट्रल वाल्व-बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से (चित्रा 10 बी)।
- आधार से हृदय के शीर्ष तक काटने वाले ब्लेड के लिए मार्गदर्शन के रूप में बल भुजाओं के बीच की जगह का उपयोग करें (चित्र 10 सी)। चरण 5.2 में वर्णित अनुभाग के अलावा लगभग 5 मिमी अतिरिक्त अनुदैर्ध्य खंड प्रदान करें। कार्डियक सेगमेंट पर, जिसमें महाधमनी शामिल है।
- ट्रांसवर्सल चीरा के साथ, कार्डियक बेस को एपेक्स से पूरी तरह से अलग करें। प्रत्येक ऊतक खंड को एक हिस्टोलॉजिकल कैसेट में रखें।
नोट: अनुशंसित ब्लॉकिंग प्रोटोकॉल: कार्डियक एपेक्स-हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 5 (चित्रा 11 ए इस ब्लॉक से परिणामी स्लाइड दिखाता है), कार्डियक बेस-हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 6 (चित्रा 11 बी इस ब्लॉक से परिणामी स्लाइड दिखाता है)। - एम्बेडिंग तक कैसेट को 10% एनबीएफ में रखें। सभी हृदय के नमूनों को 10% एनबीएफ (ऊतक की मात्रा से 10 गुना से अधिक) में ठीक करें, नियमित रूप से उन्हें पैराफिन मोम में संसाधित करें, 4 μm मोटाई पर अनुभाग, और हेमटोक्सीलिन और ईओसिन दाग (एच एंड ई दाग) के साथ दाग पहले वर्णित प्रोटोकॉल10 का पालन करें।
नोट: यदि मायोकार्डिटिस का संदेह है, तो "ताजा हृदय ऊतक के एक टुकड़े को रोगाणुविज्ञानी और वायरल अध्ययन के लिए बाँझ शल्य चिकित्सा सामग्री और बाँझ नमूना कंटेनर के साथ बाँझ परिस्थितियों में बनाए रखा जाना चाहिए"।
6. फोटोग्राफिक प्रलेखन
नोट: फोटोग्राफिक प्रलेखन नेक्रोपसी परीक्षा में एक वैकल्पिक कदम है। हालांकि, फोटोग्राफी और वीडियो रिकॉर्डिंग "सामान्य और असामान्य शरीर रचना विज्ञान का सटीक प्रलेखन" होने के लिए आवश्यक हैं।
- उचित फोटोग्राफिक प्रलेखन के लिए, "हृदय के ऊतकों का प्रगतिशील विच्छेदन" करते समय डिजिटल छवियां लें। फोटोग्राफिक प्रलेखन और फोटोग्राफ15 के लिए दिशानिर्देशों को देखें सामान्य दृश्य-पूर्वकाल और पीछे; दिल का एक टुकड़ा; और कोई भी संदिग्ध घाव।
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Representative Results
इस प्रोटोकॉल का उपयोग शारीरिक विशेषताओं की कल्पना करने और चार अलग-अलग प्रजातियों (कुत्ते, बिल्ली, सुअर और गाय) में हृदय की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा के लिए नमूने एकत्र करने के लिए किया गया था। नेक्रोपसी प्रोटोकॉल को उपर्युक्त प्रजातियों में से प्रत्येक में दोहराया गया था लेकिन केवल कुत्तों में चित्रित किया गया था। नेक्रोपसी प्रोटोकॉल शरीर की व्यापक बाहरी परीक्षा (चित्रा 1 ए) (त्वचा, एक्सप्लोरेबल लिम्फ नोड्स और बाहरी म्यूकोसा सहित) के साथ शुरू होता है, समग्र वजन को मापता है, और जानवर की सामान्य स्थिति को स्कोर करता है। बाहरी परीक्षा के बाद, नेक्रोपसी शरीर की आंशिक खाल के साथ जारी रहती है (सबक्यूटिस और सतही मांसपेशियों की पूरी तरह से जांच करने के लिए निर्देशित) और मुख्य शरीर गुहाओं (चित्रा 1 बी-डी) के उद्घाटन के साथ।
पेट की गुहा आमतौर पर सबसे पहले जांच की जाती है (चित्रा 1 सी), इसके बाद पेरिटोनियल गुहा और पेट के अंगों की एक व्यापक सीटू परीक्षा होती है, इसके बाद डायाफ्राम का विभाजन होता है, और अंत में दाहिने हेमिथोरैक्स को हटा दिया जाता है (चित्रा 1 डी)। इस तकनीक द्वारा, थोराकोएब्डोमिनल अंगों (पेरिकार्डियल गुहा और हृदय सहित) की एक अच्छी सीटू परीक्षा प्राप्त की जा सकती है, साथ ही साथ स्थानीय रक्त वाहिकाओं, लसीका, स्नायुबंधन और नसों के साथ इन अंगों के लिंक का उचित मूल्यांकन करने की अनुमति मिलती है। पेरिकार्डियल गुहा की परीक्षा हृदय की अनुदैर्ध्य धुरी के बाद पार्श्विका पेरिकार्डियम के व्यापक विभाजन द्वारा प्राप्त की जाती है, इसके बाद फेफड़े के पैरेन्काइमा के करीब हृदय की बड़ी वाहिकाओं को विभाजित करके हृदय को हटा दिया जाता है। हृदय की बाहरी परीक्षा के बाद कार्डियक गुहाओं का सेक्शनिंग किया जाता है, जो एक व्यापक निरीक्षण की अनुमति देता है और अंत में, हिस्टोपैथोलॉजी के लिए ऊतक के नमूनों की उचित कटाई करता है। संक्षेप में, दो हृदय विच्छेदन तकनीकों की प्रक्रिया और परिणाम, "रक्त प्रवाह" (चित्रा 2, चित्रा 3, चित्रा 4, और चित्रा 5) और "चार कक्ष" (चित्रा 10) प्रस्तुत किए गए हैं।
"रक्त प्रवाह" तकनीक का उपयोग कुत्तों, सूअर और जुगाली करने वालों के दिल में किया गया था (चित्रा 2, चित्रा 4, और चित्रा 5)। शरीर से दिल को हटाने के बाद, बाहरी विन्यास देखा गया (चित्रा 2 ए, चित्रा 4 ए, और चित्रा 5 ए)। विच्छेदन करते समय, किसी को एट्रियल कॉन्फ़िगरेशन, क्रिस्टा टर्मिनलिस पर ध्यान देना चाहिए, जो कि साइनोएट्रियल नोड (चित्रा 2 बी, चित्रा 4 बी और चित्रा 5 बी) के लिए पहचान का मैक्रोस्कोपिक तत्व है। प्रोटोकॉल (चित्रा 2 बी-जी, चित्रा 4 बी-जी, और चित्रा 5 बी-जी) के चरणों के साथ आगे बढ़ने के बाद, विच्छेदन पूरा हो गया है, और हिस्टोलॉजी के लिए कटाई प्रोटोकॉल शुरू किया जा सकता है (चित्रा 2 एच-जे, चित्रा 4 जी-जे, और चित्रा 5 एच-के)। वैकल्पिक रूप से, क्रिस्टा टर्मिनलिस को 10% एनबीएफ में दिल तय करने के बाद भी काटा जा सकता है (चित्रा 3)। कुत्तों की तुलना में, सूअर के दिल में एक अतिरिक्त कदम उठाया जाना है- कोरोनरी धमनी की कटाई (चित्रा 4 के)।
कटाई के बाद, नमूनों को 10% एनबीएफ में तय किया गया था, नियमित रूप से पैराफिन मोम में संसाधित और एम्बेडेड किया गया था, और अंत में 4 μm पर वर्गीकृत किया गया था, और H & E द्वारा दाग दिया गया था। इस तकनीक द्वारा प्राप्त हिस्टोलॉजिकल स्लाइड्स में आमतौर पर निम्नलिखित शामिल हैं: 1) दाएं आलिंद और वेंट्रिकल के एपिकार्डियम, मायोकार्डियम और एंडोकार्डियम, ट्राइकसपिड वाल्व, और हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 1 के लिए कोरोनरी धमनियां (चित्रा 6); 2) बाएं आलिंद और वेंट्रिकल के एपिकार्डियम, मायोकार्डियम और एंडोकार्डियम, माइट्रल वाल्व, कोरोनरी धमनियों और हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 2 के लिए हृदय तंत्रिकाएं (चित्रा 7); 3) मायोकार्डियम, इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम का एंडोकार्डियम, और दाहिने आलिंद का एपिकार्डियम, और हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 3 के लिए ट्राइकसपिड वाल्व (चित्रा 8); 4) हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 4 (चित्रा 9) के लिए एसए नोड से कई खंड; 5) हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 5 (चित्रा 11 ए) के लिए हृदय के शीर्ष (बाएं और दाएं वेंट्रिकल और इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम) के एपिकार्डियम, मायोकार्डियम और एंडोकार्डियम; और 6) हिस्टोलॉजिकल ब्लॉक 6 (चित्रा 11 बी) के लिए हृदय के आधार (बाएं और दाएं एट्रिया, वेंट्रिकल्स, इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम, एट्रियोवेंट्रिकुलर वाल्व और कोरोनरी धमनियों) के एपिकार्डियम, मायोकार्डियम और एंडोकार्डियम।
चित्रा 1: एक कुत्ते में नेक्रोपसी तकनीक। (ए) विषय को बाईं ओर रखना; (बी) पेट की गुहा का खुलना; (सी) वक्ष गुहा का उद्घाटन; (डी) वक्ष गुहा की जांच। 1-7 अनुशंसित चीरों के स्थानों और क्रम को इंगित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: कुत्ते के दिल में विच्छेदन और नमूना प्रोटोकॉल। (ए) दिल का बाहरी विन्यास; (बी) पुच्छल कावा से शुरू करें और दाएं आलिंद को ट्रिम करें, दाएं आलिंद खोलें और क्रिस्टा टर्मिनलिस का निरीक्षण करें; (सी) इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ जंक्शन के साथ दाएं वेंट्रिकल को ट्रिम करें; ट्राइकसपिड वाल्व प्रदर्शित करें; (डी) कॉर्डे टेंडिने को काटने के बाद, दाएं वेंट्रिकल की जांच करें और पैराकोनल नाली के साथ कट जारी रखें; (ई) फुफ्फुसीय ट्रंक के माध्यम से बल को पारित करें और कट का मार्गदर्शन करने के लिए उनका उपयोग करें; फुफ्फुसीय बहिर्वाह की जांच करें; (एफ) बाएं आलिंद को 1-खोलें, आधार से 2-, शीर्ष तक काटा जाए; माइट्रल वाल्व और बाएं वेंट्रिकल की जांच करें; (जी) महाधमनी के माध्यम से बल को पारित करें और कट का मार्गदर्शन करने के लिए उनका उपयोग करें; महाधमनी की जांच करें; (एच) बाएं दिल के साथ दो कट बनाएं और मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (I) दाहिने दिल के साथ दो कट बनाएं, मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें, और क्रिस्टा टर्मिनलिस को ट्रिम करें; (जे) दिल के आधार को ट्रिम करें, टुकड़े के साथ दो कट बनाएं, और मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें। संक्षेप: सैन = साइनोएट्रियल नोड; एनबीएफ = तटस्थ-बफर्ड फॉर्मेलिन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 3: फॉर्मेलिन-फिक्स्ड हार्ट से क्रिस्टा टर्मिनल का नमूना। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 4: सुअर के दिल में विच्छेदन और नमूना प्रोटोकॉल। (ए) दिल का बाहरी विन्यास; (बी) पुच्छल कावा से शुरू करें और दाएं आलिंद को खंड करें, दाएं आलिंद की जांच करें, क्रिस्टा टर्मिनलिस का पता लगाएं, और दाएं वेंट्रिकल को खोलना शुरू करें; (सी) इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ जंक्शन के साथ दाएं वेंट्रिकल को ट्रिम करें और ट्राइकसपिड वाल्व की जांच करें; (डी) कॉर्डे टेंडिने को काटने के बाद, दाएं वेंट्रिकल की जांच करें, फुफ्फुसीय ट्रंक के माध्यम से बल रखें, और कट का मार्गदर्शन करने के लिए उनका उपयोग करें; (ई) फुफ्फुसीय बहिर्वाह की जांच करें; बाएं आलिंद को विभाजित करने के बाद, बाएं वेंट्रिकल को आधार से शीर्ष तक काट लें; (एफ) माइट्रल वाल्व और बाएं वेंट्रिकल की जांच करें, और कॉर्डे टेंडिने को काटें; महाधमनी के माध्यम से बल रखें और कट का मार्गदर्शन करने के लिए उनका उपयोग करें; (जी) महाधमनी की जांच करें, बाएं दिल के साथ दो कट लगाएं, मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (एच) दाहिने दिल के साथ दो कट लगाएं; मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (I) क्रिस्टा टर्मिनल को ट्रिम करें, टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (जे) दिल के आधार को ट्रिम करें, टुकड़े के साथ दो कट बनाएं, और मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (के) कोरोनरी धमनी को ट्रिम करें, इसे रात भर ठीक करें, और फिर 3 मिमी अंतराल पर कई अनुप्रस्थ कटौती करें। संक्षिप्त नाम: एनबीएफ = तटस्थ-बफर्ड फॉर्मेलिन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 5: गाय के दिल में विच्छेदन और नमूना प्रोटोकॉल। (ए) दिल का बाहरी विन्यास; (बी) पुच्छल कावा से शुरू करें और दाएं आलिंद को खंड करें, दाएं आलिंद की जांच करें, क्रिस्टा टर्मिनलिस का पता लगाएं, और दाएं वेंट्रिकल को खोलना शुरू करें; (सी) इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ जंक्शन के साथ दाएं वेंट्रिकल को ट्रिम करें, और ट्राइकसपिड वाल्व की जांच करें; (डी) पैराकोनल नाली के साथ समानांतर कट जारी रखें, फुफ्फुसीय ट्रंक के माध्यम से बल को पारित करें, और कट का मार्गदर्शन करने के लिए उनका उपयोग करें; (ई) फुफ्फुसीय बहिर्वाह की जांच करें, फुफ्फुसीय नसों और बाएं आलिंद को काटना शुरू करें, और फिर बाएं वेंट्रिकल को आधार से शीर्ष तक काटना जारी रखें; (एफ) माइट्रल वाल्व और बाएं वेंट्रिकल की जांच करें, और कॉर्डे टेंडिने को काटें; (जी) महाधमनी के माध्यम से बल को पारित करें, कट का मार्गदर्शन करने के लिए उनका उपयोग करें, और महाधमनी की जांच करें; (एच) क्रिस्टा टर्मिनल को ट्रिम करें, और टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (I) बाएं दिल के साथ दो कट बनाएं, और बीच के टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (जे) दाहिने दिल के साथ दो कट बनाएं, और मध्य टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें; (K) हृदय के आधार को काट लें, टुकड़े के साथ दो कट लगाएं, और बीच के टुकड़े को 10% एनबीएफ में रखें। संक्षिप्त नाम: एनबीएफ = तटस्थ-बफर्ड फॉर्मेलिन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 6: कुत्ते के दिल में दाएं वेंट्रिकल, दाएं आलिंद और ट्राइकसपिड वाल्व की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा। एच एंड ई धुंधला। (ए) दाएं वेंट्रिकल, दाएं आलिंद और ट्राइकसपिड वाल्व का हिस्टोलॉजिकल नमूना; (बी) दाएं वेंट्रिकल, दाएं आलिंद, और ट्राइकसपिड वाल्व। स्केल सलाखों = 500 μm; (सी) दाएं वेंट्रिकल, दाएं आलिंद और कोरोनरी धमनियां। स्केल सलाखों = 100 μm; (डी) दाहिना आलिंद। स्केल सलाखों = 500 μm. संक्षिप्तीकरण: H & E = हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन; आरवी = दायां वेंट्रिकल; आरए = दाहिना आलिंद; टीएस-वी = ट्राइकसपिड वाल्व; सीए = कोरोनरी धमनी; ईएनसी = एंडोकार्डियम; एमसी = मायोकार्डियम; ईपीसी = एपिकार्डियम। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 7: एक कुत्ते के दिल में बाएं वेंट्रिकल, बाएं आलिंद और माइट्रल वाल्व की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा। एच एंड ई धुंधला। (ए) बाएं वेंट्रिकल, बाएं आलिंद और माइट्रल वाल्व का हिस्टोलॉजिकल नमूना; (बी) बाएं आलिंद। स्केल सलाखों = 500 μm; (सी) बाएं आलिंद, बाएं वेंट्रिकल, कोरोनरी धमनी और तंत्रिका। स्केल सलाखों = 100 μm; (डी) कोरोनरी धमनी, तंत्रिका। स्केल बार = 50 μm. संक्षिप्तीकरण: H & E = हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन; एलए = बाएं आलिंद; एलवी = बाएं वेंट्रिकल; एमटी-वी = माइट्रल वाल्व; सीए = कोरोनरी धमनी; ईएनसी = एंडोकार्डियम; एमसी = मायोकार्डियम; ईपीसी = एपिकार्डियम; एनवी = तंत्रिका। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 8: एक कुत्ते के दिल में इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम, दाएं आलिंद और ट्राइकसपिड वाल्व की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा। एच एंड ई धुंधला (ए) इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम, दाएं आलिंद, और ट्राइकसपिड वाल्व-हिस्टोलॉजिकल नमूना; (बी) इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम, राइट एट्रियम और ट्राइकसपिड वाल्व। स्केल सलाखों = 500 μm. संक्षिप्तीकरण: H & E = हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन; आईवीएस = इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम; आरए = दाहिना आलिंद; टीएस-वी ट्राइकसपिड वाल्व। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 9: एक कुत्ते के दिल में साइनोएट्रियल नोड की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा। एच एंड ई धुंधला। (ए) क्रिस्टा टर्मिनलिस का हिस्टोलॉजिकल नमूना; (बी) साइनोएट्रियल नोड 4 एक्स आवर्धन। स्केल सलाखों = 500 μm; (सी) सिनोएट्रियल नोड 20 एक्स आवर्धन। स्केल सलाखों = 100 μm; (डी) साइनोएट्रियल नोड 40 एक्स आवर्धन। स्केल बार = 50 μm. संक्षिप्तीकरण: H & E = हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन; एसए नोड = साइनोएट्रियल नोड। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 10: बिल्ली के फॉर्मलिन-फिक्स्ड दिल पर विच्छेदन प्रोटोकॉल। (ए) दिल का बाहरी विन्यास; (बी) कपाल कावा और फुफ्फुसीय नसों के माध्यम से बल पारित करना; फोर्सेस आधार से शीर्ष तक अनुदैर्ध्य खंड का मार्गदर्शन करते हैं; (सी) कटौती के बाद चार-कक्ष दृश्य। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 11: एक बिल्ली के दिल के हिस्टोलॉजिकल नमूने। एच एंड ई धुंधला। (ए) हृदय-हिस्टोलॉजिकल नमूने का शीर्ष; (बी) हृदय-हिस्टोलॉजिकल नमूने का आधार। संक्षिप्तीकरण: एच एंड ई = हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन; एलवी = बाएं वेंट्रिकल; आईवीएस = इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम; आरवी = दायां वेंट्रिकल; एलए = बाएं आलिंद; एमवी = माइट्रल वाल्व; टीएस-वी = ट्राइकसपिड वाल्व; आरए = दाहिना आलिंद। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
| प्रजातियां | उम्र | औसत %BW | (LV + S)/RV | उद्धरण संख्या |
| बिल्ली | नवजात | 0.77% | - | 7 |
| बिल्ली | वयस्क | 0.33%-0.46% | 2.94-4.17 | 8, 5, 11 |
| कुत्ता | नवजात | 0.47%-0.76% | - | 8, 7 |
| कुत्ता | वयस्क | 0.70%-0.85% | 2.39-5.12 | 8, 6, 11 |
| सुअर | वयस्क | 0.32%-0.48% | 2.38-3.84 | 11 |
| भेड | वयस्क | 0.17%-0.65% | 2.63-4.54 | 11 |
| गाय | वयस्क | 0.30%-0.66% | 2.43-4.00 | 11 |
तालिका 1: जानवरों में सामान्य दिल के वजन / शरीर के वजन अनुपात और वेंट्रिकुलर अनुपात के लिए संदर्भ मान। बिल्ली, कुत्ते, सुअर, भेड़ और गाय के लिए कार्डियक माप। संक्षेप: बीडब्ल्यू = शरीर का वजन; एलवी = बाएं वेंट्रिकल; एस = इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम; आरवी = दायां वेंट्रिकल।
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Discussion
वर्तमान प्रोटोकॉल का प्रदर्शन करते समय, लगातार परिणामों के लिए कई महत्वपूर्ण चरणों पर सावधानीपूर्वक विचार किया जाना चाहिए। युवा जानवरों में, हृदय माप वयस्कों (वेंट्रिकुलर दीवार मोटाई सहित) से अलग होते हैं, और आम तौर पर, हृदय शरीर के वजन11,12 के अधिक अनुपात का प्रतिनिधित्व करता है। वेंट्रिकुलर हाइपरट्रॉफी की डिग्री को एक सामान्य वजन सूत्र लागू करके निर्धारित किया जा सकता है, बाएं वेंट्रिकल प्लस सेप्टम के बीच का अनुपात मुक्त दाएं वेंट्रिकल वजन से विभाजित होता है, जो सामान्य परिस्थितियों में, परिपक्व जानवरों में 2.8-4.0 होना चाहिए (तालिका 1)। यदि यह अनुपात 4.0 से अधिक है, तो यह बाएं वेंट्रिकुलर हाइपरट्रॉफी को इंगित करता है, और यदि यह 2.8 से कम है, तो यह दाएं वेंट्रिकुलर हाइपरट्रॉफी 4,11,12 को इंगित करता है। कक्ष के मूल्य को प्राप्त करने के लिए, दाईं वेंट्रिकुलर मुक्त दीवार को इंटरवेंट्रिकुलर दीवार के साथ विच्छेदित किया जाना चाहिए और कोरोनरी नाली को दाएं आलिंद से अलग किया जाना चाहिए। बाएं आलिंद से बाएं वेंट्रिकल का विच्छेदन एट्रियोवेंट्रिकुलर रिंग4 में किया जाता है।
बड़ी वाहिकाओं को विभाजित करके हृदय को शरीर से अलग किया जाता है। यदि बड़ी वाहिकाओं के खंड हृदय के आधार के बहुत करीब हैं, तो कई संरचनाओं से समझौता किया जा सकता है, मुख्य रूप से एट्रिया और ऑरिकल्स। प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाने के लिए, दिल के आधार के ऊपर बड़ी वाहिकाओं को ठीक से विभाजित करने के लिए दिल को धीरे से खींचना आवश्यक है। एक दूसरा महत्वपूर्ण कदम क्रिस्टा टर्मिनलिस की आकृति विज्ञान को पहचान रहा है, जो एक असतत शारीरिक संरचना है जिसके लिए हृदय के विस्तृत संरचनात्मक ज्ञान की आवश्यकता होती है। हिस्टोलॉजिकल प्रक्रिया के दौरान ब्लॉकों के भीतर ऊतक के नमूनों की व्यवस्था के लिए एसए नोड को सावधानीपूर्वक काटा और एम्बेडेड किया जाना चाहिए।
"चार-कक्ष" तकनीक का संशोधन हिस्टोलॉजिकल ब्लॉकिंग योजना को एक ब्लॉक से दो में बदलना था। मोटे तौर पर उपयोग किए जाने वाले हिस्टोलॉजिकल कैसेट्स और अनुकूलित हिस्टोलॉजिकल प्रक्रिया (रोटरी माइक्रोटोम स्टेनिंग स्टेशन सहित) के मानक आयाम ऊतक विकृति के बिना एक ब्लॉक में हृदय के पूरे खंड को फिट करने के लिए उपयुक्त नहीं हैं। यद्यपि "चार-कक्ष" तकनीक हृदय कक्षों की संरचना की परीक्षा को आसान बनाती है, यह प्रवाहकीय प्रणाली की परीक्षा को सीमित करती है। यह उन मामलों में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जब हृदय अतालता प्रलेखित है। इसके अलावा, यह देखते हुए कि "चार-कक्ष" तकनीक को एनबीएफ में तय ऊतक की आवश्यकता होती है, जीवाणु विज्ञान और आणविक जीव विज्ञान जैसी कई अतिरिक्त परीक्षाओं को एक निश्चित डिग्री तक समझौता किया जा सकता है।
जब बिल्ली या छोटे आकार के कुत्ते के दिल की बात आती है, तो निश्चित ऊतक पर एक सटीक मानक इकोलॉजिकल योजना प्राप्त की जाती है। चार-कक्ष दृश्य सहायक है, खासकर कक्ष आयामों के लिए, यदि वेंट्रिकुलर या एट्रियल आकार1 में भिन्नताएं हैं। इकोकार्डियोग्राफी द्वारा नैदानिक परीक्षा के दौरान प्राप्त किए गए सकल-ट्रिमिंग के सही सुपरपोजिशन से संबंधित लाभों के अलावा, यह तकनीक केवल दो हिस्टोलॉजिकल ब्लॉकों में हृदय के अधिकांश प्रमुख घटकों को शामिल करने का लाभ प्रस्तुत करती है।
सूअरों में वर्णित "इनफ्लो-आउटफ्लो" विधि को कोरोनरी धमनी नमूनाकरण चरण को जोड़कर मनुष्यों के दिलों में उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल से अनुकूलित किया गया था। वर्तमान में वर्णित हृदय विच्छेदन प्रोटोकॉल नमूनाकरण के लिए मानक बिंदुओं को चित्रित करते हैं। इसके अतिरिक्त, जब डिस्सेक्टर प्रोटोकॉल में शामिल लोगों के अलावा अन्य घावों को देखता है या संदेह करता है, तो पूरक नमूने रुचि के क्षेत्रों से एकत्र किए जाने चाहिए।
वर्तमान प्रोटोकॉल विकसित करते समय, अन्य तरीकों का अध्ययन किया गया था, जैसे कि विधि जिसमें प्रमुख कार्डियक कर्व्स12 और "ब्रेड लोफ" / शॉर्ट-एक्सिस तकनीक 9,11 का प्रारंभिक अनुदैर्ध्य कट शामिल है। प्रमुख कार्डियक कर्व्स के अनुदैर्ध्य कट को शामिल करने वाली तकनीक एक सरल प्रोटोकॉल है जो अक्सर बायोमेडिकल शिक्षा12 में उपयोग किया जाता है। शॉर्ट-एक्सिस सेक्शनिंग तकनीक ("ब्रेड लोफ तकनीक") को एक छोटे अक्ष खंड11 या शीर्ष से आधार की ओर 1-2 सेमी मोटाई के वर्गों की एक श्रृंखला के साथ किया जा सकता है, जिससे एट्रियोवेंट्रिकुलर तंत्रबरकरार रहता है। यह तकनीक सबसे उपयुक्त है यदि डिस्सेक्टर को मायोकार्डियल पैथोलॉजी (भड़काऊ विकृति और कार्डियोमायोपैथी सहित) पर संदेह है, लेकिन वाल्वुलर घटकों की सतही परीक्षा का नुकसान है।
इन दोनों तकनीकों को हृदय शरीर रचना विज्ञान के अपेक्षाकृत बुनियादी ज्ञान वाले व्यक्तियों द्वारा आसानी से महारत हासिल की जाती है, लेकिन प्रत्येक हृदय घटक के हिस्टोलॉजिकल नमूने और भार के लिए मजबूत बिंदुओं की कमी होती है। इन विधियों के साथ आगे बढ़ने के बाद, बाद की कटाई प्रक्रिया में रुचि के क्षेत्रों की पहचान करने और निरंतर नमूने प्राप्त करने के लिए श्रमसाध्य कार्य शामिल है। इन विधियों का उपयोग करके विच्छेदित दिलों पर, दो हिस्सों के अलग-अलग वजन के लिए उनके बीच के अनुपात की गणना करने में सक्षम होने के लिए प्रयास की आवश्यकता होती है। शॉर्ट-एक्सिस विधि को एंडोकार्डियम और हृदय के आधार पर स्थित सभी घटकों की परीक्षा के लिए अतिरिक्त चरणों की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, इन विधियों का पालन करने वाली कटाई प्रक्रिया में रुचि के क्षेत्रों की पहचान करने और निरंतर नमूने प्राप्त करने के लिए श्रमसाध्य कार्य शामिल हैं।
यह पांडुलिपि कुछ मानक कार्डियक विच्छेदन प्रोटोकॉल के प्रमुख तत्वों को प्रस्तुत करती है, जो सकल परीक्षा दृष्टिकोण और आमतौर पर हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा के लिए उपयोग की जाने वाली नमूना साइटों दोनों पर प्रकाश डालती है। तकनीक के भविष्य के अनुप्रयोगों के बारे में, प्रस्तुत प्रोटोकॉल का मुख्य उद्देश्य हृदय विच्छेदन के लिए एक मजबूत दिशानिर्देश प्रदान करना है जिसे सभी प्रयोगात्मक अध्ययनों में आसानी से उपयोग किया जा सकता है जिनके लिए विस्तृत हृदय मूल्यांकन की आवश्यकता होती है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।
Acknowledgments
कोई नहीं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% saline solution | B. BRAUN MELSUNGEN AG | W04479004 | For washing all the blood, and blood clots from the heart. |
| 10% neutral buffered formalin (NBF) | Q Path | 11699404 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Bone cutting forceps | HELEN SRL | LS109HV | Sturdy instrument for cutting bone. |
| Cutting board | Ambition | 86304 | For an easier manipulation, and cutting the organs. |
| Decalcifying solution | Thermo Scientific TBD-2 | 6764004 | 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid. |
| Digital camera | Canon Inc. | PowerShot SX540 HS | For photographic, and videographic documentation. |
| Forceps | MKD-Medicale | 15-430 | Dissection instruments. |
| Histological cassettes | Q Path | 720-2215 | Materials for collecting histopathology samples. Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm |
| Knife | TEHNO FOOD COM SERV SRL | D2006/15 | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Latex gloves | MKD-Medicale | SANTEX-S | Protection equipment. |
| Mask | MKD-Medicale | 21221 | Protection equipment. |
| Petri dishes | MKD-Medicale | 0598-1V | Materials for collecting ancillary testing samples. |
| Plastic recipients | Corning Gosselin | TP200-02 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Scale | ESPERANZA | MEEKS008 | For weighing the organs. |
| Scale | White Deals | 72 | For weighing the subjects. |
| Scalpel | MKD-Medicale | 10322E | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Scissors | MKD-Medicale | 13-260 | Dissection instruments. |
| Scrub | MKD-Medicale | 410100-52 | Protection equipment. |
| Syringes | MKD-Medicale | 10573EU | Materials for collecting ancillary testing samples. |
References
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