Name: Isolamento e expansão em grande escala de Adulto Humanos endotelial Colony Células Progenitoras Forming (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-28T07:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: Aprenda a isolar e expandir células progenitoras endoteliais (ECFCs) de sangue periférico humano usando lisado plaquetário humano. Este método sem soro animal reduz riscos de imunização e oferece protocolo confiável para pesquisa vascular.

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Os autores agradecem a Dra. Katharina Schallmoser para fornecer pHPL e Margaretha Frühwirth e Daniela Thaler para assistência técnica excelente.

A.) ECFC ISOLATON DIA 1: <ol><li> Antes de começar a preparar com a experiência da célula endotelial Crescimento meio de cultura Médio-2 (EGM-2). Suplemento 500ml endotelial Basal Medium-2 com heparina (1ml de 1000 U / ml), solução de 100x 5ml de penicilina / estreptomicina (todos Sigma, St. Louis, MO; <a href="http://www.sigmaaldrich.com/">www.sigmaaldrich.com</a> ), L-glutamina (concentração final de 2 mM ), e 50 ml de lisado de plaquetas agrupadas humano (pHPL). Em seguida, adicionar 0,2 ml de hidrocortisona, 2 ml hFGF-B, 0,5 ml VEGF, EGF 0,5 ml, 0,5 ml de IGF-1 e 0,5 ml de ácido ascórbico (fornecido como SingleQuots, todos Lonza, Walkersville, MD; <a href="http://www.lonzabioscience.com/">http://www.lonzabioscience. com /</a> ). Estéril filtrado o meio através de um m-pore size 0,2 500 ml de filtro a vácuo Millipore. Desde pHPL formas pequenos coágulos que podem precisar de dois filtros para um médio. Pré-aquecer filtrada EGM-2 para 37 ° C em banho-maria </li><li> Coletar as amostras de sangue, chamando 5 ml de sangue periférico humano adulto a partir da veia cubital em um tubo de 6ml conservante livre vacutainer heparina sódica-sangue. Você deve processar as amostras de sangue dentro de um máximo de duas horas. </li><li> Comece por preparar um centímetro 75 2 (T75; Costar) frasco com uma tampa de ventilação, uma pipeta 25 ml e dois de 5 pipetas ml em uma bancada de fluxo laminar. </li><li> Pré-preencher 15 ml pré-aquecido complementada EGM-2 para o balão com a pipeta de 25 ml. Agora, abra o frasco da amostra de sangue e todos os 5 ml com a pipeta de 5 ml para o balão. Lavar o frasco vazio de sangue com 5 ml de adicionais EGM-2 com o segundo pipeta de 5 ml. O volume total dentro da T75 é de 25 ml. Feche a tampa de ventilação do frasco e coloque em uma incubadora a 37 ° C, 5% CO 2 e umidade de 95% para 24 horas. </li></ol> 2 º DIA: <ol><li> Após aproximadamente 24 horas (durante a noite), você deve remover a mistura meio-sangue para se livrar de células não aderentes. Para este preparar duas pipetas de 25 ml e três pipetas 5 ml no fluxo laminar, pré-aquecer 20 ml de suplementada EGM-2 (preparada no dia anterior) e 30 ml de PBS a 37 ° C em banho-maria. </li><li> Retirar o balão com a amostra da incubadora e remover todos os sobrenadante com uma pipeta de 25 ml. Tome cuidado para não arranhar a superfície frasco para evitar danificar qualquer colônia potencial. Lavar o frasco de superfície interna adesão celular três vezes suavemente adicionando 10 ml de PBS pré-aquecido e inclinando o frasco de um lado para o outro. Remover o PBS imediatamente cada vez e descarte. </li><li> Adicionar 20 ml de EGM-2 pré-aquecido fresco para o frasco e colocá-lo de volta para a incubadora. Este processo deve ser realizado o mais rápido e suave quanto possível para as células anexado não para separar. ECFCs desprendem facilmente, se forem mantidos em PBS ou à temperatura ambiente para a longa. </li><li> Tela através do frasco sistemicamente dias a cada segundo a partir de dois dias usando uma baixa ampliação de um microscópio de luz procurando conseqüência ECFC. Quando uma colônia é encontrado marca no topo do lado externo do frasco, indicando a posição da colônia. Note que o flaks não deveria estar fora da incubadora por mais de 5 minutos. </li></ol> DIA 5: <ol><li> No quinto dia após a semeadura realizar uma mudança meio completo para remover as células não aderentes. Para este efeito, pré-aquecer 20 ml da EGM-2 para 37 ° C em banho-maria e preparar duas pipetas de 25 ml. </li><li> Remova o meio completo, utilizando uma pipeta de 25 ml e adicionar fresco, EGM-2 pré-aquecido complementado o mais rapidamente possível. Células não deve ser deixado sem meio de mais de um minuto para evitar a secagem. Coloque de volta para a incubadora e repita o frasco de triagem diária. </li><li> Alimentar as células, substituindo 30% da média complementado com novas EGM-2 duas vezes por semana. </li></ol> DIA 14-28: <ol><li> Colônias com morfologia típica de calçada deve aparecer por volta do dia 12. Marcar a parte superior externa do frasco para indicar a posição de cada colônia. Permitir que as colônias de crescer até o dia 28, a menos que uma única célula começa a destacar. Uma vez, colônias primário foram identificados, podem ser colhidas entre os dias 14 e 28, dependendo do seu tamanho. </li></ol> B.) ECFC HARVEST <ol><li> Pré-aquecer 5 ml de tripsina 0,05% / EDTA, 20 ml e 5 ml PBS fresco suplementado EGM-2. </li><li> Remover completamente o meio do balão para um tubo Falcon (tomar cuidado para não tocar na superfície do frasco para evitar danificar qualquer colônia potencial) e lavar cuidadosamente as células com 10 ml PBS pré-aquecido. </li><li> Adicionar 5 ml de tripsina / EDTA e incubar por 5 minutos na incubadora. As células não devem ser expostas à tripsina por mais de 7 min, uma vez que se torna tóxica. Exaustivamente batendo nos lados do frasco ajuda as células a separar. Saciar a atividade de protease tripsina, adicionando cerca de 10 ml do meio de cultura preservada utilizada. </li><li> Anular a suspensão de células em um 50 ml Falcotubo n. Lavar o frasco uma vez com 10 ml PBS que é então adicionado à suspensão de células colhidas. Centrifugar a suspensão celular a 300 g por 7 min a 4 ° C para coletar as células e remover a tripsina. Desprezar o sobrenadante e ressuspender o pellet celular imediatamente em 1 ml de PBS. Manter no gelo. </li><li> Determine o número de células, como descrito em um protocolo JOVE por R. Ricardo e Phelani K. 5. </li></ol> C.) ECFC EXPANSÃO <ol><li> Suplemento 500 ml EGM-2, conforme descrito em A 1.1). Pré-aquecer a 37 ° C em banho-maria. </li><li> Para cerca de 2500 cm 2 de espaço de cultura, quer preparar uma 11 T220 (225 cm 2) ou 15 T175 (175 cm 2) ou uma fábrica de células de quatro camadas (CF-4; Nunc, Naperville, IL; <a href="http://www.nuncbrand.com/">http://www.nuncbrand . com</a> ). Além disso, você vai precisar de dois frescos de ventilação-caps e um funil especial estéril na bancada de fluxo laminar. </li><li> Para ECFCs semente em uma densidade celular inicial de 100 c / cm 2 cálculo do número de células é necessário. Para uma CF-4 252.800 células são ressuspendidas em 500 ml fresco EGM-2 e derramado no CF-4 usando o funil estéril. Fechar um painel com a abertura cap-and-tilt a CF-4 lado longitude para um, permitindo uma distribuição igual do meio entre todas as quatro farinhas. Em seguida, incline a câmara para trás e abrir a tampa do respiradouro-cap. Coloque CF-4, em incubadora. </li><li> Mudança de 20% do meio de pelo menos uma vez por semana até CF-4 é confluente. </li><li> Células colheita, conforme descrito no B.) usando 70 ml de tripsina / EDTA e cerca de 200 ml PBS. </li></ol> RESULTADOS REPRESENTANTE Usando este método de isolamento observou-se uma colônia de formação primária no dia 12. Em um estudo anterior foram capazes de recuperar uma média de 4,0 ± 0,8 ECFC-colônias derivadas de cada ml de sangue periférico. ECFCs 4 mostrou uma aparência de pedra de calçada típica. Após a expansão em grande escala, com uma densidade de semeadura de 100 células / cm 2, obtivemos&gt; 1 x 10 8 células em um total de aproximadamente 30 dias a partir de três voluntários do sexo masculino e 1 feminino (idade entre 26 e 50 anos). ECFC cultivadas sob estas condições se mostraram proliferativa, funcional e genomicamente estável. 4 Além disso as células podem ser armazenadas (em 10% DMSO) em nitrogênio líquido para posterior utilização 3,4.

<ol><li>Solovey, A., Lin, Y., Browne, P., Choong, S., Wayner, E., Hebbel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+activated+endothelial+cells+in+sickle+cell+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Circulating activated endothelial cells in sickle cell anemia.</a> N Engl J Med. 337, 1584-1590 (1997).</li>
<li>Yoder, M. C., Mead, L. E., Prater, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+endothelial+progenitor+cells+via+clonal+analysis+and+hematopoietic+stem%2Fprogenitor+cell+principals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals.</a> Blood. 109, 1801-1809 (2007).</li>
<li>Schallmoser, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+large-scale+expansion+of+functional+mesenchymal+stem+cells+from+unmanipulated+bone+marrow+without+animal+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid large-scale expansion of functional mesenchymal stem cells from unmanipulated bone marrow without animal serum.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14, 185-196 (2008).</li>
<li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+large-scale+expanded+endothelial+colony-forming+cells+function+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo.</a> Blood. , (2009).</li>
<li>Ricardo, R., Phelan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+and+Determining+the+Viability+of+Cultured+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Counting and Determining the Viability of Cultured Cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

Este isolamento romance e método de expansão é um processo simples e eficiente que é mais eficiente e menos morosa, evitando qualquer separação de células (sem gradiente de densidade necessário) e menos caro do que as técnicas convencionais. Por meio de contato pHPL aos antígenos bovina e xenoimmunization subseqüentes putativa é excluído. Durante o período de cultivo pequenos coágulos podem se formar, causada pela pHPL. Baseado em nossa experiência esses coágulos não afetam a formação de colônias e proliferação celular ...

<table><tbody><tr><td>Meio Basal Endotelial-2</td><td>Lonza Inc.</td><td></td><td>500ml</td></tr><tr><td>SingleQuots EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td></td><td>EGF, hFGF-B, VEGF, IGF-1, Hidrocortisona, Ácido ascórbico</td></tr><tr><td>Heparina sem conservantes</td><td>Biochrom AG</td><td></td><td>10U/ml por EGM-2</td></tr><tr><td>L-Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>2mM por EGM-2</td></tr><tr><td>Penicilina e Estreptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>100U/mL de Penicilina e&lt;br/&gt;100&amp;#x03BC;g/mL de Estreptomicina por&lt;br/&gt;EGM-2</td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA 1mM </td><td>Invitrogen</td><td></td><td>7ml para frasco T75&lt;br/&gt;70ml para CF-4</td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fábrica de células de quatro camadas (CF-4) </td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Funil estéril</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Frasco de cultura T75cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; (com tampa ventilada)</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos vacutainer de 6 mL (heparina de sódio sem conservantes) </td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>pré-carregados com 108 UI/6ml de&lt;br/&gt;heparina de sódio sem conservantes</td></tr><tr><td>Tubos Falcon de 50ml</td><td>Falcon BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stripetts de 5ml</td><td>Costar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stripetts de 25ml</td><td>Costar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Squeezer</td><td>Costar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtro estéril com porosidade de 0,2</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td>2x 500ml por EGM-2</td></tr></tbody></table>

isolamento e expansão em grande escala de adulto humanos endotelial colony células progenitoras forming

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

Este trabalho apresenta uma estratégia de recuperação da novela para colônia de células progenitoras endoteliais formando (ECFCs) de heparinizado mas de outra maneira não-manipulado sangue periférico humano adulto dentro de uma média de 12 dias. Após a expansão em grande escala&gt; 1x10 8 ECFCs pode ser obtido para mais testes. Vantajosamente usando pHPL o contato de células humanas com antígenos soro bovino pode ser excluída. Por citometria de fluxo e imunohistoquímica das células isoladas podem ser caracterizadas como ECFC e sua funcionalidade vitro para formar estruturas vasculares, como pode ser testado em um ensaio de Matrigel. Além disso essas células podem ser subcutânea em um modelo de mouse para forma funcional, vasos perfundidos in vivo. Após a expansão a longo prazo e proliferação de criopreservação, função e estabilidade genômica parecem ser preservada 3,4. Este isolamento de proteína animal-livre e método de expansão é de fácil aplicação para gerar uma grande quantidade de ECFCs.

Endotelial colônia formando células progenitoras (ECFCs) são uma ferramenta promissora para o estudo da homeostase vascular e reparação.<sup&gt; 1,2</sup&gt; Este artigo introduz um novo método de soro animal-livre para isolamento e expansão de ECFC heparinizado de sangue humano adulto periférica com pool de lisado de plaquetas humanas (pHPL) diminuindo o risco de anti-bovino imunização.

Isolamento e expansão em grande escala de Adulto Humanos endotelial Colony Células Progenitoras Forming

Este artigo apresenta uma nova estratégia de recuperação de células progenitoras formadoras de colônias endoteliais (ECFCs) de adultos a partir de sangue heparinizado, porém não manipulado...

Cultivando simplesmente o sangue total em meio otimizado livre de soro animal. Em um frasco de 75 centímetros quadrados, as E CFCs aderem à superfície do frasco, removendo a maioria das células vermelhas e brancas do sangue. Lave o frasco no primeiro dia e elimine as células remanescentes trocando todo o meio no quinto dia.Continue examinando as colônias a cada dois dias ou, se for mais conveniente, três vezes por semana. E você deverá observar as primeiras colônias por volta do dia 12. Olá, meu nome é Nicole Hoffman do laboratório da Unidade de Pesquisa em Células-tronco da Universidade Médica grots.Hoje vamos mostrar um processo simplificado para o isolamento e expansão de células progenitoras formadoras de colônias endoteliais, ou ECFC, a partir de sangue periférico humano adulto. Em nosso laboratório, utilizamos este processo para estudar a função e a biologia das ECFC in vitro e in vivo. Então, vamos começar.Esta seção começa com a preparação e esterilização por filtração do meio de crescimento endotelial dois, que será utilizado para o cultivo. Os EFCs aquecem previamente 20 mililitros do meio em banho-maria a 37 graus Celsius. Retire cinco mililitros de sangue periférico humano adulto da veia cubital para um tubo a vácuo contendo heparina sódica sem conservantes, de seis mililitros.As amostras de sangue devem ser processadas em até duas horas após a coleta em uma cabine de fluxo laminar. Um frasco de 175 centímetros quadrados com tampa ventilada, uma pipeta de 25 mililitros e duas pipetas de cinco mililitros em uma bancada de fluxo laminar. Use uma pipeta de 25 mililitros para pré-encher o frasco com 15 mililitros de E GM dois suplementado pré-aquecido.Abra o frasco de sangue e use a pipeta de cinco mililitros para transferir diretamente todos os cinco mililitros de sangue para o frasco. Use a pipeta para enxaguar o frasco vazio de sangue com os cinco mililitros restantes de pré-aquecimento E GM dois. Adicione este volume ao frasco.Feche a tampa ventilada do frasco, que agora deve conter 25 mililitros. Coloque o frasco em uma incubadora ajustada a 37 graus, 5% de dióxido de carbono e 95% de umidade por 24 horas. No dia seguinte, aqueça previamente 20 mililitros de e GM dois suplementado e 30 mililitros de PBS em banho-maria a 37 graus e organize duas pipetas de 25 mililitros e três pipetas de 10 mililitros em uma cabine de fluxo laminar.Retire o frasco contendo a amostra do incubador e use uma pipeta de 25 mililitros para remover a mistura de meio sanguíneo que contém células não aderentes. Tenha cuidado para não arranhar a superfície do frasco com a pipeta. Para evitar desprender as células aderentes, adicione suavemente 10 mililitros de PBS pré-aquecido à superfície interna do frasco onde as células estão aderidas e incline o frasco de um lado para o outro.Remova e descarte imediatamente o PBS. Repita isso, lavando duas vezes. Em seguida, trabalhe rapidamente e com cuidado.Para evitar a dessanexão das células, adicione 20 mililitros de meio EGM-2 fresco e pré-aquecido ao frasco e coloque-o novamente no incubador. Tendo o cuidado de não manter o frasco fora do incubador por mais de cinco minutos, utilize um microscópio óptico de baixa ampliação para verificar diariamente, em dias alternados, o crescimento de ECFCs no frasco. A partir do segundo dia até o quinto dia após a semeadura, pré-aqueça 20 mililitros de EGM-2 em um banho-maria a 37 graus Celsius e prepare duas pipetas de 25 mililitros.Trabalhe rapidamente para evitar a secagem. Use estes materiais para substituir o meio por e GM dois suplementado pré-aquecido fresco, o que removerá as células não aderentes. Coloque o frasco de volta no incubador e repita o processo de triagem diariamente.Substitua 30% do meio por egm recém-suplementado. Faça isso duas vezes por semana. Colônias típicas com morfologia de pedras de calçamento devem aparecer por volta do dia 12.Marque o lado externo superior do frasco para indicar a posição de cada colônia. Deixe as colônias crescerem até o dia 28, a menos que células isoladas comecem a se desprender. Após identificadas as colônias primárias, elas podem ser colhidas entre os dias 14 e 28, dependendo do seu tamanho.Pré-aqueça cinco mililitros de uma solução de tripsina-EDTA e 20 mililitros de PBS a 37 graus. Tendo o cuidado de não tocar a superfície do frasco, transfira todo o meio para um tubo cônico. Este será usado posteriormente para inibir a atividade da tripsina e lavar cuidadosamente as células com 10 mililitros de PBS pré-aquecido.Adicione cinco mililitros de tripsina-EDTA e incube a solução por aproximadamente cinco minutos a 37 graus ou até que as células se soltem. Tenha cuidado para não incubar por mais de sete minutos, pois a tripsina pode tornar-se tóxica para as células após a incubação; bata levemente nas laterais do frasco para ajudar no desprendimento celular após a reação. Inative a atividade da protease tripsina adicionando aproximadamente 10 mililitros do meio de cultura usado e conservado.Transfira a suspensão celular para um tubo cônico de 50 mililitros. Lave o frasco uma vez com 10 mililitros de PBS e adicione a solução de lavagem à suspensão celular colhida. Centrifugue a suspensão celular a 300 ×g por sete minutos em uma centrífuga refrigerada para recolher as células e remover a tripsina, descarte o sobrenadante e ressuspenda imediatamente o pellet celular em um mililitro de PBS.Mantenha as células ressuspendidas em gelo. Determine o número de células conforme descrito em outro protocolo do JoVE por Ricardo e Phelan. Em seguida, prossiga para a expansão de ECFC.No caso de serem recuperadas mais de 360.000 CFCs-e, prossiga para a etapa de expansão; no caso de serem recuperadas menos de 260.000 CFCs-e, considere expandir ainda mais as células antes da expansão em larga escala. Para isso, semeie aproximadamente 75.000 CFCs-e em 20 mililitros de meio EGM-2 em um frasco de cultura celular de 75 centímetros quadrados e cultive por mais uma semana ou até atingir a confluência.Suplemente 500 mililitros de E GM dois conforme descrito no protocolo escrito acompanhante e aqueça previamente esta mistura em banho-maria a 37 graus Celsius. Para cada aproximadamente 2.500 centímetros quadrados de espaço de cultura, prepare uma fábrica de células com quatro camadas ou CA quatro. Além disso, reúna duas tampas Tyvek novas e um funil estéril especial e armazene-os na cabine de fluxo laminar para semear as E CFCs com uma densidade celular inicial de 100 células por centímetro quadrado.Primeiro, calcule o número de células para cada CF4 250,2, 800. As células são re-suspensas em 500 mililitros de meio EGM-2 fresco e transferidas para o CF4. Utilizando um funil estéril, use a tampa Tyvek coberta para fechar um dos ventos e incline o CF4 para um dos lados longitudinais, permitindo a distribuição uniforme do meio entre os quatro níveis.Agora a câmara pode ser inclinada para trás e a tampa da tampa Tyvek pode ser aberta. Certifique-se de proteger as ventilações abertas usando duas tampas vermelhas. Essas tampas podem ser adquiridas junto com o CF four no caminho para a incubadora.Coloque o CF4 no incubador e remova as tampas vermelhas para permitir a troca de gases, substituindo 20% do meio por meio pré-aquecido pelo menos uma vez por semana até que o CF4 atinja a confluência. Esse processo depende do doador e provavelmente ocorrerá após 10 a 14 dias. Por fim, as células podem ser colhidas conforme descrito anteriormente, utilizando tripsina-EDTA pré-aquecida e o meio usado para inativar a atividade da protease.Além disso, utilize aproximadamente 200 mililitros de PVS para lavagem por volta do dia 12. As colônias de ECFC começarão a aparecer com uma morfologia típica de calçamento, como é possível observar nesta colônia, ou como algumas células agrupadas, como nesta colônia encontrada no dia 12. À medida que as colônias crescem, mais células formam a morfologia típica de calçamento.Como é possível observar aqui, após 15 dias e após 18 dias por imunoquímica, os CFCs isolados podem ser caracterizados com marcadores típicos da superfície celular endotelial, como CD146, CD144, CD31 positivo e fator de von Willebrand. Acabamos de mostrar como isolar e expandir células progenitoras formadoras de colônias endoteliais a partir do sangue periférico humano adulto durante este procedimento. É importante lembrar que a taxa de sucesso deste protocolo depende do doador e varia de 50 a 70%. Assim sendo, é isso.Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este protocolo descreve o isolamento ea subsequente expansão de células mesenquimais estromais e as células endoteliais que formam colônias sem o uso de animais soro autólogo para gerar pares para fins de transplante experimental.

Isolamento e animais de Expansão de soro livre de cordão umbilical humano Derivado células mesenquimais estromais (MSCs) e endoteliais Células Progenitoras Colony Forming (ECFCs)

Células endoteliais que formam colônias (ECFCs) estão circulando células endoteliais com potencial clonal proliferativa robusto que exibe...

Caracterização fenotípica e funcional das células endoteliais Formadoras de Colônias derivado do sangue do cordão umbilical humano

Este vídeo demonstra uma técnica para isolar células progenitoras neurais induzidas (iNPCs) derivadas de fibroblastos humanos adultos. Ele descreve as etapas envolvidas no isolamento das colônias de iNPC e na cultura delas em poços de placas de vários poços revestidos com laminina na presença de meios de cultura adequados que facilitam a proliferação e expansão contínuas da população de iNPC.

Isolando colônias de células progenitoras neurais induzidas derivadas de fibroblastos humanos adultos

Relatamos um método confiável para isolar e cultivar células endoteliais primárias específicas do tumor a partir de modelos de camundongos geneticamente modificados.

Isolamento e Cultura de Expansão de células endoteliais específicos de tumores

Este protocolo permite a geração e caracterização confiáveis de células endoteliais de crescimento sanguíneo (BOECs) a partir de um pequeno volume de sangue periférico adulto. As BOECs podem ser usadas como substitutas para células endoteliais de pacientes com distúrbios vasculares e como substrato para a geração de células-tronco pluripotentes induzidas.

Geração e cultura de sangue Conseqüência células endoteliais do sangue periférico humano

As células progenitoras endoteliais (CPE) são crucialmente envolvidas na neovascularização de tecidos isquémicos. Este método descreve o isolamento de EPCs humanos a partir de sangue periférico, bem como a identificação do seu potencial migratório contra amostras de soro de pacientes de cirurgia cardíaca.

Isolamento de células endoteliais progenitoras de voluntários saudáveis ​​e seu potencial migratório influenciada por amostras de soro após cirurgia cardíaca

O objetivo do presente protocolo é isolar as células progenitoras endoteliais do sangue do cordão umbilical. Algumas das aplicações incluem o uso dessas células como um biomarcador para identificar pacientes com risco cardiovascular, tratamento de doenças isquêmicas, e criando engenharia de tecido vascular e coração válvula de construções.

Isolamento de células progenitoras endoteliais de sangue humano do Cordão Umbilical

Células endoteliais de tumor são importantes determinantes do microambiente do tumor e o curso da doença. Aqui, um protocolo para o isolamento de células endoteliais puras e viáveis de carcinoma colorectal humana e cólon normal para ser usado em pesquisa de teste e patogênese da droga é descrito.

Isolamento de células endoteliais humanas do cólon Normal e Carcinoma colorrectal - um protocolo melhorado

Aqui, nós apresentamos um protocolo para formar precisamente o endotélio hemogenic das pilhas de haste pluripotentes humanas em uma condição do alimentador-e do Xeno-livre. Este método terá amplas aplicações na modelagem de doenças e triagem para compostos terapêuticos.

Diferenciação do endotélio hemogênico de células-tronco pluripotentes humanas em um alimentador-e condição definida livre de Xeno

O sistema esferóide tridimensional do ensaio da angiogênese da cocultura é projetado imitar a angiogênese fisiológica. Os esferoides da co-cultura são dados forma por dois precursores vasculares humanos da pilha, por ecfcs e por MSCS, e incorporados no gel do colagénio. O novo sistema é eficaz para avaliar moduladores angiogênicos e fornece informações mais relevantes para o estudo in vivo.

Sistema tridimensional do ensaio da angiogênese usando spheroids da co-cultura dados forma pela colônia endothelial que dá forma a pilhas e às pilhas de haste mesenchymal

Apresenta-se aqui um protocolo simples para a diferenciação direcionada de células endoteliais hemogênicas de células-tronco pluripotentes humanas em aproximadamente 1 semana.

Diferenciação Dirigida de Células Endoteliais Hemogênicas de Células-Tronco Pluripotentes Humanas

Aprenda a isolar e expandir células progenitoras endoteliais (ECFCs) de sangue periférico humano usando lisado plaquetário humano. Este método sem soro animal reduz riscos de imunização e oferece protocolo confiável para pesquisa vascular.

Isolamento e expansão em grande escala de Adulto Humanos endotelial Colony Células Progenitoras Forming

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