Montagem em ágar: um método básico de montagem de embriões vivos de peixe-zebra para imagens de longo prazo

- Comece adicionando agarose de ponto de fusão médio a baixo E3 e aquecendo até que a agarose se dissolva completamente. Resfrie a agarose a 37 graus Celsius e adicione a solução de tricaína. Em seguida, anestesiar os embriões adicionando tricaína a uma placa de Petri contendo embriões em meio E3. Gire a placa de Petri para coletar os embriões no meio.

Usando uma pipeta de transferência, retire um embrião com uma quantidade mínima de meio. Segure a pipeta na posição vertical e faça o embrião saltar para posicioná-lo na ponta da pipeta. Agora coloque o embrião na solução de agarose sem adicionar nenhum excesso de meio, o que diluiria a agarose e evitaria a gelificação. Misture suavemente o embrião dentro da agarose e transfira a solução para o poço de uma placa de imagem usando a pipeta.

Coloque a placa sob um microscópio e use uma ponta de pipeta para posicionar o embrião na orientação desejada. Assim que a agarose solidificar, despeje o meio E3 contendo tricaína em cima dele para manter o ágar hidratado e obter uma imagem do embrião. Em um protocolo de exemplo, montaremos embriões de peixe-zebra parabióticos para imagem e análise.

Para adquirir imagens dos embriões fundidos, prepa