Isolamento de células-tronco de melanoma: um método para obter células de melanoma CD133 positivas e negativas usando classificação de células ativadas por magnetismo

- O melanoma abriga uma pequena subpopulação de células-tronco cancerígenas que possuem capacidades de auto-renovação e iniciação tumoral. CD133 ou Prominina-1, uma glicoproteína transmembrana pentaspan, é um dos principais marcadores expressos por células-tronco cancerígenas de melanoma metastático. Para isolar células CD133-positivas, comece com uma suspensão de células primárias de melanoma em um tampão apropriado.

Incubar com um reagente bloqueador contendo proteínas que bloqueiam locais de ligação não específicos na superfície celular. Trate as células com anticorpos primários CD133 biotinilados. Esses anticorpos se ligam a antígenos CD133 expressos em células CD133 positivas. Agora, adicione microesferas magnéticas anti-biotina à suspensão. Incube para que as microesferas se liguem às células marcadas com biotina.

Por fim, passe a suspensão incubada por uma coluna colocada em um campo magnético. Com influência magnética, todas as células CD133-positivas marcadas com as microesferas aderem à coluna, enquanto as células não marcadas passam. Colete essas células CD133-negativas não marcadas. Remova a coluna do campo magnético. Lave o conteúdo usando um tampão adequado para eluir