Visualização da expressão de proteínas baseada em CUBIC: um procedimento para visualizar a expressão de proteínas em biópsias de pele de camundongos de espessura total

- A pele é um órgão complexo que consiste em populações de células variadas dispostas em várias camadas. CUBIC, uma técnica de imagem tridimensional baseada em limpeza de tecidos, ajuda a visualizar padrões de expressão de proteínas dentro dessas células da pele usando biópsias de pele inteira. Comece pegando um camundongo sacrificado e removendo os pelos da região dorsal do pescoço. Extirpe um pedaço de pele e corte-o em pedaços pequenos.

Mergulhe as peças em uma solução de limpeza CUBIC1 e incuba. As células da pele não são transparentes, devido à presença de cromóforos e lipídios que causam dispersão de luz. Os produtos químicos na solução CUBIC removem essas moléculas, reduzindo assim a dispersão da luz e tornando o tecido transparente.

Em seguida, trate o tecido com os anticorpos primários desejados que se ligam especificamente às proteínas intracelulares alvo expressas nas células da pele. Além disso, trate com anticorpos secundários marcados com fluorescência que se ligam aos complexos de anticorpos primários de proteína. Contra-core o tecido com um corante de ligação ao DNA que mancha o núcleo.

Finalmente, mergulhe a amostra em uma solução CUBIC2. A solução reduz ainda mais