Name: Administração oral de rotenona usando um Gavage e Análise de Imagem de Alpha-sinucleína Inclusões no sistema nervoso entérico (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Aprenda a administrar rotenona por gavagem oral em camundongos para analisar o acúmulo de alfa-sinucleína no sistema nervoso entérico. Este método permite estudar os efeitos neurotóxicos de pesticidas na doença de Parkinson.

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O Pedro Barrie de la Maza Fundação apoiaram este trabalho.

1) Administração Intragástrico de rotenona <ol><li> Pesar o animal. </li><li> Calcular o volume total de rotenona / veículo solução necessária. Neste caso 0,01 ml por grama do peso do animal. </li><li> Cobrar uma seringa de 1 mL com o volume calculado anteriormente de solução de rotenona (0,625 rotenona mg / mL, carboximetilcelulose 4% e 1,25% clorofórmio) ou solução veículo (carboximetilcelulose 4% e 1,25% clorofórmio). Neste caso, corresponde a uma dose rotenona 5 mg / kg. </li><li> Pegue o mouse e, segurando o rabo do rato com uma mão, esticar a pele do pescoço, puxando-a com os dois primeiros dedos da outra mão. </li><li> Uma vez que a cabeça é fixa entre os dois dedos, magra contra a palma da mão e transformá-lo de cabeça para baixo. Fixar a cauda usando o quarto e quinto dedos. </li><li> Mantendo a cabeça para trás, pressione o palato a se abrirem a boca do rato. Suavemente introduzir a sonda na boca. É importante usar uma agulha gavagem e não uma agulha regular. Lentamente, mova o gavage na direção do estômago longe o suficiente. Isso irá evitar o material ficar nos pulmões. </li><li> Administrar a solução rotenona ou veículo pressionando suavemente o êmbolo. Quando concluído, lentamente extrair o gavage. </li><li> Coloque o animal em volta outra gaiola até que todos os animais de uma gaiola é feito. </li></ol> 2) Procedimentos imunocoloração <ol><li> Após o tratamento, os ratos são anestesiados com cetamina 100 mg / kg ip und Xylasina 10 mg / kg e intracardially perfundidos com paraformaldeído 4% em PBS. </li><li> A coragem são, então, extraídos por dissecção, e colocados em sacarose 15% durante a noite. No dia seguinte, o tecido é transferido para 30% de sacarose e incubadas novamente durante a noite a 4 ° C. </li><li> O tecido é então colocado em Tissue-tek e armazenados em um freezer -80 ° C até o uso. </li><li> Utilizando um criostato, 20 micron intestino seções transversais são transferidos para slides Superfrost. </li><li> Bloqueio e imunocoloração procedimentos usando anticorpos anti-tubulina βIII e anti-alfa-sinucleína são então realizados como descrito anteriormente 9. </li></ol> 3) Análise de Imagem alfa-sinucleína Inclusão Recomenda-se que uma pessoa externa inconscientes de origem images 'executa a análise. Portanto, os dados deve ser codificada. Análise de imagens foi realizada utilizando software FIJI. <ol><li> Abra o arquivo de imagem confocal. Então, dividir os canais de modo que é possível trabalhar em cada canal independentemente. </li><li> Feche os canais que não vai ser usado e selecione Análise&gt; Definir Escala e definir o tamanho do pixel a 1. Definir a distância conhecida a 0,13 (isso vai depender do objetivo e da resolução utilizada) e clique em global. O tamanho da imagem será mostrada em microns. </li><li> Selecione alfa-sinucleína canal e selecione gânglio, certifique-se que a seleção inclui o gânglio em todas as fatias. </li><li> Image Press&gt; Duplicar para duplicar a imagem. Com o gânglio selecionado, apenas uma imagem do tamanho do gânglio será duplicada. </li><li> Prima Editar&gt; Limpar Fora. A parte da imagem fora da região selecionada se tornará preto. </li><li> Duplique a imagem novamente para determinar em etapas posteriores quão bem o procedimento foi. Imagens que tenham um sinal de alta relação ao ruído de fundo não deve ser usado para análise de imagem. </li><li> Selecione Image&gt; Adjust&gt; Limiar e selecione MaxEntropy. Em seguida, passar as fatias na imagem cortada e original para garantir que o processo correu bem. O limite entrópico seleciona um nível de intensidade de sinal baseado no histograma da imagem e somente aqueles pixels com intensidades superiores a este limite será exibido em uma imagem branca sobre preto. </li><li> Selecione Processar, em seguida, clique em Smooth. Esta etapa transforma as bordas pixeled das imagens em bordas lisas. </li><li> Selecione Processar, em seguida, clique em binário, e escolha a opção Make Binary. A imagem será exibida como um negro sobre a imagem branca. </li><li> Duplicate imagem para realizar o próximo passo na imagem duplicada. </li><li> Clique em Analisar&gt; Analisar partículas. Em seguida, selecione Show: Esboços e clique em Resumir. O resto das configurações deve ser em folhas padrão. Esta função reconhece o número total de pixels com um sinal e aqueles que são agrupados. A superfície total de pixels com sinal mais o número de grupos de pixels eo tamanho médio são relatados. </li><li> Comparar e selecionar a maior fatia que se ajusta bem. A fatia será marcada. </li><li> Cópia da tabela de dados com a superfície alfa-sinucleína total, o número de inclusões e do tamanho médio de partícula. Colar os dados em uma planilha excel ou anotado em outro lugar. </li><li> Retornar para FIJI e encontrar a fatia selecionada anteriormente no canal β-tubulina, e selecioná-lo. </li><li> Selecione área de gânglio e clique em Analisar em seguida, selecione Medida. Outra tabela é exibida com osuperfície total do gânglio. </li><li> Extrair os dados da tabela para a folha de excel perto da medição alfa-sinucleína ou copiá-lo para baixo em outro lugar. </li><li> Usando excel, divide os diferentes parâmetros obtidos na medição alfa-sinucleína pela superfície gânglio para obter total de alfa-sinucleína número superfície e inclusão normalizado pelo tamanho do gânglio. </li></ol> 4) Resultados Representante Quando o protocolo de administração gavage é realizado corretamente os inconvenientes para o animal são mínimas. Tratamento com esta concentração de rotenona permite um efeito local da rotenona na ENS, sem níveis de rotenona em sangue e sem inibição dos músculos e cérebro complexo mitocondrial que, mesmo após 1,5 meses de tratamento (ver Figura 1). Se a análise de imagem é realizado corretamente uma análise rigorosa da alfa-sinucleína padrão deve ser possível. Dá dados confiáveis ​​sobre a quantidade total de alfa-sinucleína (superfície total), alfa-sinucleína padrão no celular (número de inclusões) ea presença de alfa-sinucleína inclusões (tamanho inclusão) (Figura 2). <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Disfunção motora em camundongos tratados com rotenona sem detecção de rotenona no sangue ou no CNS. Um padrão, (50 ng / mL) e cromatograma a partir de amostras do cérebro de 20, 10 e 5 mg / kg camundongos tratados. B e C, quantificação dos níveis de rotenona no sangue (B) e sistema nervoso central (C). B, os níveis sanguíneos 1 , 2 e 3 horas após o tratamento. Camundongos foram divididos em três grupos (n = 3) e tratados com 2,5, 5, 10 e 20 mg / kg rotenona (n = 3), 300 mL de sangue foi extraído horas 1, 2 e 3 após a administração de rotenona e agrupados para HPLC análise. C, os ratos foram tratados durante uma semana uma vez por dia com 5 (n = 3), 10 (n = 3) e 20 (n = 1) mg / kg rotenona cérebro e tronco cerebral foram extraídos 1 e 2 horas depois última administração e preparados para análise por HPLC. D, Complexo I mitocondrial atividade muscular e cerebral amostras de 1,5 meses camundongos tratados. <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Rotenona administrado localmente induz fosforilação alfa-sinucleína, acumulação e agregação com gliose nos gânglios ENS. (Barras de escala de 20 mm). A, B, C, anti-tubulina βIII, alfa-sinucleína ea coloração DAPI no duodeno (B) e íleo ( A, C) seções. Seta na B, 1,5 meses de tratamento induziu um padrão de aumento da alfa-sinucleína punctate dentro gânglios do sistema nervoso entérico, quando comparado a 3 meses controles (A). Seta no C, 3 meses de tratamento formação induzida de maior alfa-sinucleína inclusões (ø&gt; 6 mm). D, imunofluorescência usando anti-alfa-sinucleína, Thioflavine S e DAPI. Seta no D, apenas três meses camundongos tratados mostraram maior agregação desses alfa-sinucleína acumulações. E, E ', E'', imagem passos análise e quantificação. E, exemplo de imagem usada na quantificação mostrando um gânglio ENS imunocoradas contra alfa-sinucleína mostrando inclusões diferentes. E ', exemplo de imagem obtida após o protocolo de análise de imagem. E'', sobreposição entre algumas das inclusões original (verde) e da representação obtida após a realização do protocolo (linhas amarelas). FG, a quantificação do experimento mostrado na AC foi feito usando a segmentação automática e métodos baseados em entropia thresholding. Um único asterisco, F P &lt;0,05, e dê um duplo asterisco, P &lt;0,01., Cada coluna representa total de alfa-sinucleína superfície superfície / ganglionares. G, cada coluna representa o número total de alfa-sinucleína inclusões / superfície ganglionares. Todos os gráficos mostram média ± EPM

<ol><li>Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+alpha-synuclein+immunoreactive+inclusions+in+Meissner%27s+and+Auerbach%27s+plexuses+in+cases+staged+for+Parkinson%27s+disease-related+brain+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology.</a> Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).</li>
<li>Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+an+immunohistochemical+study+of+Lewy+body-containing+neurons+in+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system.</a> Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).</li>
<li>Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restricted+occurrence+of+Lewy+bodies+in+the+dorsal+vagal+nucleus+in+a+patient+with+late-onset+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism.</a> J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).</li>
<li>Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+lesions+in+dorsal+horn+layer+I%2C+involvement+of+parasympathetic+and+sympathetic+pre-+and+postganglionic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons.</a> Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).</li>
<li>Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+in+the+development+of+Parkinson%27s+disease-related+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Stages in the development of Parkinson's disease-related pathology.</a> Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).</li>
<li>Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+Parkinson%27s+disease+with+exposure+to+pesticides%2C+farming%2C+well+water%2C+and+rural+living%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The risk of Parkinson's disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living.</a> Neurology. 50, 1346-1350 (1998).</li>
<li>Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+and+exposure+to+agricultural+work+and+pesticide+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals.</a> Neurology. 42, 1328-1335 (1992).</li>
<li>Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+antecedents+of+young-onset+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Environmental antecedents of young-onset Parkinson's disease.</a> Neurology. 43, 1150-1158 (1993).</li>
<li>Pan-Montojo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+Parkinson%27s+disease+pathology+is+reproduced+by+intragastric+administration+of+rotenone+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Progression of Parkinson's disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice.</a> PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).</li>
<li>Sherer, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+toxicity+in+rotenone+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease.</a> J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).</li>
<li>Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin-induced+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Toxin-induced models of Parkinson's disease.</a> NeuroRx. 2, 484-494 (2005).</li>
<li>Inden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurodegeneration+of+mouse+nigrostriatal+dopaminergic+system+induced+by+repeated+oral+administration+of+rotenone+is+prevented+by+4-phenylbutyrate%2C+a+chemical+chaperone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone.</a> J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).</li>
</ol>

Francisco Pan-Montojo tem um pedido de patente pendente para este modelo animal (número de aplicativos PCT / PE 2009/005688).

Administração intragástrica foi previamente realizado 12. No entanto, segundo manuscrito Inden, a rotenona foi administrada de sal dissolvido em 0,5% de carboximetilcelulose de sódio (CMSS) sozinho. Rotenona é uma substância de alto liphophylic. Portanto, rotenona não pode ser dissolvido em CMSS 0,5% sozinho e se irá precipitar feito. O uso de clorofórmio cria uma suspensão rotenona distribuída uniformemente evitando a precipitação. Além disso, devido às concentrações mais elevadas do pesticida no CMSS, o vol...

<table><tbody><tr><td>Rotenona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td>Alemanha</td></tr><tr><td>Clorofórmio</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3313.1</td><td>Alemanha</td></tr><tr><td>Carboximetilcelulose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5678</td><td>Alemanha</td></tr><tr><td>Gavagem 1,2 mm x 60 mm</td><td>Unimed</td><td></td><td>Suíça</td></tr><tr><td>LSM 510</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FIJI</td><td>http://pacific.mpi-cbg.de</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

administração oral de rotenona usando um gavage e análise de imagem de alpha-sinucleína inclusões no sistema nervoso entérico

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

Na doença de Parkinson (DP), a patologia associada segue um padrão característico, envolvendo, nomeadamente, o sistema nervoso entérico 1,2 (ENS), o bulbo olfativo (OB), o núcleo motor dorsal do vago (DMV) 3, o intermediolaterais núcleo da 4 medula espinhal e substância negra, fornecendo a base para a realização neuropatológicas da doença 4,5. A ENS e os OB são as estruturas mais expostas nervoso e os primeiros a ser afetados. Curiosamente, PD tem sido relacionada à exposição a pesticidas 6-8. Aqui nós mostramos em detalhe dois métodos usados ​​em nosso estudo anterior 9. Para analisar os efeitos da rotenona agindo localmente no ENS, nós administrados rotenona usando uma sonda de um ano de idade C57/BL6 camundongos. Rotenona é um pesticida amplamente utilizado que inibe fortemente Complexo mitocondrial I 10. É altamente lipofílica e mal absorvido no trato gastrointestinal 11. Nossos resultados mostraram que a administração de 5 mg / kg de rotenona não inibiu o complexo I mitocondrial atividade no músculo ou no cérebro. Assim, o que sugere que isso usar nosso rotenona método de administração não atravessar o sistema hepatoportal e estava atuando apenas na ENS. Aqui nós mostramos um método para administrar pesticidas usando uma sonda e do protocolo de análise de imagem utilizada para analisar os efeitos do pesticida em alfa-sinucleína acumulação na ENS. A primeira parte mostra um método que permite a administração intragástrica de pesticidas (rotenona) a uma concentração desejada preciso. O segundo método apresenta uma semi-automática de protocolo de análise de imagem para analisar acumulação de alfa-sinucleína na ENS usando um software de análise de imagem.

A doença de Parkinson tem sido relacionada à exposição a pesticidas. Aqui nós mostramos um método para entregar pesticidas usando uma sonda gástrica, na concentração desejada e um método para analisar seu efeito em alfa-sinucleína acumulação no sistema nervoso entérico.

Administração oral de rotenona usando um Gavage e Análise de Imagem de Alpha-sinucleína Inclusões no sistema nervoso entérico

Em pacientes com a doença de Parkinson (DP), a patologia associada segue um padrão característico que envolve, entre outros, o sistema nervoso entérico (SNE) 1,2, ...

Os sintomas da doença de Parkinson, incluindo disfunções motoras e da fala, resultam da atividade reduzida de células secretoras de dopamina no cérebro. O sistema nervoso entérico e o bulbo olfatório são as estruturas nervosas mais expostas e as primeiras a serem afetadas. A doença de Parkinson tem sido associada à exposição a pesticidas.Para analisar os efeitos de pesticidas no sistema nervoso entérico, o pesticida roone é administrado a camundongos por gavagem oral. Em seguida, os camundongos são perfundidos por via intracardíaca com paraform 4%, aldeído cérebro e sistema nervoso entérico. O tecido é extraído, preparado e submetido à imuno-histoquímica para proteínas associadas à DP.Imagens de beta três tubulina e alfa sinucleína adquiridas por microscopia confocal demonstram o acúmulo de alfa sinucleína dentro dos neurônios do sistema nervoso entérico em animais expostos a pesticidas. A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como a administração sistêmica de rotenona, é que, ao utilizar esta técnica, garante-se que o efeito da rotenona esteja confinado ao sistema nervoso entérico. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na doença de

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra a injeção de fibrilas de alfa-sinucleína em um camundongo para induzir neuroinflamação. As fibrilas são injetadas intraperitonealmente em um camundongo transgênico que expressa proteínas alfa-sinucleína mutadas. Ao atingir o sistema nervoso central, as fibrilas entram nos neurônios e induzem a agregação das proteínas mutadas. Os agregados se espalham para neurônios, micróglias e astrócitos vizinhos. O reconhecimento dos agregados desencadeia a micróglia para induzir...

Indução de neuroinflamação em camundongos por injeção de fibrilas de alfa-sinucleína

Um ELISA que oferece uma nova abordagem quantitativa é descrito. Ele detecta especificamente a α-sinucleína associada à doença (αSD) em um modelo de camundongo transgênico (M83) de sinucleinopatia usando vários anticorpos contra a forma fosforilada de αS na Ser129 ou a parte C-terminal da proteína.

Detecção de doença associada α-sinucleína por ELISA reforçada no cérebro de ratinhos transgénicos que sobre-expressam A53T Humano Mutante α-sinucleína

Este manuscrito descreve como a entrega de genes locais mediada por vetores virais fornece uma maneira atraente de expressar transgenes no sistema nervoso central.  O protocolo descreve todas as etapas cruciais para realizar uma injeção de vetor viral na substância negra do rato para desenvolver um modelo animal baseado em vetor viral para a doença de Parkinson.

Desenvolvimento de um modelo de rato baseada alfa-sinucleína para a doença de Parkinson por meio de injecção estereotáxica de um vector viral recombinante adeno-associado

Injecção periférica de fibrilas-sinucleína alfa no peritoneu ou língua de Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos, que expressam alfa-sinucleína humana com a mutação A53T familiar e a luciferase do pirilampo, pode induzir a neuropatologia, incluindo neuroinflamao , em seu sistema nervoso central.

Imagem de bioluminescência de Neuroinflammation em Ratinhos Transgénicos Após inoculação periférica de alfa-sinucleína fibrilas

Aqui apresentamos um método automatizado para determinação semi-quantitativa do número de neurônio dopaminérgico na substantia nigra pars compacta.

Determinação semi-quantitativa da densidade do neurônio dopaminérgico na Substantia Nigra dos Modelos de Roedores usando análise automatizada de imagem

Neste artigo, mostramos como usar um sistema de pontuação de sete pontos para quantificar consistentemente mudanças na morfologia de dendrite do neurônio dopaminérgico em C. elegans. Este sistema destina-se a análises de ensaios de neurodegeneração dopaminérgico utilizando modelos genéticos, químicos e baseados em idade de distúrbios neurodegenerativos.

Quantificando níveis de alteração morfológica e degeneração do neurônio dopaminérgico em Caenorhabditis elegans

Este trabalho analisa a dose vetorial e o tempo de exposição necessários para induzir neuroinflamação, neurodegeneração e comprometimento motor neste modelo pré-clínico da doença de Parkinson. Esses vetores que codificam a α-sinucleína humana são entregues na substantia nigra para recapitular a patologia da sinucleína associada à doença de Parkinson.

Analisando o modelo de rato da doença de Parkinson induzida por vetores virais associados à Adeno codificando α-sinucleína humana

Um método conveniente de perfusão alimentado pela gravidade para análise histológica do sistema nervoso central do rato é apresentado. A detecção imunofluorescente de α-sinucleína fosfoilada é demonstrada em um modelo de camundongo da doença de Parkinson. Este trabalho também descreve de forma abrangente as etapas de perfusão transcárdia, dissecção, congelamento/incorporação de tecidos e etapas de secção congelada.

Um método de perfusão transcárvia alimentado pela gravidade para análise histológica do sistema nervoso central do rato

O presente protocolo descreve um método para administração intranasal de agregados de α-sinucleína. Este método fornece informações sobre a propagação da α-sinucleína da mucosa olfatória para o bulbo olfatório na doença de Parkinson.

Técnica para administração intranasal de agregados de α-sinucleína

Este artigo descreve em pormenor um protocolo para electroporate no útero do córtex cerebral eo hipocampo em E14.5 em ratinhos. Mostramos também que este é um método valioso para estudar dendritos e espinhas nessas duas regiões cerebrais.

Visualização e manipulação genética de dendritos e espinhas no córtex cerebral e hipocampo do rato usando<em&gt; In utero</em&gt; Eletroporação

Aprenda a administrar rotenona por gavagem oral em camundongos para analisar o acúmulo de alfa-sinucleína no sistema nervoso entérico. Este método permite estudar os efeitos neurotóxicos de pesticidas na doença de Parkinson.

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