JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 2:10 min • April 30th, 2023
A amostragem de célula única permite isolar uma única célula viva de uma suspensão de células cancerígenas para análise a jusante.
Comece o isolamento com uma suspensão de células cancerígenas. Transfira o volume desejado desta suspensão para uma lâmina de vidro. Deixe a lâmina intacta por um tempo para reduzir o movimento das partículas e permitir que as células se assentem.
Agora, transfira a lâmina para um microscópio equipado com um micromanipulador conectado a uma ponta microcapilar. Este instrumento de alta precisão facilita a interação física com as células da amostra em um nível microscópico.
Direcione a ponta microcapilar para perto de uma única célula-alvo. Ao aplicar a sucção, colete a célula-alvo no microcapilar. Agora, transfira o microcapilar diretamente para um tubo contendo o tampão de coleta desejado.
Ejete o conteúdo microcapilar para liberar a célula única capturada no tampão. Armazenar a célula isolada viva no gelo até uma análise mais aprofundada.
Para micromanipulação, transfira todos os 100 microlitros de suspensão celular para uma lâmina de vidro. Em seguida, coloque a lâmina de vidro em um microscópio equipado com um micromanipulador e deixe as células assentarem por 5 minutos. Em seguida, em tubos de PCR de 0,2 mililitro, pipete 2 microlitros de mistura mestre de lise celular e transfira no gelo. Use o micromanipulador para coletar uma única célula em 1 microlitro de solução salina tamponada com fosfato 1X.
Em seguida, transfira a célula diretamente para 2 microlitros de mistura master de lise celular. Use uma microcentrífuga de mesa para girar rapidamente as amostras a 2000 x g por 3 segundos para coletar o líquido no fundo do tubo.
Este artigo demonstra uma técnica precisa para isolar células individuais a partir de uma suspensão celular heterogênea, permitindo análises downstream em nível de célula única. O protocolo utiliza um micromanipulador e um sistema de microcapilares para selecionar e transferir fisicamente células vivas individuais para caracterização genômica ou molecular adicional.
A micromanipulação de célula única permite o isolamento preciso de células cancerígenas individuais, apoiando análises moleculares de alta resolução em etapas subsequentes. Essa capacidade é fundamental para desvendar a heterogeneidade celular e aumentar a confiança preditiva em pesquisas de descoberta precoce e pesquisa translacional. A integração desse isolamento preciso em fluxos de trabalho de P&D aprimora a validação de alvos e as decisões de portfólio ajustadas ao risco.
Essa técnica de micro-manipulação situa-se na interface entre descoberta inicial e pesquisa pré-clínica, permitindo a análise de células individuais a partir de suspensões heterogêneas de células cancerígenas.
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Última atualização: 29 agosto 2026