Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:10 min. • April 30th, 2023
A amostragem de célula única permite isolar uma única célula viva de uma suspensão de células cancerígenas para análise a jusante.
Comece o isolamento com uma suspensão de células cancerígenas. Transfira o volume desejado desta suspensão para uma lâmina de vidro. Deixe a lâmina intacta por um tempo para reduzir o movimento das partículas e permitir que as células se assentem.
Agora, transfira a lâmina para um microscópio equipado com um micromanipulador conectado a uma ponta microcapilar. Este instrumento de alta precisão facilita a interação física com as células da amostra em um nível microscópico.
Direcione a ponta microcapilar para perto de uma única célula-alvo. Ao aplicar a sucção, colete a célula-alvo no microcapilar. Agora, transfira o microcapilar diretamente para um tubo contendo o tampão de coleta desejado.
Ejete o conteúdo microcapilar para liberar a célula única capturada no tampão. Armazenar a célula isolada viva no gelo até uma análise mais aprofundada.
Para micromanipulação, transfira todos os 100 microlitros de suspensão celular para uma lâmina de vidro. Em seguida, coloque a lâmina de vidro em um microscópio equipado com um micromanipulador e deixe as células assentarem por 5 minutos. Em seguida, em tubos de PCR de 0,2 mililitro, pipete 2 microlitros de mistura mestre de lise celular e transfira no gelo. Use o micromanipulador para coletar uma única célula em 1 microlitro de solução salina tamponada com fosfato 1X.
Em seguida, transfira a célula diretamente para 2 microlitros de mistura master de lise celular. Use uma microcentrífuga de mesa para girar rapidamente as amostras a 2000 x g por 3 segundos para coletar o líquido no fundo do tubo.