O que é amostragem de célula única?

A amostragem de célula única é uma técnica usada para isolar células individuais de uma população maior para análise detalhada.

Por que é importante isolar células únicas?

Isolar células únicas permite que os pesquisadores estudem a heterogeneidade e características específicas de células individuais dentro de uma população.

Que equipamento é necessário para esta técnica?

Um microscópio equipado com um micromanipulador e uma ponta de microcapilar são essenciais para isolar células únicas.

Como as células isoladas são armazenadas?

Células isoladas são tipicamente armazenadas no gelo em um buffer de coleta até análise adicional.

Que tipos de análises podem ser realizadas em células isoladas?

Células isoladas podem ser usadas para análises genômicas, proteômicas e outras análises moleculares para entender suas propriedades e comportamentos.

Amostragem de células únicas usando micromanipulação: uma técnica para isolar células individuais da suspensão de células cancerígenas

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:10 min • April 30th, 2023

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A amostragem de célula única permite isolar uma única célula viva de uma suspensão de células cancerígenas para análise a jusante.

Comece o isolamento com uma suspensão de células cancerígenas. Transfira o volume desejado desta suspensão para uma lâmina de vidro. Deixe a lâmina intacta por um tempo para reduzir o movimento das partículas e permitir que as células se assentem.

Agora, transfira a lâmina para um microscópio equipado com um micromanipulador conectado a uma ponta microcapilar. Este instrumento de alta precisão facilita a interação física com as células da amostra em um nível microscópico.

Direcione a ponta microcapilar para perto de uma única célula-alvo. Ao aplicar a sucção, colete a célula-alvo no microcapilar. Agora, transfira o microcapilar diretamente para um tubo contendo o tampão de coleta desejado.

Ejete o conteúdo microcapilar para liberar a célula única capturada no tampão. Armazenar a célula isolada viva no gelo até uma análise mais aprofundada.

Para micromanipulação, transfira todos os 100 microlitros de suspensão celular para uma lâmina de vidro. Em seguida, coloque a lâmina de vidro em um microscópio equipado com um micromanipulador e deixe as células assentarem por 5 minutos. Em seguida, em tubos de PCR de 0,2 mililitro, pipete 2 microlitros de mistura mestre de lise celular e transfira no gelo. Use o micromanipulador para coletar uma única célula em 1 microlitro de solução salina tamponada com fosfato 1X.

Em seguida, transfira a célula diretamente para 2 microlitros de mistura master de lise celular. Use uma microcentrífuga de mesa para girar rapidamente as amostras a 2000 x g por 3 segundos para coletar o líquido no fundo do tubo.