Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:45 min. • April 30th, 2023
A autofagia é um processo intracelular que facilita a degradação de componentes citoplasmáticos e organelas indesejados dentro de compartimentos digestivos especializados chamados lisossomos. Para avaliar a autofagia, comece com uma cultura aderente de células de câncer de próstata expressando proteínas marcadoras autofágicas chamadas LC3 acopladas a proteínas fluorescentes verdes.
Inerentemente, as células do câncer de próstata não possuem a enzima argininosuccinato sintase necessária para a síntese de aminoácidos arginina. Essas células são, portanto, dependentes da suplementação externa de arginina por meio de meios para sobrevivência e proliferação.
Em seguida, trate as células com arginina deiminase ou ADI. A ADI hidrolisa a arginina livre no meio, levando à depleção de arginina. Em consequência, as células sofrem estresse metabólico, iniciando uma resposta autofágica internamente. Simultaneamente, trate as células com um corante fluorescente vermelho que rotula os lisossomos dentro das células.
Durante a autofagia, estruturas membranosas em forma de taça chamadas fagóforos se reúnem em torno dos componentes citoplasmáticos danificados. Eventualmente, eles se expandem e selam
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