Enriquecimento de fosfopeptídeos à base de dióxido de titânio: um método para o isolamento seletivo de fosfopeptídeos da biblioteca de peptídeos

Os fosfopeptídeos são cadeias curtas de aminoácidos contendo resíduos de serina, treonina ou tirosina fosforilados. Para isolar fosfopeptídeos de uma mistura de peptídeos, comece colocando grânulos de dióxido de titânio em um tubo. Equilibre para condicionar os grânulos usando um tampão de ligação acidificado adequado contendo um agente de têmpera. Adicione a concentração desejada de mistura de peptídeos à pasta do grânulo.

Incube a mistura com agitação contínua para evitar que as contas se assentem. A condição ácida promove o grupo fosfato dos fosfopeptídeos a formar ligações coordenadas com grânulos de titânio. O agente de têmpera no tampão reduz qualquer ligação inespecífica de peptídeos não fosforilados aos grânulos, deixando-os na suspensão.

Centrifugue para peletizar as esferas ligadas a fosfopeptídeos, enquanto os peptídeos não fosforilados permanecem no sobrenadante. Descarte o sobrenadante. Transfira os grânulos ligados a fosfopeptídeos para uma coluna de filtro de rotação pré-montada. Centrifugue para remover o tampão de ligação e prender os grânulos conjugados com fosfopeptídeos.

Transfira o filtro para um tubo limpo e adicione uma solução contendo amônia. A amônia torna