Patologia de expansão: um método para imagens ópticas de alta resolução de amostras de tecido clínico

A patologia de expansão, ou ExPath, é uma técnica de preparação de amostras para espécimes biológicos, que permite que a microscopia de luz convencional obtenha imagens de estruturas em nanoescala, expandindo-as usando um sistema de polímeros.

Primeiro, pegue uma lâmina de amostra de tecido imunomarcado processado e cubra-a com uma solução de ancoragem contendo grupos reativos a proteínas e polímeros. O grupo reativo à proteína do reagente de ancoragem se liga às aminas das biomoléculas dentro das células.

Em seguida, adicione uma solução gelificante adequada sobre a amostra e incube para permitir sua difusão dentro do tecido. O grupo polímero-reativo do reagente de ancoragem se liga aos monômeros livres dentro da solução gelificante, permitindo que as biomoléculas se ancorem ao polímero à medida que ele é polimerizado.

Quando a polimerização da amostra estiver concluída, cubra a lâmina com uma solução de proteinase. As proteinases digerem as proteínas do citoesqueleto para remover qualquer resistência estrutural, permitindo que as células se expandam sem se romper. Após a digestão enzimática, a amostra gelificada se desprende da lâmina e entra em suspensão.

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