Modelo de alça ileal de camundongo: um modelo cirúrgico para estudar a permeabilidade intestinal no camundongo

Em condições patológicas, a desintegração das barreiras epiteliais e endoteliais aumenta a permeabilidade intestinal, fazendo com que o conteúdo intestinal vaze para a vasculatura circundante e para a cavidade abdominal. A permeabilidade intestinal pode ser simulada usando o modelo de alça ileal.

Para começar, prepare um camundongo anestesiado em decúbito dorsal. Faça uma incisão na linha média no abdômen. Coloque uma gaze de algodão estéril umedecida com um tampão adequado sobre a área cirúrgica para manter os órgãos hidratados durante a cirurgia.

Exteriorize o íleo - a parte distal do intestino - e espalhe-o sobre a gaze para expor o mesentério. Identifique dois locais de ligadura no íleo que estão espaçados adequadamente no mesentério e são desprovidos de quaisquer vasos sanguíneos críticos. Em seguida, perfure o mesentério para adicionar ligaduras nos locais identificados.

Em seguida, disseque o íleo para gerar uma alça ileal isolada com suprimento sanguíneo intacto e membrana mesentérica. Depois disso, injete um tampão adequado no circuito para lavar o conteúdo de resíduos.

Agora, ligue as extremidades abertas da alça ileal. Use uma seringa para injetar quimiocina - uma suspensão de proteína quimiotática - na alça, fazendo com que ela infle. Devolva os órgãos ao abdômen.

Suturar a incisão. Permita que o mouse se recupere. Eventualmente, as moléculas de quimiocina passam pela parede ileal para os vasos sanguíneos adjacentes, causando inflamação e influxo de leucócitos.

Depois de atingir um plano cirúrgico de anestesia, comece esfregando o pelo da linha média abdominal com compressas embebidas em álcool ou uma esponja de gaze embebida em etanol a 70%. Não molhe uma grande área de pêlo com álcool para evitar hipotermia. Usando uma tesoura, execute uma laparotomia de linha média. Faça uma incisão horizontal no meio do abdômen e exponha o peritônio, tomando cuidado para não ferir os órgãos intra-abdominais.

Coloque gaze de algodão úmida pré-cortada sobre a cavidade intra-abdominal exposta. Use cotonetes úmidos para mobilizar e exteriorizar o ceco e coloque-o cuidadosamente em gaze de algodão úmida. Em seguida, mobilize e exteriorize suavemente o íleo. Implante pelo menos 6 centímetros de íleo terminal na gaze de algodão úmida sem interromper os vasos mesentéricos e o suprimento de sangue.

Mantenha os tecidos expostos úmidos o tempo todo com HBSS quente. Identifique a artéria principal que irriga o íleo no mesentério próximo ao ceco. Em seguida, localize dois locais de ligadura no mesentério que estejam livres de vasos sanguíneos críticos. Segure firmemente o íleo terminal com uma pinça de tecido rombudo e use uma pinça de ponta fina para fenestrar o mesentério, evitando vasos sanguíneos.

Coloque a sutura de seda na perfuração e dê um nó cirúrgico para criar a primeira ligadura. Use a régua para medir 4 centímetros de distância da primeira ligadura e crie a segunda ligadura. Corte cuidadosamente ao lado de cada ligadura com uma tesoura fina para isolar a alça ileal de 4 centímetros, mantendo o suprimento sanguíneo e a membrana mesentérica intactos.

Lave suavemente o conteúdo do segmento da alça ileal com HBSS quente usando um tubo de alimentação amarelo flexível conectado a uma seringa de 10 mililitros. Certifique-se de lavar o conteúdo luminal da cavidade abdominal para manter o local da cirurgia limpo. Ligue as duas extremidades cortadas da alça ileal lavada com sutura de seda.

Use uma seringa de 1 mililitro com uma agulha de calibre 30 para injetar lentamente 250 microlitros de reagente, como FITC-dextrans ou quimiocina no lúmen intestinal. A alça ileal inflará, causando uma distensão moderada da mucosa.

Feche a parede abdominal usando um porta-agulha, pinça anatômica e suturas de seda 3.0 não absorvíveis com uma agulha de corte reverso. Após secar o animal para evitar hipotermia, coloque-o em uma câmara de anestesia com temperatura regulada durante o período de incubação.