Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:10 min. • July 8th, 2025
As septinas são proteínas do citoesqueleto que compreendem um domínio de ligação ao GTP flanqueado por domínios amino e carboxila terminais, com uma capacidade inerente de se auto-montar em filamentos e estruturas de ordem superior na membrana plasmática interna para diversas funções celulares.
Para estudar as interações septina-membrana in vitro usando uma imitação de membrana biológica, obtenha um tubo de microcentrífuga cortado. Aplique adesivo ultravioleta sobre a borda plana e sem cortes e posicione-a sobre uma lamínula de vidro hidrofilizada tratada com plasma. Após a exposição à luz ultravioleta, o adesivo cura, criando uma câmara de reação aberta.
Transfira vesículas lipídicas unilamelares zwitteriônicas monodispersas da composição lipídica desejada, suplementadas com tampão contendo cátions mono e divalentes, para a câmara. Os cátions facilitam que as vesículas lipídicas sejam adsorvidas e se acumulem na lamínula. Agite suavemente a câmara, iniciando a ruptura da vesícula, e incuba.
As vesículas rompidas se desdobram e se fundem à lamínula por meio de seus grupos de cabeça hidrofílicos, formando manchas planares de bicamada lipídica. As bordas dos adesivos desencadeiam a r
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