Espectroscopia de Flutuação de Fluorescência para Estudar a Interação de Proteínas em Contatos Celulares

As interações célula-célula - mediadas por proteínas em superfícies celulares vizinhas - podem ser estudadas em células vivas usando um ensaio de espectroscopia de flutuação de fluorescência.

Primeiro, pegue culturas de células separadas que expressam um receptor de adesão - uma proteína transmembrana. O receptor nas células das duas populações é marcado com proteínas fluorescentes separadas espectralmente. Esses marcadores fluorescentes estão presentes na região citoplasmática do receptor, evitando interferência na interação célula-célula.

Descarte o meio e adicione tripsina, facilitando o descolamento celular. Misture as duas populações de células e incuba, permitindo que os receptores das células vizinhas formem transinterações homotípicas.

Coloque as células sob um microscópio confocal. Iluminar a amostra utilizando fontes laser de comprimentos de onda adequados, provocando a emissão de ambas as etiquetas fluorescentes. Localize duas células vizinhas com sinais de fluorescência de cores diferentes em contato.

Adquira uma varredura de linha - perpendicular à região das membranas celulares em contato - usando o canal espectral de ambos os rótulos fluorescentes. O laser se concent